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公开(公告)号：CN119570760A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202510130783.3
申请日：2025-02-05
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明一种荧光传感器蛋白设计方法及其产品和检测方法属于生物技术领域。所述荧光传感器蛋白设计方法的特征是，蛋白的变构结构域两端的氨基酸距离在10Å以下，距离变化在2Å以上。基于该设计方法，本发明还提供一种荧光传感器蛋白及其基因、重组表达载体、转化体和荧光传感器及高通量实时检测胞内代谢产物的方法，荧光传感器蛋白包括变构后的甾醇O‑酰基转移酶和循环荧光蛋白cpEGFP；变构后的甾醇O‑酰基转移酶具有如SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列；循环荧光蛋白cpEGFP具有如SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列。该荧光传感器蛋白应用于胞内固醇类物质的浓度检测，检测更为实时，为相关代谢流的解析提供更为精准的工具。
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公开(公告)号：CN107974453A
公开(公告)日：2018-05-01
申请号：CN201710573663.6
申请日：2017-07-14
Applicant: 北京理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/81 , C12N1/19 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了一种由启动子、核酸序列SEQ ID NO.1、及终止子依次相连构成的基因表达盒，插入该基因表达盒的表达载体和利用该基因表达盒制备产生两株高细胞活力的多重抗逆性酵母菌株。通过上述技术方案，利用本发明中的基因表达盒转化酿酒酵母实现了泛素蛋白酶体的精细改造，发明了一种能够同时提高酿酒酵母细胞活力与多重抗逆性的方法和应用，所获得的酿酒酵母工程菌株的遗传性能稳定，在工业发酵中有广泛用途和应用前景。
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公开(公告)号：CN118879754B
公开(公告)日：2025-05-09
申请号：CN202410963001.X
申请日：2024-07-18
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本申请公开了一种基于FRET原位检测酵母表面展示寡聚酶四级结构的方法，包括：以酿酒酵母为底盘菌株，敲除基因PPQ1、ALO1、NAM7和GAL80，引入多拷贝的酪氨酰‑tRNA合酶和tRNACUATyr；选择寡聚酶界面处的位点分别突变成半胱氨酸和TAG密码子，使用锚定蛋白介导寡聚酶的酿酒酵母表面展示；通过添加半乳糖和对叠氮基‑苯丙氨酸发酵，诱导蛋白表达；添加Cy3‑马来酰亚胺用于偶联酵母表面展示寡聚酶的半胱氨酸，添加Cy5‑DBCO用于偶联酵母表面展示寡聚酶的叠氮基团；使用共聚焦显微镜表征供体、受体和FRET信号。本发明无需从酵母细胞表面分离展示的寡聚酶，能够在细胞表面原位检测寡聚酶的四级结构。
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公开(公告)号：CN118272337A
公开(公告)日：2024-07-02
申请号：CN202410433715.X
申请日：2024-04-11
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 发明“三个UDP‑糖基转移酶及其在合成齐墩果酸糖苷化合物中的应用”属于生物工程与技术领域。本发明提供一种UDP‑糖基转移酶，涉及三个来源于油橄榄的UDP‑糖基转移酶Oe440、Oe139、Oe535，实现在齐墩果酸C28‑COOH特异性修饰一分子糖基生成28‑氧‑葡萄糖‑齐墩果酸；提供了一株工程化酿酒酵母菌株，以酿酒酵母为宿主，异源表达来源于甘草的β‑香树脂醇合酶(GgbAS)、来源于蒺藜苜蓿的P450氧化酶(CYP716A12)、来源于迷迭香的还原酶(RoCPR)及来源于油橄榄的UDP‑糖基转移酶(Oe440)实现了利用微生物从头合成28‑氧‑葡萄糖‑齐墩果酸。本发明通过设计和创建微生物细胞工厂，发酵生产28‑氧‑葡萄糖‑齐墩果酸，既能有效控制原料供给，又能保护自然资源及环境，是一种绿色高效的新型生产模式。
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公开(公告)号：CN116334057B
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202210982067.4
申请日：2022-08-16
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用，本发明方法包括：将聚乙二醇马来酰亚胺衍生物与酶交联，获得酶组装体；其中：所述酶由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列单一突变所得，所述单一突变是用半胱氨酸残基的置换。本发明还涉及了由该方法构建得到的酶组装体及其应用。本发明通过简单高效的方法实现了蛋白质在特定位点的组装，成功制备了相对空间定位可控的酶组装体。采用本发明方法形成的酶组装体能够在基本不影响酶活性的基础上，进一步提高酶的热稳定性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116334057A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210982067.4
申请日：2022-08-16
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种利用聚乙二醇马来酰亚胺衍生物构建的酶组装体及其制备方法和应用，本发明方法包括：将聚乙二醇马来酰亚胺衍生物与酶交联，获得酶组装体；其中：所述酶由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列单一突变所得，所述单一突变是用半胱氨酸残基的置换。本发明还涉及了由该方法构建得到的酶组装体及其应用。本发明通过简单高效的方法实现了蛋白质在特定位点的组装，成功制备了相对空间定位可控的酶组装体。采用本发明方法形成的酶组装体能够在基本不影响酶活性的基础上，进一步提高酶的热稳定性。
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公开(公告)号：CN116334019A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210943938.1
申请日：2022-08-05
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明涉及一种来源于乌拉尔甘草的糖基转移酶基因UGT73AC11及其编码的蛋白。本发明通过对乌拉尔甘草基因组数据库的系统分析，从乌拉尔甘草细胞中克隆得到一种来源于UGT73AC11及其编码的蛋白，在大肠杆菌细胞中成功异源表达，并验证其催化功能，同时偶联蔗糖合酶GuSuS1和糖基转移酶UGT73AC11构建UDP循环再生系统，该系统可催化用于合成新甘草苷。本发明解决了能特异性糖基化黄酮C‑7OH位点糖基化修饰且具有广谱性催化功能的糖基转移酶缺乏的问题，为后续合成具有药用前景的新型黄酮糖苷衍生物相关研究提供了一定的依据，同时提供的UDP循环再生体系也极大简便了新甘草苷糖基化修饰过程。
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公开(公告)号：CN116287085A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310182086.3
申请日：2023-02-20
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了聚磷酸依赖型葡萄糖激酶在五环三萜化合物糖基化修饰中的应用，所述糖基化修饰的糖基供体为蔗糖，所述聚磷酸依赖型葡萄糖激酶用于将副产物果糖转化成果糖‑6‑磷酸，所述聚磷酸依赖型葡萄糖激酶为氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的CgPPGK或氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的Asp‑PPGK。本发明将聚磷酸依赖型葡萄糖激酶CgPPGK或Asp‑PPGK偶联到传统的UDP‑葡萄糖再生体系中，构成偶联三酶的UDP‑葡萄糖再生体系，实现果糖的消耗，使反应产生更多的UDP‑葡萄糖，提高了糖基化效率和蔗糖利用率，对于底物的糖基化修饰能力明显高于原有传统的UDP‑葡萄糖再生体系。
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公开(公告)号：CN115125266A
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202210663948.X
申请日：2022-06-14
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种重组载体、转化体及其在五环三萜类化合物糖基化修饰中的应用，具体地，本发明的毕赤酵母重组载体和/或其转化体和/或重组载体组合物和/或转化体组合物和/或细胞表面共展示糖基转移酶和蔗糖合酶的重组毕赤酵母，用于五环三萜类化合物的糖基化修饰，具有重复利用率高，催化效率高，反应条件温和，高效，绿色安全等优点。
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公开(公告)号：CN118879754A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410963001.X
申请日：2024-07-18
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本申请公开了一种基于FRET原位检测酵母表面展示寡聚酶四级结构的方法，包括：以酿酒酵母为底盘菌株，敲除基因PPQ1、ALO1、NAM7和GAL80，引入多拷贝的酪氨酰‑tRNA合酶和tRNACUATyr；选择寡聚酶界面处的位点分别突变成半胱氨酸和TAG密码子，使用锚定蛋白介导寡聚酶的酿酒酵母表面展示；通过添加半乳糖和对叠氮基‑苯丙氨酸发酵，诱导蛋白表达；添加Cy3‑马来酰亚胺用于偶联酵母表面展示寡聚酶的半胱氨酸，添加Cy5‑DBCO用于偶联酵母表面展示寡聚酶的叠氮基团；使用共聚焦显微镜表征供体、受体和FRET信号。本发明无需从酵母细胞表面分离展示的寡聚酶，能够在细胞表面原位检测寡聚酶的四级结构。
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