一种miR-181b靶基因筛选的方法

    公开(公告)号:CN108531544A

    公开(公告)日:2018-09-14

    申请号:CN201810193262.2

    申请日:2018-03-09

    CPC classification number: C12Q1/66 C12Q1/6851 G01N33/68

    Abstract: 本发明公开了一种筛选miR-181b靶基因的方法,该方法以山羊卵巢组织cDNA为模板,在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下,利用引物RUNX1在PCR条件下进行扩增,得到确定的PCR产物为RUNX1基因3'UTR区的序列;然后构建双荧光素酶报告系统,检测荧光素酶活性,初步鉴定miR-181b的靶基因;采用RT-qPCR法检测miR-181b对RUNX1基因在mRNA水平的影响;采用Western blot法检测miR-181b对RUNX1基因在蛋白水平的影响。明确了RUNX1 3'UTR区存在与miR-181b的结合位点,利用现代分子生物技术验证了miR-181b与靶基因RUNX1的靶向调控关系,miR-181b可以抑制RUNX1基因在mRNA和蛋白水平上的表达,进一步确认了RUNX1是miR-181b的目标靶基因。为进一步研究miR-181b对奶山羊乳卵巢发育和产羔性能的影响奠定了基础。

    一种miR-574-5p靶基因筛选的方法

    公开(公告)号:CN108300761A

    公开(公告)日:2018-07-20

    申请号:CN201810193251.4

    申请日:2018-03-09

    Abstract: 本发明公开了一种筛选miR-574-5p靶基因的方法,该方法以山羊基因组DNA序列为模板,在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下,利用MAP3K9引物在PCR条件下进行扩增MAP3K9基因3'UTR区;构建双荧光素酶报告系统,检测荧光素酶活性,结果显示,miR-574-5p降低了荧光素酶的活性,初步确定MAP3K9为miR-574-5p的靶基因;采用RT-qPCR和Western blot方法验证miR-574-5p对MAP3K9基因在mRNA和蛋白水平表达的影响。结果显示:miR-574-5p可以抑制MAP3K9基因在mRNA和蛋白水平上的表达,进一步确定miR-574-5p可与MAP3K93'UTR结合,MAP3K9是miR-574-5p的靶基因,为进一步研究miR-574-5p对奶山羊乳腺发育和泌乳功能的影响奠定了基础。

    利用核仁磷酸蛋白基因选择山羊生长性状的分子标记方法

    公开(公告)号:CN107287301A

    公开(公告)日:2017-10-24

    申请号:CN201710501338.9

    申请日:2017-06-27

    Abstract: 本发明公开了一种利用核仁磷酸蛋白基因选择山羊生长性状的分子标记方法,该方法以山羊基因组DNA序列为模板,在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下,利用4对引物在PCR条件下进行扩增Nucleophosmin(NPM)基因5'UTR区和外显子1,根据琼脂糖凝胶电泳对其进行目的片段大小判定;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测引物P1-P4的PCR扩增产物,发现引物P3扩增位点存在18bp的碱基缺失,然后对引物P3的扩增产物进行基因分型和基因频率分析,以及与关中奶山羊和波尔山羊的生长性状之间进行关联分析;结果表明:Nucleophosmin基因外显子1由引物P3检测的SNPs位点可用作山羊产生长性状选择的分子标记。

    一种利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法

    公开(公告)号:CN103232970B

    公开(公告)日:2015-05-20

    申请号:CN201310171828.9

    申请日:2013-05-06

    Abstract: 本发明公开了一种利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法,该方法步骤如下:制备I型液态鼠尾胶原;分离新西兰大白兔的输卵管上皮细胞,接种于I型液态鼠尾胶原上,培养建立输卵管上皮细胞的三维培养体系;分离新西兰大白兔子宫内膜上皮细胞,接种于I型液态鼠尾胶原上,培养建立子宫内膜上皮细胞的三维培养体系;倾去输卵管上皮细胞的三维培养体系中的培养液,换成CZB为培养液,将小鼠受精卵置于输卵管上皮细胞的三维培养体系培养;倾去子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中的培养液,换成CZB为培养液,将发育至桑葚胚阶段的小鼠胚胎转入子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中培养。本发明可显著提高小鼠胚胎的体外发育率,改善发育质量。

    一种肉用绵羊专用代乳料配方及制备方法

    公开(公告)号:CN103238751B

    公开(公告)日:2015-04-08

    申请号:CN201310180733.3

    申请日:2013-05-10

    Abstract: 本发明公开了一种肉用绵羊专用代乳料配方及制备方法,配方包括乳清粉、膨化玉米粉、大豆粕、大豆浓缩蛋白、脂肪粉、全脂奶粉、石粉、磷酸氢钙、食盐、微生态制剂、肉羊专用有机多矿、肉羊专用水溶性多维、20%莫能菌素、酶制剂和甜味剂;制备方法为:将细石粉、磷酸氢钙、细食盐、微生态制剂、肉羊专用有机多矿、肉羊专用水溶性多维、莫能菌素、酶制剂、甜味剂等小料混匀制备成半成品A;再将膨化玉米粉、大豆粕、大豆浓缩蛋白超微粉碎后与A和脂肪粉、全脂奶粉采用不锈钢混合机混合均匀。本发明提供的肉用绵羊专用代乳料配方采用多种幼畜易消化吸收的原料,辅助添加有机活性成分,制备方法简单易操作,具有良好的发展前景。

    一种利用双基因聚合效应选育奶山羊产奶性状的方法

    公开(公告)号:CN103468819A

    公开(公告)日:2013-12-25

    申请号:CN201310449829.5

    申请日:2013-09-27

    Abstract: 本发明公开了一种利用双基因聚合效应选育奶山羊产奶性状的方法,以奶山羊基因组DNA为模板,利用2对引物分别扩增催乳素受体(PRLR)基因的外显子9和乳蛋白转录因子(ELF5)基因内含子1,以浓度为1.5%的琼脂糖凝胶电泳对各扩增产物进行大小判定,采用DNA测序技术筛查2对引物扩增产物的位点突变,然后利用浓度为3.5%的琼脂糖凝胶电泳对PRLR和ELF5基因的2个位点的SNPs进行基因分型和基因频率分析,分析不同基因型组合与产奶性状之间的关系,筛选最佳基因型组合。

    一种育肥羊专用全混颗粒饲料配方及制备方法

    公开(公告)号:CN103238750A

    公开(公告)日:2013-08-14

    申请号:CN201310180732.9

    申请日:2013-05-10

    CPC classification number: Y02P60/877

    Abstract: 本发明公开了一种育肥羊专用全混颗粒饲料配方及制备方法,配方为玉米、大麦秸秆、葵花饼、苜蓿草粉、棉籽粕、次粉、麦芽根和大豆粕、石粉、糖蜜、膨化尿素、小苏打、食盐、肉羊0.2%多矿、磷酸氢钙、肉羊多维、莫能菌素、甜味剂和香味剂,营养素为干物质、粗蛋白、钙、总磷、食盐、羊消化能、粗纤维;制备方法为:石粉、小苏打、食盐、肉羊0.2%多矿、磷酸氢钙、肉羊多维、莫能菌素、甜味剂和香味剂混合制备半成品A;玉米、葵花饼、苜蓿草粉、膨化尿素、棉籽粕、次粉、麦芽根大豆粕、大麦秸秆粉碎;采用混合机混合均匀,通过制粒工艺制成颗粒状,将糖蜜通过喷涂工艺喷涂到颗粒饲料表面。本发明符合国家的绿色食品理念,具有良好的发展前景。

    检测山羊促性腺激素释放激素和生长分化因子9的碱基突变多态性的方法

    公开(公告)号:CN101845507B

    公开(公告)日:2012-05-09

    申请号:CN201010199506.1

    申请日:2010-06-12

    Abstract: 本发明公开了一种检测山羊促性腺激素释放激素基因外显子4和生长分化因子9基因外显子2三个碱基突变多态性的方法,以山羊基因组DNA序列为模板,在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下,利用2对引物P1和P2在PCR条件下进行扩增,根据琼脂糖凝胶电泳对其进行目的片段大小判定;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测引物P1和P2的PCR扩增产物,发现这两个扩增位点存在3个碱基的突变,然后对两个基因的SNPs进行基因分型和基因频率分析,以及与布尔山羊和西农萨能奶山羊的产羔性状之间进行关联分析;结果表明:GnRH基因外显子4(包含部分内含子3和3′非翻译区)和GDF9基因外显子2基因由引物P1和P2检测的SNPs位点可用作山羊产羔性状选择的分子标记。

    一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的DNA银染方法

    公开(公告)号:CN101865798A

    公开(公告)日:2010-10-20

    申请号:CN201010199444.4

    申请日:2010-06-12

    Abstract: 本发明公开了一种聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳中的DNA银染方法,先用0.1%AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝胶10–15min,用蒸馏水清洗2次,其次用0.04%的Na2CO3、2mL的37%HCOH/L、2%的NaOH混合溶液显色5–6min,蒸馏水冲洗2次即可完成全部染色过程。传统的DNA银染方法需要5-6种化学试剂,配制4中溶液,花费40-60min才能完成染色步骤,而本方法只需要4种化学试剂,配制2种溶液,花费20min就可以达到与传统染色方法相同的结果,而且在变性聚丙烯酰胺电泳(PAGE)中,本染色方法可以将DNA的量降低到0.44ng;在非变性聚丙烯酰胺电泳(PAGE)中可以将DNA的量降低到3.5ng。本方法与传统染色方法相比,不仅节约了时间,降低额成本,而且提高了检测的灵敏度。

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