公开(公告)号：CN113176406A

公开(公告)日：2021-07-27

申请号：CN202110458511.8

申请日：2021-04-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李向东 ,  姚晓慧 ,  连拯民 ,  刘盼娆 ,  朱振邦 ,  袁丽莉 ,  胡丹鹤

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543 ,  G01N33/535

Abstract: 本发明涉及PCV4cap单克隆抗体及其双单抗夹心ELISA检测试剂，具体公开了抗PCV4cap蛋白的单克隆抗体PCV4‑cap‑6D1，其重链可变区的氨基酸序列和其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑2所示。还公开了抗PCV4cap蛋白的单克隆抗体PCV4‑cap‑4B5，其重链可变区的氨基酸序列和其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3‑4所示。基于公开的单克隆抗体还进一步提供了双抗夹心ELISA检测方法试剂盒。本发明的双抗夹心ELISA检测方法具有快速、稳定、特异性强、灵敏度高的特点，无交叉反应，能够实现猪场中PCV4的流行病学检测。

公开(公告)号：CN113176406B

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202110458511.8

申请日：2021-04-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李向东 ,  姚晓慧 ,  连拯民 ,  刘盼娆 ,  朱振邦 ,  袁丽莉 ,  胡丹鹤

IPC: C07K16/00 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/543 ,  G01N33/535

Abstract: 本发明涉及PCV4cap单克隆抗体及其双单抗夹心ELISA检测试剂，具体公开了抗PCV4cap蛋白的单克隆抗体PCV4‑cap‑6D1，其重链可变区的氨基酸序列和其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑2所示。还公开了抗PCV4cap蛋白的单克隆抗体PCV4‑cap‑4B5，其重链可变区的氨基酸序列和其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3‑4所示。基于公开的单克隆抗体还进一步提供了双抗夹心ELISA检测方法试剂盒。本发明的双抗夹心ELISA检测方法具有快速、稳定、特异性强、灵敏度高的特点，无交叉反应，能够实现猪场中PCV4的流行病学检测。

公开(公告)号：CN113912681B

公开(公告)日：2023-03-21

申请号：CN202111277918.7

申请日：2021-10-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李向东 ,  连拯民 ,  姚晓慧 ,  朱振邦 ,  刘盼娆 ,  胡丹鹤 ,  袁丽莉

IPC: C07K14/01 ,  G01N33/569 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供了一种猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段及其应用和试剂盒，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段是对圆环病毒4型Cap蛋白氨基酸序列进行分析，进一步与猪圆环病毒1‑3型Cap蛋白序列比对筛选，并通过猪圆环病毒4型阳性血清反应筛选得到，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过兼顾特异性及反应灵敏度的筛选手段，得到的猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段具有良好反应原性，可用于临床血清样品中PCV4的抗体检测，能够快速、特异、高通量、高灵敏度地用于PCV4血清学检测，能够实现猪场中PCV4的流行病学监测。

公开(公告)号：CN113912681A

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN202111277918.7

申请日：2021-10-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李向东 ,  连拯民 ,  姚晓慧 ,  朱振邦 ,  刘盼娆 ,  胡丹鹤 ,  袁丽莉

IPC: C07K14/01 ,  G01N33/569 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供了一种猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段及其应用和试剂盒，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段是对圆环病毒4型Cap蛋白氨基酸序列进行分析，进一步与猪圆环病毒1‑3型Cap蛋白序列比对筛选，并通过猪圆环病毒4型阳性血清反应筛选得到，所述猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过兼顾特异性及反应灵敏度的筛选手段，得到的猪圆环病毒4型Cap蛋白检测优势肽段具有良好反应原性，可用于临床血清样品中PCV4的抗体检测，能够快速、特异、高通量、高灵敏度地用于PCV4血清学检测，能够实现猪场中PCV4的流行病学监测。

公开(公告)号：CN111304172A

公开(公告)日：2020-06-19

申请号：CN202010098971.X

申请日：2020-02-18

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  姚晓慧 ,  李拓凡 ,  万志敏 ,  邵红霞 ,  秦爱建

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/90 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明涉及到基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除鸡EphA2基因的细胞系的构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡EphA2基因的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源EphA2敲除的细胞系。通过本发明，构建一种基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡EphA2基因的方法，及其靶向鸡EphA2基因的sgRNA，以期获得鸡源EphA2基因敲除的细胞模型，用于相关疾病的研究。本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡EphA2基因的细胞系构建在相关领域未见报道，本发明将填补国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值。

公开(公告)号：CN110951761A

公开(公告)日：2020-04-03

申请号：CN201911343703.3

申请日：2019-12-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  姚晓慧 ,  李拓凡 ,  李春平 ,  万志敏 ,  邵红霞 ,  秦爱建

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/52

Abstract: 本发明涉及一种检测鸡OASL启动子活性方法，设计扩增出OASL启动子片段的引物，利用限制性内切酶对OASL启动子部分基因片段和pGL3-basic载体进行双酶切，用T4连接酶连接，转化大肠杆菌，经PCR和测序验证后，获得pGL3-basic-OASL报告基因质粒，并用双荧光素酶报告基因试剂盒验证其功能。此发明可检测鸡OASL启动子活性，其具有快速简便、准确灵敏、便于高通量检测等显著优势，对监控禽源病毒对OASL启动子活性影响，以及OASL在不同类型禽源病毒致病过程所起作用具有重要应用价值，填补国内外空白。

公开(公告)号：CN106565829A

公开(公告)日：2017-04-19

申请号：CN201610937115.2

申请日：2016-11-01

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  刘敏 ,  姚晓慧 ,  季星妤 ,  韦芊含 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  田晓彦 ,  万志敏

IPC: C07K14/01 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11

CPC classification number: C07K14/005 ,  C12N15/70 ,  C12N2750/10022 ,  C12N2800/101

Abstract: 本发明还提供了一种GyV9环形病毒VP3蛋白制备方法，该方法基于重组酶ExnaseTM II将线性化的pGEX‑6p‑1载体与GyV9病毒VP3基因片段PCR产物不经酶切连接反应，直接重组克隆技术；并转化到大肠杆菌，实现VP3蛋白表达；其中，PCR扩增所述的GyV9病毒VP3基因片段时所用引物的核苷酸序列如下：上游引物1：5’‑GTTCCAGGGGCCCATGGATGCGACGGGCAC‑3’；下游引物1：5’‑GTTTTCACCGTCATTACAATCTTGCGCCTT‑3’。该方法简化克隆过程，可快速构建GyV9病毒VP3基因的原核表达载体，实现VP3基因快速克隆表达。本发明获得的GyV9病毒VP3表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3蛋白作为GyV9诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展GyV9流行病学调查提供有效诊断试剂；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。