公开(公告)号：CN108300761A

公开(公告)日：2018-07-20

申请号：CN201810193251.4

申请日：2018-03-09

Applicant: 杨凌职业技术学院 ,  西北农林科技大学

Inventor： 侯金星 ,  安小鹏 ,  曹斌云 ,  宋宇轩 ,  李广 ,  王建刚 ,  刘育含

IPC: C12Q1/66 ,  C12Q1/6851 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种筛选miR-574-5p靶基因的方法，该方法以山羊基因组DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用MAP3K9引物在PCR条件下进行扩增MAP3K9基因3'UTR区；构建双荧光素酶报告系统，检测荧光素酶活性，结果显示，miR-574-5p降低了荧光素酶的活性，初步确定MAP3K9为miR-574-5p的靶基因；采用RT-qPCR和Western blot方法验证miR-574-5p对MAP3K9基因在mRNA和蛋白水平表达的影响。结果显示：miR-574-5p可以抑制MAP3K9基因在mRNA和蛋白水平上的表达，进一步确定miR-574-5p可与MAP3K93'UTR结合，MAP3K9是miR-574-5p的靶基因，为进一步研究miR-574-5p对奶山羊乳腺发育和泌乳功能的影响奠定了基础。

公开(公告)号：CN107287301A

公开(公告)日：2017-10-24

申请号：CN201710501338.9

申请日：2017-06-27

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 安小鹏 ,  侯金星 ,  宋宇轩 ,  马海东 ,  李广 ,  曹斌云

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种利用核仁磷酸蛋白基因选择山羊生长性状的分子标记方法，该方法以山羊基因组DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用4对引物在PCR条件下进行扩增Nucleophosmin(NPM)基因5'UTR区和外显子1，根据琼脂糖凝胶电泳对其进行目的片段大小判定；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测引物P1-P4的PCR扩增产物，发现引物P3扩增位点存在18bp的碱基缺失，然后对引物P3的扩增产物进行基因分型和基因频率分析，以及与关中奶山羊和波尔山羊的生长性状之间进行关联分析；结果表明：Nucleophosmin基因外显子1由引物P3检测的SNPs位点可用作山羊产生长性状选择的分子标记。

公开(公告)号：CN103468819A

公开(公告)日：2013-12-25

申请号：CN201310449829.5

申请日：2013-09-27

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 曹斌云 ,  侯金星 ,  安小鹏 ,  王建刚 ,  宋宇轩

IPC: C12Q1/68 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种利用双基因聚合效应选育奶山羊产奶性状的方法，以奶山羊基因组DNA为模板，利用2对引物分别扩增催乳素受体（PRLR）基因的外显子9和乳蛋白转录因子（ELF5）基因内含子1，以浓度为1.5%的琼脂糖凝胶电泳对各扩增产物进行大小判定，采用DNA测序技术筛查2对引物扩增产物的位点突变，然后利用浓度为3.5%的琼脂糖凝胶电泳对PRLR和ELF5基因的2个位点的SNPs进行基因分型和基因频率分析，分析不同基因型组合与产奶性状之间的关系，筛选最佳基因型组合。

公开(公告)号：CN101845507B

公开(公告)日：2012-05-09

申请号：CN201010199506.1

申请日：2010-06-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 曹斌云 ,  安小鹏 ,  颜泉梅 ,  侯金星 ,  王建刚 ,  宋宇轩 ,  杨明明 ,  朱广琴 ,  王韵斐 ,  崔易虹 ,  陈秋菊

IPC: C12Q1/68 ,  G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种检测山羊促性腺激素释放激素基因外显子4和生长分化因子9基因外显子2三个碱基突变多态性的方法，以山羊基因组DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用2对引物P1和P2在PCR条件下进行扩增，根据琼脂糖凝胶电泳对其进行目的片段大小判定；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测引物P1和P2的PCR扩增产物，发现这两个扩增位点存在3个碱基的突变，然后对两个基因的SNPs进行基因分型和基因频率分析，以及与布尔山羊和西农萨能奶山羊的产羔性状之间进行关联分析；结果表明：GnRH基因外显子4(包含部分内含子3和3′非翻译区)和GDF9基因外显子2基因由引物P1和P2检测的SNPs位点可用作山羊产羔性状选择的分子标记。

公开(公告)号：CN101865798A

公开(公告)日：2010-10-20

申请号：CN201010199444.4

申请日：2010-06-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 曹斌云 ,  姬云涛 ,  安小鹏 ,  侯金星 ,  王建刚 ,  宋宇轩

IPC: G01N1/30

Abstract: 本发明公开了一种聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳中的DNA银染方法，先用0.1%AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝胶10–15min，用蒸馏水清洗2次，其次用0.04%的Na2CO3、2mL的37%HCOH/L、2%的NaOH混合溶液显色5–6min，蒸馏水冲洗2次即可完成全部染色过程。传统的DNA银染方法需要5-6种化学试剂，配制4中溶液，花费40-60min才能完成染色步骤，而本方法只需要4种化学试剂，配制2种溶液，花费20min就可以达到与传统染色方法相同的结果，而且在变性聚丙烯酰胺电泳（PAGE）中，本染色方法可以将DNA的量降低到0.44ng；在非变性聚丙烯酰胺电泳（PAGE）中可以将DNA的量降低到3.5ng。本方法与传统染色方法相比，不仅节约了时间，降低额成本，而且提高了检测的灵敏度。

公开(公告)号：CN101845507A

公开(公告)日：2010-09-29

申请号：CN201010199506.1

申请日：2010-06-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 曹斌云 ,  安小鹏 ,  颜泉梅 ,  侯金星 ,  王建刚 ,  宋宇轩 ,  杨明明 ,  朱广琴 ,  王韵斐 ,  崔易虹 ,  陈秋菊

IPC: C12Q1/68 ,  G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种检测山羊促性腺激素释放激素基因外显子4和生长分化因子9基因外显子2三个碱基突变多态性的方法，以山羊基因组DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用2对引物P1和P2在PCR条件下进行扩增，根据琼脂糖凝胶电泳对其进行目的片段大小判定；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测引物P1和P2的PCR扩增产物，发现这两个扩增位点存在3个碱基的突变，然后对两个基因的SNPs进行基因分型和基因频率分析，以及与布尔山羊和西农萨能奶山羊的产羔性状之间进行关联分析；结果表明：GnRH基因外显子4(包含部分内含子3和3′非翻译区)和GDF9基因外显子2基因由引物P1和P2检测的SNPs位点可用作山羊产羔性状选择的分子标记。