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公开(公告)号：CN112251543A
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202011345080.6
申请日：2020-11-26
Applicant: 西南大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒RT‑RPA检测的特异引物组，所述特异引物组为CY1‑F/R或者CY3‑F/R或者CY5‑F/R。还公开了含有所述特异引物组的检测试剂盒，还包含探针CY1‑Probe。还公开了一种柑橘黄化脉明病毒的RT‑RPA检测方法，包括如下步骤：1)提取待测样品RNA；2)利用提取的样品RNA进行RT‑RPA反应，RT‑RPA反应采用权利要求1中所述的特异引物或者权利要求2所述的试剂盒；3)RT‑RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明检测方法，灵敏度高、特异性强、反应快速、操作简单、适用性好，可肉眼直接观察结果，无需大型精密仪器。
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公开(公告)号：CN111690759A
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN202010772043.7
申请日：2020-08-04
Applicant: 西南大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/64
Abstract: 本发明公开了一种柑橘溃疡病菌RPA检测的特异引物，序列为：上游引物：5’-GTTGGTGTCGTCGCTTGTATGGACTATAGT-3’，下游引物：5’-GCCGCGCACGGGTGCAAAAAATCTTCAACTTC-3’。还公开了含有该特异引物的柑橘溃疡病菌RPA检测试剂盒，及一种柑橘溃疡病菌RPA检测的方法：1)提取待测样品基因组DNA；2)利用提取的样品基因组DNA进行RPA反应，所用特异引物为权利要求1中所述的特异引物；3)RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法具强特异性和高灵敏等特点，不需要PCR仪等热循环设备，操作简单。
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公开(公告)号：CN110616202A
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201910940545.3
申请日：2019-09-30
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株，该弱毒株相对于强毒株产生的基因突变点是：TGB区域的T5306→C，A5482→G，T5792→C，A6058→G，C6096→T，以及位于CP基因上的T6817→C。还公开了该弱毒分离株在防治柑橘黄化脉明病毒强毒株系侵染方面的应用。本发明获得了柑橘黄化脉明病毒弱毒分离株AY001，AY001可有效保护植株免受CYVCV强毒株系的侵染。
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公开(公告)号：CN105176934B
公开(公告)日：2018-09-18
申请号：CN201510678752.8
申请日：2015-10-16
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种柑桔黄化脉明病毒长期离体保存方法，在有活性的柑桔黄化脉明病毒提取液中加入等体积的保护剂，颠倒混合后迅速置于液氮中2～3min，然后转移至‑80℃超低温冰箱保存；所述保护剂为用PBS缓冲液配制的含13～17％葡萄糖，5～7％蛋白胨以及10～30％甘油的溶液；所述的PBS缓冲液为：将NaCl 6.8～8g，Na2HPO4·12H2O 2.2～2.9g，KH2PO40.1～0.2g，KCl 0.15～0.2g，NaN30.2～0.5g，吐温‑200.5～1.5mL，1000mL去离子水溶解灭菌备用。本方法离体保存的柑桔黄化脉明病毒在保存2年后仍能保持极高的侵染活性。
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公开(公告)号：CN108531502A
公开(公告)日：2018-09-14
申请号：CN201810367772.7
申请日：2018-04-23
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑桔衰退病毒侵染性克隆的构建方法，步骤：(1)三个覆盖CTV基因组全长特异片段CTV1、CTV2、CTV3的长链RT-PCR扩增；(2)三元穿梭载体pCY线性化；(3)TAR克隆：采用醋酸锂转化法将CTV1、CTV2、CTV3回收片段和线性化的三元穿梭载体pCY共转化酵母菌YPH501；(4)转化农杆菌；(5)农杆菌介导接种，从而鉴定获得CTV侵染性克隆。还公开了侵染性克隆的接种方法：(1)播种：柑桔种子剥去外种皮播于培养基，暗培养；2)离心收集携带CTV侵染性克隆与Hc-Pro或P19表达质粒的农杆菌细胞，用接种缓冲液悬浮；(3)真空浸润；(4)暗培养。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105176935B
公开(公告)日：2018-07-20
申请号：CN201510679111.4
申请日：2015-10-16
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种快速、简捷提取有活性的柑桔黄化脉明病毒的方法，通过将病株组织于液氮中研磨后，加入提取缓冲液进行匀浆，纱布过滤后的滤液经4℃低速离心，上清用Miracloth滤膜过滤后进行超速离心，得到的粗提液混合后再次超速离心，即获得的具有极高侵染力的病毒颗粒。本方法在5h内即可完成病毒的提取，且能高效侵染多种柑桔品种，提取的病毒可应用于制备高度专一的抗血清，致病性鉴定、病毒特性分析，以及抗性品种测定。本发明方法简便、快捷、能高效保持柑桔黄化脉明病毒的活性。
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公开(公告)号：CN108103241A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711205900.X
申请日：2017-11-27
Applicant: 西南大学
Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄脉病毒微滴数字PCR定量检测试剂盒，包括总RNA提取试剂，引物CP7、CP8和CP9，T7体外转录试剂盒，QX200 ddPCR EvaGreen supermix试剂盒。还公开了其检测方法，步骤：(1)抽提总RNA；(2)用CP7和CP9扩增总RNA，转录合成cRNA，利用CP9对cRNA标准品进行逆转录反应，获得cDNA；CP7：5′‑TAATACGACTCACTATAGGGAGGCTATCGGGAAAGCTTGG‑3′，CP9：5′‑CGTTTCGTTCAACAACGGGG‑3′；(3)以cDNA为模板，利用特异性引物CP8、CP9进行数字ddPCR检测。
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公开(公告)号：CN104862426B
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201510330728.5
申请日：2015-06-15
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明公开了一种柑桔褪绿矮化相关病毒的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔褪绿矮化相关病毒LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总DNA为模板，应用上述的内外引物对在63～65℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应60～80min，扩增完成后78～82℃反应5～10min中止反应，然后根据浑浊度或利用荧光染料染色通过颜色变化或电泳条带进行可视化判断，鉴定植株样品是否感染柑桔褪绿矮化相关病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对样品的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高。
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公开(公告)号：CN105861747A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610246323.8
申请日：2016-04-20
Applicant: 西南大学
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107 , C12Q2545/114 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明提供一种快速鉴定柑橘脉突病毒侵染植株的方法，包括如下步骤：（1）取待测植株根部，提取总RNA；（2）以提取的总RNA为模板，利用柑橘脉突病毒的特异性下游引物EVqR4进行逆转录反应，获得cDNA；（3）以步骤（2）制得的cDNA为模板，利用特异性引物EVqF4、EVqR4进行实时荧光定量RT?PCR检测，并制作标准曲线；（4）根据上述步骤（3）的检测结果判断植株的带病情况，对带病植株的病毒进行定量计算。本发明对柑橘脉突病毒侵染植株的鉴定具有速度快、准确度高及重复性强的特点，并可对植株内的CEVE病毒进行定量分析。
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公开(公告)号：CN105176935A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510679111.4
申请日：2015-10-16
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种快速、简捷提取有活性的柑桔黄化脉明病毒的方法，通过将病株组织于液氮中研磨后，加入提取缓冲液进行匀浆，纱布过滤后的滤液经4℃低速离心，上清用Miracloth滤膜过滤后进行超速离心，得到的粗提液混合后再次超速离心，即获得的具有极高侵染力的病毒颗粒。本方法在5h内即可完成病毒的提取，且能高效侵染多种柑桔品种，提取的病毒可应用于制备高度专一的抗血清，致病性鉴定、病毒特性分析，以及抗性品种测定。本发明方法简便、快捷、能高效保持柑桔黄化脉明病毒的活性。
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