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公开(公告)号：CN116334019A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210943938.1
申请日：2022-08-05
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明涉及一种来源于乌拉尔甘草的糖基转移酶基因UGT73AC11及其编码的蛋白。本发明通过对乌拉尔甘草基因组数据库的系统分析，从乌拉尔甘草细胞中克隆得到一种来源于UGT73AC11及其编码的蛋白，在大肠杆菌细胞中成功异源表达，并验证其催化功能，同时偶联蔗糖合酶GuSuS1和糖基转移酶UGT73AC11构建UDP循环再生系统，该系统可催化用于合成新甘草苷。本发明解决了能特异性糖基化黄酮C‑7OH位点糖基化修饰且具有广谱性催化功能的糖基转移酶缺乏的问题，为后续合成具有药用前景的新型黄酮糖苷衍生物相关研究提供了一定的依据，同时提供的UDP循环再生体系也极大简便了新甘草苷糖基化修饰过程。
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公开(公告)号：CN116287085A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310182086.3
申请日：2023-02-20
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了聚磷酸依赖型葡萄糖激酶在五环三萜化合物糖基化修饰中的应用，所述糖基化修饰的糖基供体为蔗糖，所述聚磷酸依赖型葡萄糖激酶用于将副产物果糖转化成果糖‑6‑磷酸，所述聚磷酸依赖型葡萄糖激酶为氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的CgPPGK或氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的Asp‑PPGK。本发明将聚磷酸依赖型葡萄糖激酶CgPPGK或Asp‑PPGK偶联到传统的UDP‑葡萄糖再生体系中，构成偶联三酶的UDP‑葡萄糖再生体系，实现果糖的消耗，使反应产生更多的UDP‑葡萄糖，提高了糖基化效率和蔗糖利用率，对于底物的糖基化修饰能力明显高于原有传统的UDP‑葡萄糖再生体系。
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公开(公告)号：CN115125266A
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202210663948.X
申请日：2022-06-14
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种重组载体、转化体及其在五环三萜类化合物糖基化修饰中的应用，具体地，本发明的毕赤酵母重组载体和/或其转化体和/或重组载体组合物和/或转化体组合物和/或细胞表面共展示糖基转移酶和蔗糖合酶的重组毕赤酵母，用于五环三萜类化合物的糖基化修饰，具有重复利用率高，催化效率高，反应条件温和，高效，绿色安全等优点。
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公开(公告)号：CN104894091B
公开(公告)日：2018-08-21
申请号：CN201510346747.7
申请日：2015-06-19
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明提供了一种人工设计糖基修饰提高酶热稳定性的方法，属于生物工程领域。本发明通过对酶蛋白一级序列及空间结构进行组合分析，在酶蛋白亚基结合面上设计N‑糖基化位点，或在其亚基内部模体结合面上设计N‑糖基化位点，利用定点突变引入N‑糖基化修饰特征识别增强序列子，使糖链在酶蛋白亚基之间形成特定的糖基发卡结构或在酶蛋白亚基内部模体之间形成特定的糖基垫片结构，最大限度的增加了酶蛋白三级结构的刚性，稳定其空间构象免受高温环境的胁迫。本发明的酶蛋白改造方法，大幅度提高了酶蛋白的热稳定性，该方法实现了人工可控的提高酶蛋白的热稳定性，并且在一定程度上提高了酶活，强化了其催化特性。
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公开(公告)号：CN104894091A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510346747.7
申请日：2015-06-19
Applicant: 北京理工大学
CPC classification number: C12N9/96 , C12N9/2402 , C12Y302/01139
Abstract: 本发明提供了一种人工设计糖基修饰提高酶热稳定性的方法，属于生物工程领域。本发明通过对酶蛋白一级序列及空间结构进行组合分析，在酶蛋白亚基结合面上设计N-糖基化位点，或在其亚基内部模体结合面上设计N-糖基化位点，利用定点突变引入N-糖基化修饰特征识别增强序列子，使糖链在酶蛋白亚基之间形成特定的糖基发卡结构或在酶蛋白亚基内部模体之间形成特定的糖基垫片结构，最大限度的增加了酶蛋白三级结构的刚性，稳定其空间构象免受高温环境的胁迫。本发明的酶蛋白改造方法，大幅度提高了酶蛋白的热稳定性，该方法实现了人工可控的提高酶蛋白的热稳定性，并且在一定程度上提高了酶活，强化了其催化特性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118879754A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410963001.X
申请日：2024-07-18
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本申请公开了一种基于FRET原位检测酵母表面展示寡聚酶四级结构的方法，包括：以酿酒酵母为底盘菌株，敲除基因PPQ1、ALO1、NAM7和GAL80，引入多拷贝的酪氨酰‑tRNA合酶和tRNACUATyr；选择寡聚酶界面处的位点分别突变成半胱氨酸和TAG密码子，使用锚定蛋白介导寡聚酶的酿酒酵母表面展示；通过添加半乳糖和对叠氮基‑苯丙氨酸发酵，诱导蛋白表达；添加Cy3‑马来酰亚胺用于偶联酵母表面展示寡聚酶的半胱氨酸，添加Cy5‑DBCO用于偶联酵母表面展示寡聚酶的叠氮基团；使用共聚焦显微镜表征供体、受体和FRET信号。本发明无需从酵母细胞表面分离展示的寡聚酶，能够在细胞表面原位检测寡聚酶的四级结构。
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公开(公告)号：CN118834777A
公开(公告)日：2024-10-25
申请号：CN202410832172.9
申请日：2024-06-25
Abstract: 本发明一种生产18α‑GAMG和/或18α‑GL的工程菌及其构建方法、应用和生产方法属于生物工程技术领域。所述工程菌选自：表达UDP‑葡萄糖脱氢酶和类纤维素合酶的酿酒酵母工程菌，表达UDP‑葡萄糖脱氢酶、类纤维素合酶和葡萄糖醛酸基转移酶的酿酒酵母工程菌，或表达UDP‑葡萄糖脱氢酶和葡萄糖醛酸基转移酶的酿酒酵母工程菌；类纤维素合酶选自具有SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的GuCSyGT或GuCSyGT突变体；葡萄糖醛酸基转移酶的氨基酸序列选自：SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.32。所述葡萄糖醛酸基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；UDP‑葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的工程菌和生产方法在30mL发酵规模下的18α‑GAMG的产量高达50mg/L，18α‑GL的产量高达40mg/L。
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公开(公告)号：CN118773237A
公开(公告)日：2024-10-15
申请号：CN202410918576.X
申请日：2024-07-10
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母表面展示系统及其构建方法和应用，构建方法为：构建第一重组载体和第二重组载体，其中第一重组载体为装载有寡聚酶基因与锚定蛋白基因的表达载体，第二重组载体为装载有寡聚酶基因且不包括锚定蛋白基因的表达载体；将第一重组载体导入受体酵母细胞；获得第一重组菌株，将第二重组载体导入第一重组菌株中，获得酵母表面展示系统；或者是：以底盘酵母菌株为基础，导入第一表达盒和第二表达盒，获得酵母表面展示系统；其中第一表达盒为表达寡聚酶基因和锚定蛋白基因的表达盒，第二表达盒为表达寡聚酶基因的表达盒。本发明通过共表达寡聚酶的锚定亚基和游离亚基，显著提高了酵母表面展示寡聚酶的催化活性、展示量和比酶活。
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公开(公告)号：CN115125266B
公开(公告)日：2024-02-13
申请号：CN202210663948.X
申请日：2022-06-14
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种重组载体、转化体及其在五环三萜类化合物糖基化修饰中的应用，具体地，本发明的毕赤酵母重组载体和/或其转化体和/或重组载体组合物和/或转化体组合物和/或细胞表面共展示糖基转移酶和蔗糖合酶的重组毕赤酵母，用于五环三萜类化合物的糖基化修饰，具有重复利用率高，催化效率高，反应条件温和，高效，绿色安全等优点。
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公开(公告)号：CN110106222B
公开(公告)日：2022-09-16
申请号：CN201811310750.3
申请日：2018-11-06
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶，可以催化甘草次酸糖基化合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸和甘草酸，属于生物技术领域。该糖基转移酶可用于体外酶法合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸和甘草酸。并且，该糖基转移酶可以用于微生物体内全合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸和甘草酸。
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