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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118879754A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410963001.X
申请日：2024-07-18
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本申请公开了一种基于FRET原位检测酵母表面展示寡聚酶四级结构的方法，包括：以酿酒酵母为底盘菌株，敲除基因PPQ1、ALO1、NAM7和GAL80，引入多拷贝的酪氨酰‑tRNA合酶和tRNACUATyr；选择寡聚酶界面处的位点分别突变成半胱氨酸和TAG密码子，使用锚定蛋白介导寡聚酶的酿酒酵母表面展示；通过添加半乳糖和对叠氮基‑苯丙氨酸发酵，诱导蛋白表达；添加Cy3‑马来酰亚胺用于偶联酵母表面展示寡聚酶的半胱氨酸，添加Cy5‑DBCO用于偶联酵母表面展示寡聚酶的叠氮基团；使用共聚焦显微镜表征供体、受体和FRET信号。本发明无需从酵母细胞表面分离展示的寡聚酶，能够在细胞表面原位检测寡聚酶的四级结构。
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公开(公告)号：CN118773237A
公开(公告)日：2024-10-15
申请号：CN202410918576.X
申请日：2024-07-10
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母表面展示系统及其构建方法和应用，构建方法为：构建第一重组载体和第二重组载体，其中第一重组载体为装载有寡聚酶基因与锚定蛋白基因的表达载体，第二重组载体为装载有寡聚酶基因且不包括锚定蛋白基因的表达载体；将第一重组载体导入受体酵母细胞；获得第一重组菌株，将第二重组载体导入第一重组菌株中，获得酵母表面展示系统；或者是：以底盘酵母菌株为基础，导入第一表达盒和第二表达盒，获得酵母表面展示系统；其中第一表达盒为表达寡聚酶基因和锚定蛋白基因的表达盒，第二表达盒为表达寡聚酶基因的表达盒。本发明通过共表达寡聚酶的锚定亚基和游离亚基，显著提高了酵母表面展示寡聚酶的催化活性、展示量和比酶活。
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公开(公告)号：CN118879754B
公开(公告)日：2025-05-09
申请号：CN202410963001.X
申请日：2024-07-18
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本申请公开了一种基于FRET原位检测酵母表面展示寡聚酶四级结构的方法，包括：以酿酒酵母为底盘菌株，敲除基因PPQ1、ALO1、NAM7和GAL80，引入多拷贝的酪氨酰‑tRNA合酶和tRNACUATyr；选择寡聚酶界面处的位点分别突变成半胱氨酸和TAG密码子，使用锚定蛋白介导寡聚酶的酿酒酵母表面展示；通过添加半乳糖和对叠氮基‑苯丙氨酸发酵，诱导蛋白表达；添加Cy3‑马来酰亚胺用于偶联酵母表面展示寡聚酶的半胱氨酸，添加Cy5‑DBCO用于偶联酵母表面展示寡聚酶的叠氮基团；使用共聚焦显微镜表征供体、受体和FRET信号。本发明无需从酵母细胞表面分离展示的寡聚酶，能够在细胞表面原位检测寡聚酶的四级结构。
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公开(公告)号：CN116334057B
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202210982067.4
申请日：2022-08-16
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用，本发明方法包括：将聚乙二醇马来酰亚胺衍生物与酶交联，获得酶组装体；其中：所述酶由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列单一突变所得，所述单一突变是用半胱氨酸残基的置换。本发明还涉及了由该方法构建得到的酶组装体及其应用。本发明通过简单高效的方法实现了蛋白质在特定位点的组装，成功制备了相对空间定位可控的酶组装体。采用本发明方法形成的酶组装体能够在基本不影响酶活性的基础上，进一步提高酶的热稳定性。
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公开(公告)号：CN116334057A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210982067.4
申请日：2022-08-16
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用，本发明方法包括：将聚乙二醇马来酰亚胺衍生物与酶交联，获得酶组装体；其中：所述酶由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列单一突变所得，所述单一突变是用半胱氨酸残基的置换。本发明还涉及了由该方法构建得到的酶组装体及其应用。本发明通过简单高效的方法实现了蛋白质在特定位点的组装，成功制备了相对空间定位可控的酶组装体。采用本发明方法形成的酶组装体能够在基本不影响酶活性的基础上，进一步提高酶的热稳定性。
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