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公开(公告)号：CN103450355B
公开(公告)日：2016-06-29
申请号：CN201310381419.1
申请日：2013-08-28
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及重组牛alpha干扰素，其相应的基因为牛共有IFN-α基因（CoBoIFN-α）、遗传密码子优化的牛共有IFN-α基因（Y-CoBoIFN-α）和遗传密码子优化的牛IFN-αG亚型基因（Y-BoIFN-αG），以及编码的蛋白在抗病毒方面的生物活性。本发明首次设计并合成了CoBoIFN-α基因，并首次鉴定了CoBoIFN-α和BoIFN-αG的抗病毒活性，结果证实BoIFN-α-G和CoBoIFN-α的抗病毒活性至少高于其他同类十倍，更适于临床应用与工业化开发。
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公开(公告)号：CN103450355A
公开(公告)日：2013-12-18
申请号：CN201310381419.1
申请日：2013-08-28
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及重组牛alpha干扰素，其相应的基因为牛共有IFN-α基因（CoBoIFN-α）、遗传密码子优化的牛共有IFN-α基因（Y-CoBoIFN-α）和遗传密码子优化的牛IFN-αG亚型基因（Y-BoIFN-αG），以及编码的蛋白在抗病毒方面的生物活性。本发明首次设计并合成了CoBoIFN-α基因，并首次鉴定了CoBoIFN-α和BoIFN-αG的抗病毒活性，结果证实BoIFN-α-G和CoBoIFN-α的抗病毒活性至少高于其他同类十倍，更适于临床应用与工业化开发。
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公开(公告)号：CN102121013A
公开(公告)日：2011-07-13
申请号：CN200910073285.0
申请日：2009-11-27
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 可高效表达的成熟鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法，它涉及鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低，以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。可高效表达的成熟鸡α干扰素基因的序列见SEQ ID NO：1。方法：一、将成熟鸡α干扰素基因中的稀有密码子全部同义替换为大肠杆菌偏好性密码子，经合成得优化后的鸡α干扰素基因；二、克隆到表达载体中，然后转化到大肠杆菌感受态细胞中，经筛选后诱导表达，离心后得湿菌，再进行包涵体的提取和溶解；三、进行复性及纯化，收集蛋白。本发明成熟鸡α干扰素基因能在大肠杆菌中高效表达，表达量可达总菌体蛋白的30％，复性效果好。
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公开(公告)号：CN101870980A
公开(公告)日：2010-10-27
申请号：CN201010175292.4
申请日：2010-05-18
Applicant: 东北农业大学
Abstract: Asia 1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白抗原表位缺失感染性cDNA及其构建方法，它涉及口蹄疫病毒3A非结构蛋白抗原表位缺失感染性cDNA及其构建方法。它解决了现有灭活疫苗纯化过程中很难监测，所以残留的非结构蛋白会干扰对自然感染动物的诊断，诊断的准确性低的问题。序列见SEQ ID NO：1。方法：1.从pBSAs全长重组质粒中克隆3A14L和3A14R，得到3A14L PCR产物和3A14R PCR产物，然后融合PCR回收融合产物；2.双酶切pBSAs全长重组质粒和融合产物，再连接并构建重组质粒pBSAs-3A14D即完成。本发明中缺失3A非结构蛋白的一部分，不会残留此部分的非结构蛋白，诊断的准确性高。
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公开(公告)号：CN1317563C
公开(公告)日：2007-05-23
申请号：CN200410043811.6
申请日：2004-08-18
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , C12Q1/68 , C07K14/005
Abstract: 本发明提供的是一种检测鹅细小病毒抗体的重组原核表达蛋白抗原及其制备方法。本产品制备过程包括：(1)设计扩增GPV-VP3基因的特异性引物；(2)通过PCR扩增获得VP3基因片段；(3)对VP3基因进行克隆、测序鉴定；(4)将VP3基因定向亚克隆至pGEX-6p-1原核表达载体；(5)VP3基因在大肠杆菌的诱导表达；(6)VP3基因表达蛋白的亲合层析纯化。本产品可作为检测鹅细小病毒抗体的间接-ELISA及Dot-ELISA方法的检测抗原，也可作为预防鹅细小病毒感染的基因工程亚单位疫苗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1821397A
公开(公告)日：2006-08-23
申请号：CN200510127371.7
申请日：2005-12-22
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是鹅重组I、II型干扰素的制备方法。通过RT－PCR扩增编码鹅IFN－α成熟蛋白及编码IFN－γ成熟蛋白基因，对基因序列分别测序鉴定，将目的基因分别定向亚克隆至pET30a原核表达载体，分别在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中，进行诱导表达，并对融合表达的目的蛋白分别进行亲合层析纯化、分别定向亚克隆至pBlueBacHis2A和pMel BacA杆状病毒转移载体，转移载体与线性化的杆状病毒DNA分别共转染昆虫细胞Sf9，重组病毒感染昆虫细胞，真核表达系统表达鹅mIFN－α与mIFN－γ。本方法得到的产品可作为鹅用抗病毒性疫病的药物及免疫佐剂增强鹅用疫苗的免疫效力。
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公开(公告)号：CN1648254A
公开(公告)日：2005-08-03
申请号：CN200410043810.1
申请日：2004-08-18
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/33 , C12N7/01 , C07K14/005 , C12N15/70 , C12P21/02
Abstract: 本发明提供的是一种鹅细小病毒VP1与VP3基因非重叠序列原核表达蛋白及其制备方法。本产品制备过程包括：(1)、设计扩增鹅细小病毒VP1与VP 3基因核苷酸非重叠序列的特异性引物；(2)、通过PCR扩增获得VP1与VP3基因非重叠序列片段；(3)、对VP1与VP3基因非重叠序列进行克隆、测序鉴定；(4)、将VP1与VP3基因非重叠序列定向亚克隆至pGEX－6p－1原核表达载体；(5)、VP1与VP3基因非重叠序列在大肠杆菌的诱导表达；(6)VP1与VP3基因非重叠序列表达蛋白的亲合层析纯化。本产品可作为鉴别鹅细小病毒抗体及鹅细小病毒VP3基因亚单位抗体的间接－ELISA及Dot－ELISA方法的检测抗原。
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公开(公告)号：CN1635121A
公开(公告)日：2005-07-06
申请号：CN200410044105.3
申请日：2004-12-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/869 , C12N15/64
Abstract: 本发明提供的是一种鸭瘟疱疹病毒转移载体及其克隆方法。它是利用兼并PCR克隆鸭瘟疱疹病毒UL24、TK和gH基因，在获得以上3个基因序列的基础上，利用PCR克隆鸭瘟疱疹病毒TK基因及其侧翼共2.9kb的DNA序列，将其亚克隆入克隆载体pUC18，构建重组质粒pUC－TK2.9，将1acZ基因表达盒插入载体pUC－TK2.9中的TK基因内，构建成的鸭瘟疱疹病毒重组转移载体pUC－TK2.9－1acZ。本产品可用来构建鸭瘟疱疹病毒基因缺失疫苗。可用来构建重组活载体疫苗。
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公开(公告)号：CN108841793B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN201810586835.8
申请日：2018-06-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/40 , G01N33/577 , G01N33/573 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了抗鸭Mx‑A单克隆抗体及其在检测鸭Mx蛋白中的应用。本发明以含有鸭Mx基因的重组质粒为模板，设计1对特异性引物扩增得到编码鸭Mx N端1‑100aa的基因片段Mx‑A。构建其重组原核表达载体pET‑30a‑Mx‑A和pET‑32a‑Mx‑A，采用大肠杆菌原核表达技术表达鸭Mx‑A，得到重组蛋白rDupET‑30a‑Mx‑A和rDupET‑32a‑Mx‑A。以重组蛋白rDupET‑30a‑Mx‑A为免疫原，免疫小鼠，经筛选获得1株稳定分泌抗鸭Mx‑A的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为4B6，保藏号是：CGMCC NO.15287。研究表明，该单克隆抗体能与原核表达的重组鸭Mx‑A蛋白反应，同时也能够与转染真核表达载体pcDNA3.1‑Mx的鸡胚成纤维细胞表达的鸭Mx蛋白及感染DHAV‑3后鸭胚不同组织表达的鸭Mx蛋白发生特异性反应。因此，本发明的提出为检测鸭Mx蛋白提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN110095607A
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201910304998.7
申请日：2019-04-16
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/576 , G01N33/531
Abstract: 本发明公开了一种用于检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒血清抗体的通用型间接ELISA试剂盒及其应用。本发明建立了一种基于VP0重组蛋白检测1型和3型DHAV血清抗体的通用型间接ELISA检测方法，该方法是以原核表达的1型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原，经Western blotting和间接ELSIA方法证实该VP0重组蛋白即可以与1型DHAV血清抗体发生特异性反应，也能与3型DHAV血清抗体发生特异性反应，因此以1型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原进行间接ELISA检测可判断被检鸭血清是否含有1型和3型鸭甲型肝炎病毒的抗体及其抗体水平，本发明的提出为有效防治鸭甲型肝炎提供了新的快速检测手段。
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