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公开(公告)号：CN111748584A
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN202010467041.7
申请日：2020-05-28
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/866 , C12N15/65 , C12N15/40 , A61K39/12 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种广宿主表达载体、基于该载体制备的重组BacMam病毒及其应用。所述的广宿主表达载体是以pACEMam1杆状病毒转移载体为基础骨架，对其启动子、融合标签与多克隆位点进行改造，使其可以在大肠杆菌、哺乳动物细胞以及昆虫细胞中均能表达目的蛋白。此外，本发明还提供了携带红色荧光蛋白(mcherry)基因的广宿主表达载体，便于鉴定该载体系统是否正常工作并可选择其作为报告基因来表达具有荧光特性的外源基因。基于该广宿主表达载体，本发明构建了表达BVDV2-E2的重组BacMam病毒，该重组BacMam病毒在哺乳细胞表达的同时也能在昆虫细胞以及禽类细胞进行表达，且免疫小鼠后，产生的抗体具有中和BVDV2的活性，且具有淋巴细胞增殖活性，可作为BVDV的候选疫苗。
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公开(公告)号：CN105886474B
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201610244264.0
申请日：2016-04-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/28 , G01N33/577 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了抗鹅CD8α链胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD8+T淋巴细胞中的应用。本发明以携带鹅CD8α链胞外区基因的原核表达载体为模板，设计1对特异性引物扩增得到鹅CD8α链胞外区238‑480bp基因，构建重组原核表达载体，采用大肠杆菌表达鹅CD8α链胞外区80‑160aa，得到重组蛋白rGopET‑30a‑CD8αex。以重组蛋白rGopET‑30a‑CD8αex为免疫原，免疫小鼠，经筛选获得1株稳定分泌抗鹅CD8α链胞外区80‑160aa单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为9E4，保藏号是：CGMCCNO.11194。研究表明，该单克隆抗体能与纯化的重组鹅CD8α链胞外区80‑160aa蛋白反应，同时也能够与分离的鹅、鸭以及鸡的外周血淋巴细胞发生特异性反应。因此，本发明的提出为检测禽类外周血中CD8+T淋巴细胞提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105131103B
公开(公告)日：2018-12-28
申请号：CN201510518946.1
申请日：2015-08-21
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/555 , C12N15/81 , C12N1/19 , A61K38/21 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及重组牛共有ω‑干扰素及其应用，属于分子生物领域。本发明重组牛共有ω‑干扰素(CoBoIFN‑ω)的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示，编码CoBoIFN‑ω的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示。CoBoIFN‑ω在毕赤酵母中实现了高效可溶性分泌表达，并通过抗病毒活性实验结果证实，CoBoIFN‑ω在MDBK和PK‑15细胞上具有更强的抑制VSV病变形成的能力，分别比BoIFN‑ω24高3.93和12.8倍。本发明证实CoBoIFN‑ω的抗病毒活性显著高于其他同类，更适于临床应用与工业化开发。
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公开(公告)号：CN102121013B
公开(公告)日：2013-01-09
申请号：CN200910073285.0
申请日：2009-11-27
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 可高效表达的成熟鸡α干扰素多肽的制备方法，它涉及鸡α干扰素多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低，以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。方法：一、将成熟鸡α干扰素基因中的稀有密码子全部同义替换为大肠杆菌偏好性密码子，经合成得优化后的鸡α干扰素基因；二、克隆到表达载体中，然后转化到大肠杆菌感受态细胞中，经筛选后诱导表达，离心后得湿菌，再进行包涵体的提取和溶解；三、进行复性及纯化，收集蛋白。本发明成熟鸡α干扰素基因能在大肠杆菌中高效表达，表达量可达总菌体蛋白的30％，复性效果好。
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公开(公告)号：CN101591659B
公开(公告)日：2012-05-16
申请号：CN200810064638.6
申请日：2008-05-30
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/21
Abstract: 一种牛干扰素-α多肽基因，它涉及一种牛干扰素-α基因。它解决了目前牛干扰素-α基因在原核表达体系内存在低表达和构建表达载体后转录的mRNA翻译活性低的问题。本发明牛干扰素-α多肽基因序列如SEQ ID NO：1所示。本发明木糖还原酶基因序全长516bp，7bp处有起始密码子ATG，508bp处有终止密码子TAA，有504bp完整的开放阅读框。本发明牛干扰素-α多肽基因可以在原核表达系统中高效表达牛干扰素-α成熟多肽。本发明的牛干扰素-α多肽基因转录后mRNA的二级结构明显优于天然牛干扰素-α多肽基因，提高牛干扰素-α的mRNA翻译活性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101392256B
公开(公告)日：2011-02-23
申请号：CN200710144345.4
申请日：2007-09-21
Applicant: 黑龙江省农业科学院畜牧研究中心 , 东北农业大学
CPC classification number: Y02A50/473
Abstract: 野猪α-干扰素的基因合成和载体构建及产物的生产方法，国内重组菌株或者是表达量不高，或者是产物是以融合状态表达，或者是产物带有纯化标签，或者是没有高密度发酵工艺，存在诸多问题。本发明组成包括：用大肠杆菌偏爱密码子以及密码子对合成了野猪α-干扰素基因，构建高效表达载体并转化高效表达菌株，工程菌高密度发酵、包涵体的分离纯化、目的蛋白的变性、复性和纯化以及表达产物的生物活性测定方法。本发明属于生物制药中的基因工程生产多肽药物技术领域。
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公开(公告)号：CN101603043A
公开(公告)日：2009-12-16
申请号：CN200910072332.X
申请日：2009-06-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/21
Abstract: 一种鹅干扰素－α多肽基因，它涉及一种鹅干扰素－α基因。它解决了目前天然的鹅干扰素－α基因在大肠杆菌内不能表达的问题。本发明鹅干扰素－α多肽基因序列如SEQ ID NO：1所示。本发明木糖还原酶基因序全长505bp，10bp处有起始密码子ATG，496bp处有终止密码子TAA，有489bp完整的开放阅读框。本发明鹅干扰素－α多肽基因能够在大肠杆菌表达系统中高效表达鹅干扰素－α成熟多肽。本发明的鹅干扰素－α多肽基因转录后mRNA的二级结构明显优于天然鹅干扰素－α多肽基因，提高了鹅干扰素－α在大肠杆菌系统中的表达量，实现了高效表达。
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公开(公告)号：CN100480271C
公开(公告)日：2009-04-22
申请号：CN200410043953.2
申请日：2004-10-20
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种基因VII型新城疫病毒NP抗体的重组原核表达检测抗原及制备方法。基因VII型新城疫病毒NP抗体的重组原核表达检测抗原是应用RT-PCR技术扩增基因VII型新城疫病毒NP基因基础上，将NP基因定向亚克隆到原核表达载体pGEX-6p上，然后转化大肠杆菌表达系统进行诱导表达所得到的基因工程蛋白，该蛋白的表达形式是融合蛋白，表达的融合蛋白的分子量为81.9ku。通过本方法制备的基因工程重组蛋白可用于VII型新城疫抗NP蛋白抗体的检测。
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公开(公告)号：CN100480268C
公开(公告)日：2009-04-22
申请号：CN200610009803.9
申请日：2006-03-13
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是兔抗鸭IgY+IgY(ΔFc)(H+L)辣根过氧化物酶标记抗体及其制备方法。本发明辣根过氧化物酶标记兔抗鸭IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体是利用盐析、层析等蛋白纯化技术和酶标记技术，在提纯鸭卵黄免疫球蛋白的基础上，免疫家兔制备并纯化兔抗鸭IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体，再通过改良过碘酸钠法将其与辣根过氧化物酶结合，并采用盐析及Sephodex G200纯化，从而制备辣根过氧化物酶标记兔抗鸭IgY+IgY(ΔFc)(H+L)抗体。应用此酶标记抗体可以建立多种鸭类疫病检测技术，预防鸭类多种传染病。
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公开(公告)号：CN201572207U
公开(公告)日：2010-09-08
申请号：CN200920292680.3
申请日：2009-12-30
Applicant: 东北农业大学
IPC: A61D1/00
Abstract: 一种奶牛乳头管狭窄电热治疗仪，其特征在于：包括电热头、套管、电热器和温度控制调节器，套管的一端插入电热器的一端内，该套管的另一端内插入电热头；在该电热器的另一端装有所述的温度控制调节器，该温度控制调节器的温度传感器安装在所述的电热器内，该温度控制调节器的控制输出端与该电热器的电热元件连接。本实用新型的优点是：电热头可以加热到300℃以上，对生物体组织能够瞬间碳化，在透乳针的辅助下将其引入狭窄(或闭锁)乳头管部，能够迅速将赘生组织除掉，达到治疗目的，血管同时被凝固，避免了出血。具有操作简单、迅速，容易护理，并发症少和治愈率高的特点。
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