公开(公告)号：CN114317598A

公开(公告)日：2022-04-12

申请号：CN202110957438.9

申请日：2021-08-18

Applicant: 西南大学

Inventor： 宋震 ,  马志敏 ,  宾羽 ,  许建建 ,  周常勇

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/29 ,  C12N15/40 ,  A01H5/00 ,  A01H6/78

Abstract: 本发明提供一种病毒诱导的基因沉默载体及其应用和柑橘病害防控的方法。所述基因沉默载体是基于柑橘叶斑驳病毒的侵染性克隆质粒而构建的。所述基因沉默载体是通过将目的基因片段整合到CLBV侵染性克隆质粒pCLBV201构建得到的重组质粒载体，目的基因片段优选反向连接在所述质粒载体pCLBV201中CLBV基因组cp基因终止子与3’UTR之间。本发明提供的靶向柑橘lob基因的基因沉默载体阻断柑橘溃疡病菌与靶标基因结合，可以达到良好的溃疡病防控效果，并且成本低廉，环境友好。本发明构建的靶向CYVCV基因组不同ORF的基因沉默载体能够有效抑制CYVCV在植株内转录表达，进而实现对柑橘黄脉病的预防和控制。

公开(公告)号：CN112251543A

公开(公告)日：2021-01-22

申请号：CN202011345080.6

申请日：2020-11-26

Applicant: 西南大学

Inventor： 宋震 ,  周常勇 ,  马志敏 ,  许建建

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种柑橘黄化脉明病毒RT‑RPA检测的特异引物组，所述特异引物组为CY1‑F/R或者CY3‑F/R或者CY5‑F/R。还公开了含有所述特异引物组的检测试剂盒，还包含探针CY1‑Probe。还公开了一种柑橘黄化脉明病毒的RT‑RPA检测方法，包括如下步骤：1)提取待测样品RNA；2)利用提取的样品RNA进行RT‑RPA反应，RT‑RPA反应采用权利要求1中所述的特异引物或者权利要求2所述的试剂盒；3)RT‑RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明检测方法，灵敏度高、特异性强、反应快速、操作简单、适用性好，可肉眼直接观察结果，无需大型精密仪器。

公开(公告)号：CN111690759A

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN202010772043.7

申请日：2020-08-04

Applicant: 西南大学

Inventor： 宋震 ,  周常勇 ,  马志敏 ,  段玉 ,  许建建 ,  宾羽

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/64

Abstract: 本发明公开了一种柑橘溃疡病菌RPA检测的特异引物，序列为：上游引物：5’-GTTGGTGTCGTCGCTTGTATGGACTATAGT-3’，下游引物：5’-GCCGCGCACGGGTGCAAAAAATCTTCAACTTC-3’。还公开了含有该特异引物的柑橘溃疡病菌RPA检测试剂盒，及一种柑橘溃疡病菌RPA检测的方法：1)提取待测样品基因组DNA；2)利用提取的样品基因组DNA进行RPA反应，所用特异引物为权利要求1中所述的特异引物；3)RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法具强特异性和高灵敏等特点，不需要PCR仪等热循环设备，操作简单。

公开(公告)号：CN111690777B

公开(公告)日：2023-06-02

申请号：CN202010680187.X

申请日：2020-07-15

Applicant: 西南大学

Inventor： 宋震 ,  周常勇 ,  段玉 ,  许建建 ,  马志敏 ,  宾羽

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/94

Abstract: 本发明公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测的特异引物，上游引物：5’‑ATGAACACTCACGGCGATGAAATTCCCACA‑3’，下游引物：5’‑GGATCCCCCATTAAATTCCATAAGCCAGTC‑3’。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测试剂盒，含有前述的特异引物。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测的方法：1)提取待测样品RNA；2)利用提取的样品RNA进行RT‑RPA反应，所用特异引物为前述的特异引物；3)RT‑RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法特异性强、灵敏度和RT‑PCR相当，操作简单便捷，检测时间很短。

公开(公告)号：CN111690759B

公开(公告)日：2023-10-17

申请号：CN202010772043.7

申请日：2020-08-04

Applicant: 西南大学

Inventor： 宋震 ,  周常勇 ,  马志敏 ,  段玉 ,  许建建 ,  宾羽

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/64

Abstract: 本发明公开了一种柑橘溃疡病菌RPA检测的特异引物，序列为：上游引物：5’‑GTTGGTGTCGTCGCTTGTATGGACTATAGT‑3’，下游引物：5’‑GCCGCGCACGGGTGCAAAAAATCTTCAACTTC‑3’。还公开了含有该特异引物的柑橘溃疡病菌RPA检测试剂盒，及一种柑橘溃疡病菌RPA检测的方法：1)提取待测样品基因组DNA；2)利用提取的样品基因组DNA进行RPA反应，所用特异引物为权利要求1中所述的特异引物；3)RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法具强特异性和高灵敏等特点，不需要PCR仪等热循环设备，操作简单。

公开(公告)号：CN111690777A

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN202010680187.X

申请日：2020-07-15

Applicant: 西南大学

Inventor： 宋震 ,  周常勇 ,  段玉 ,  许建建 ,  马志敏 ,  宾羽

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/94

Abstract: 本发明公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测的特异引物，上游引物：5’-ATGAACACTCACGGCGATGAAATTCCCACA-3’，下游引物：5’-GGATCCCCCATTAAATTCCATAAGCCAGTC-3’。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测试剂盒，含有前述的特异引物。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测的方法：1)提取待测样品RNA；2)利用提取的样品RNA进行RT-RPA反应，所用特异引物为前述的特异引物；3)RT-RPA反应完成后对反应产物进行检测，检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法特异性强、灵敏度和RT-PCR相当，操作简单便捷，检测时间很短。