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公开(公告)号：CN103173521A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201110432297.5
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A.通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B.选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种灭菌消毒、萌发取叶片提取DNA；C.SouthernBlot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D.普通PCR鉴定内标准基因引物物种特异性；E.普通PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。确定两对引物做转基因小麦检测时的定性或定量检测内标准基因引物。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组，通过Real-timePCR检测，线性关系良好。
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公开(公告)号：CN103014012A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210574749.8
申请日：2012-12-26
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/13 , C07K16/14 , C07K19/00 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了镰刀菌特异单链抗体及制备方法和应用，从串珠镰刀菌菌丝中抽提细胞壁蛋白，免疫来亨母鸡后提取脾脏细胞，利用分子克隆方法和技术构建单链抗体基因文库，通过噬菌体展示技术筛选、PhageELISA、表达ELISA和序列测定，获得了一个高亲和力的镰刀菌特异单链抗体及其编码基因，申请人将其命名为FvSG7，并与碱性磷酸酶基因构建融合蛋白表达载体，在大肠杆菌中进行可溶性表达，得到镰刀菌特异单链抗体FvSG7和FvSG7-AP融合蛋白，该抗体和融合蛋白可用于在植物或植物来源产品中镰刀菌污染情况的免疫学检测，为镰刀菌病情调查及出入境粮食和饲料中镰刀菌污染情况的检验检疫提供可靠有效的检测手段。
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公开(公告)号：CN101812517B
公开(公告)日：2012-09-05
申请号：CN201010028986.5
申请日：2010-01-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物抗病育种领域，具体涉及一种小麦赤霉病穗腐和苗腐抗性的分子标记的制备及应用。本发明的特征是，通过自行设计的一对引物，从小麦基因组扩增出CYP709C1基因的特异片段，以该基因的特异性片段制备小麦赤霉病穗腐和苗腐抗性的分子标记。检测分析表明，该基因的相对表达量与植物的抗赤霉病和苗腐病抗性紧密相关。本发明仅仅采用一个分子标记，即可鉴定不同小麦品种的在苗期和花期的小麦赤霉病穗腐和苗腐的抗性水平。本发明的分子标记可应用于小麦抗赤霉病苗腐和穗腐材料的筛选及分子育种上。
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公开(公告)号：CN102443589A
公开(公告)日：2012-05-09
申请号：CN201010506091.8
申请日：2010-10-09
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物检验检疫技术领域，具体涉及一种镰刀菌B类毒素的分子检测方法及应用。其特征是，针对单端孢霉烯B类毒素，同过Tri11基因信息设计的一组多重PCR引物，从产3-AcDON、15-AcDON和NIV毒素的禾谷镰刀菌中分离得到334bp、279bp、497bp的特异片段，采用PCR反应，利用琼脂糖凝胶电泳检测产物，直接根据产物片段的大小，即可检测出禾谷镰刀菌产生毒素的类型。本发明可用于谷物、饲料和食品安全中镰刀菌B类毒素的检测。
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公开(公告)号：CN102304544A
公开(公告)日：2012-01-04
申请号：CN201110257189.9
申请日：2011-09-01
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种根癌农杆菌介导的大麦茎尖转化方法，其步骤：A．大麦茎尖培养及载体构建：1）选取大麦颖果，去除稃片，剥取成熟胚，盾片向下放置在萌发培养基上萌发；2）从中间载体pMBL-3及和绿色荧光蛋白基因GFP用酶切和PCR方法获得玉米泛素启动子及相关序列；B、利用农杆菌介导大麦茎尖遗传转化，步骤：1）大麦茎尖的获取；2）茎尖的浸染；3）茎尖和农杆菌GV3101共培养培养基：取出经农杆菌浸染的茎尖，在无菌滤纸上吸干表层菌液；4）茎尖的恢复培养基；5）茎尖的筛选培养基；6）再生植株的春化和栽培，得到候选的转化植株。方法易行，操作简便，周期短、效率高，程序简单，操作方便，结果可靠。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112410371A
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN202011250662.6
申请日：2020-11-10
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及利用小麦基因TaAn提高植物的DON耐受性和赤霉病抗性。通过筛选小麦悬浮细胞抑制差减杂交cDNA文库及RACE克隆基因全长的方法，从小麦品种郑麦9023中分离得到一个受DON诱导的基因TaAn。利用农杆菌介导的遗传转化方法，使该基因在拟南芥中超量表达，提高了转基因拟南芥对DON耐受能力和对赤霉病的抗性；利用农杆菌介导的遗传转化方法，使该基因在小麦中组成型表达，提高了转基因小麦对DON耐受能力，研究证实了该基因作为植物抗赤霉病功能的新用途。
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公开(公告)号：CN106754994B
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201510823894.9
申请日：2015-11-23
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种禾谷镰刀菌葡聚糖合成酶基因GLS及应用。该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。将在禾谷镰刀菌中RNAi干扰效果最为明显的GLS‑2，GLS‑3，GLS‑6区段分别以Linker相连，构建得到植物RNAi载体，利用基因枪方法共转化小麦，转基因小麦株系能产生相应的siRNA，通过RNAi途径沉默入侵禾谷镰刀菌GLS基因的表达，达到抑制病原菌侵染。花期接种禾谷镰刀菌表明，转基因小麦抗赤霉病能力有了很大提高，与非转基因植株相比，转基因植株病小穗率降低了42～59％。本发明还公开了该基因在植物抗病性状中的用途。
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公开(公告)号：CN106834337A
公开(公告)日：2017-06-13
申请号：CN201510881572.X
申请日：2015-12-03
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及利用小麦基因提高拟南芥的DON耐受性和FHB抗性。分离得到一种能够提高拟南芥DON耐受能力和赤霉病抗性的基因TaMetRS。通过筛选小麦悬浮细胞抑制差减杂交cDNA文库及RACE克隆基因全长的方法，从小麦品种中分离得到一个受DON诱导的基因TaMetRS。利用农杆菌介导的遗传转化方法，使该基因在拟南芥中超量表达，提高了转基因拟南芥对DON耐受能力和对赤霉病的抗性，研究证实了该基因作为植物抗赤霉病功能的新用途。该基因的核苷酸序列是SEQ ID NO：1中1-2186位碱基对应的序列，编码596个氨基酸。该基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。
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公开(公告)号：CN103421742B
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201310211887.4
申请日：2013-05-31
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/14 , C12N15/13 , G01N33/92 , G01N33/577
Abstract: 本发明属于植物免疫检测技术领域。具体涉及一种分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单克隆重组抗体的制备与应用。将伏马菌素B1分别与载体蛋白KLH和BSA偶联得到抗原，用所得FB1-KLH抗原免疫小鼠，细胞融合后进行选择性培养，利用FB1-BSA偶联物对杂交瘤细胞进行筛选，经亚克隆获得稳定分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1(11。通过抗体基因库技术和噬菌体展示技术筛选杂交瘤细胞株1(11的单克隆重组抗体H2。本发明对单克隆抗体和重组抗体进行了大量生产和纯化，所得的1(11单克隆抗体和H2重组抗体可用于伏马菌素的免疫学检测。
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公开(公告)号：CN103173521B
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201110432297.5
申请日：2011-12-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种适合转基因小麦定量检测的内标准基因引物设计及应用，其步骤：A、通过NCBI数据库BlastN筛选物种特异性好的基因，查找非同源区段设计引物，扩增区段，将上下游序列进行Primer-Blast检测；B、选取16个不同物种种子和35个不同小麦品种灭菌消毒、萌发取叶片提取DNA；C、SouthernBlot鉴定候选特异性好的PSG719、UCB基因位点数为6个，拷贝数为2个；D、普通PCR鉴定内标准基因引物物种特异性：E、普通PCR鉴定内标准基因引物不同小麦品种间稳定性。确定两对引物做转基因小麦检测时的定性或定量检测内标准基因引物。方法易行，操作简便，定性检测极限为0.95个小麦基因组，定量检测为5个小麦基因组,通过Real-timePCR检测,线性关系良好。
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