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公开(公告)号：CN107619816A
公开(公告)日：2018-01-23
申请号：CN201710762830.1
申请日：2017-08-30
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种靶向传递疫苗抗原的基因工程乳酸菌口服疫苗株及其在防治鸡大肠杆菌病中的用途。所述的疫苗株是通过将表达鸡致病性大肠杆菌ompC蛋白和fimA蛋白以及靶向M细胞和DC细胞的靶向肽的融合蛋白的表达载体转入乳酸菌中得到的，其中ompC蛋白和fimA蛋白之间通过柔性序列连接，所述的融合蛋白的连接顺序为ompC-fimA-M细胞靶向肽-DC细胞靶向肽。本发明以鸡致病性大肠杆菌fimA和ompC蛋白为免疫原并融合能够靶向M细胞和DC细胞的靶向肽，利用乳酸菌为抗原传递载体，构建了预防鸡大肠杆菌病的靶向传递疫苗抗原的基因工程乳酸菌亚单位口服疫苗，可有效地抑制鸡致病性大肠杆菌的感染，并且使用方便、安全，对环境友好。
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公开(公告)号：CN107586884A
公开(公告)日：2018-01-16
申请号：CN201711008696.2
申请日：2017-10-25
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的RT-PCR引物组，含有该引物组的试剂盒及其应用。所述的引物组由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明还提出了一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的荧光定量RT-PCR试剂盒，含有所述的引物组以及Eva Green荧光染料反应液。本发明与现有技术相比，最大的优势在于能够区分猫传染性腹膜炎病毒感染以及猫冠状病毒感染，且检测灵敏度高，特异性好，能够实现现有检测技术所无法完成的定量、快速、特异、敏感的结果判定，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN107475445A
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201710703618.8
申请日：2017-08-16
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于RT-PCR和RFLP技术鉴别鸡传染性法氏囊病病毒强弱毒株的试剂盒及其应用。所述的试剂盒含有用于扩增鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的引物对以及SpeI、SacI和StuI限制性内切酶。本发明所建立的基于RT-PCR和RFLP技术的鉴别诊断方法能够区分IBDV的超强毒株和弱毒株，且步骤简单便于操作，本发明的提出为IBDV强弱毒株的快速鉴别诊断提供了一种新的有效技术手段。
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公开(公告)号：CN102732502B
公开(公告)日：2014-07-09
申请号：CN201210180721.6
申请日：2012-06-04
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种无选择标记残留的乳酸菌基因组修饰操作系统及其应用，属于生物技术领域。具体地，本发明提供的载体系统包括：1个温度敏感型、大肠杆菌-革兰氏阳性细菌宽宿主范围穿梭型辅助质粒；1个用于构建温度敏感型、大肠杆菌-革兰氏阳性细菌宽宿主范围穿梭型基因打靶主质粒的中间质粒；1个经过以上二者所构建的用于任意位点基因修饰操作的基础乳酸菌菌株。本发明所提供的无选择标记残留的快速双质粒基因打靶载体系统可以获取任意位点基因缺失或插入的转基因重组乳酸菌，所产生的转基因乳酸菌或重组基因工程乳酸菌在益生菌开发和基因工程益生菌制剂的研究和应用中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN103409558A
公开(公告)日：2013-11-27
申请号：CN201310317342.1
申请日：2013-07-25
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一套用于同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的多重PCR引物组，属于病毒检测领域。本发明的引物组由三对引物组成，其中，用于猪流行性腹泻病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；用于猪传染性胃肠炎病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；用于猪轮状病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。应用本发明引物序列通过多重PCR方法可同时对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的不同毒株进行检测，结果均为阳性，而对其他常见猪源病毒检测结果均为阴性，说明本发明的引物组特异性强、重复性好；对病毒cDNA梯度稀释后进行PCR检测，说明该引物灵敏度高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102008720A
公开(公告)日：2011-04-13
申请号：CN201010231142.0
申请日：2010-07-20
Applicant: 东北农业大学
CPC classification number: Y02A50/472
Abstract: 抗魏氏梭菌病转基因植物疫苗及其制作方法。目前免疫接种抗魏氏梭菌病的疫苗保护率较低。本发明包括：(1)以含编码魏氏梭菌毒素的质粒或病料为模板，利用PCR或RT-PCR扩增获得魏氏梭菌毒素基因，将获得的魏氏梭菌毒素基因和Ti或Ri质粒分别进行酶切，回收目的基因和植物表达载体片段，连接并转化大肠杆菌，对重组Ti或Ri质粒进行酶切、PCR和测序鉴定，用重组质粒转化根瘤农杆菌或发根农杆菌，筛选、鉴定阳性重组农杆菌；(2)植物种子经春化、萌发、剪接，获得外植体，用步骤(1)中重组的农杆菌分别侵染外植体，通过筛选、继代、生根、移栽，获得转化植株，筛选鉴定转基因阳性植株。
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公开(公告)号：CN101525589A
公开(公告)日：2009-09-09
申请号：CN200910071262.6
申请日：2009-01-14
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种表达传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreas necrosis virus，IPNV)VP3蛋白的重组干酪乳杆菌及制法。根据传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点，设计一对引物，进行PCR，获得含有IPNV VP3基因主要抗原位点的618bp目的片段，将扩增得到的IPNVVP3基因与表面表达的载体质粒pPG1进行连接，通过电转化进入宿主菌干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393细胞内，含阳性重组质粒pPG1－IPNV VP3的干酪乳杆菌命名为pPG1－IPNV VP3/L.casei 393。将重组pPG1－IPNV VP3/L.casei 393在乳糖的诱导下进行表达。本发明中构建了传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白干酪乳杆菌表达载体系统，表达了含有IPNV VP3蛋白主要抗原位点的约31KDa的目的蛋白，免疫印迹实验和间接免疫荧光试验均表明，所表达的外源蛋白能够与IPNV免疫血清发生反应，表明重组VP3蛋白与IPNV天然抗原一样具有相同的抗原性。
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公开(公告)号：CN1311073C
公开(公告)日：2007-04-18
申请号：CN200510009883.3
申请日：2005-04-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/18
Abstract: 本发明提供的是一种抗猪传染性胃肠炎重组N蛋白杂交瘤细胞株。以纯化的重组TGEV N蛋白免疫BALB/c小鼠制备诊断用单克隆抗体。取免疫脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA方法进行筛选，经过3次克隆筛选，最终获得一株分泌抗重组TGEV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为E10F10D5，其染色体平均计数为87±10对，间接ELISA检测制备的腹水抗体效价达1∶12800。本发明以生物技术手段纯化重组TGEV N蛋白，制备诊断抗原，建立检测抗体的Dot-ELISA检测方法，制备快诊膜，缩短检测时间；建立间接ELISA检测方法，检测TGEV感染和抗体效价测定，为建立标准化诊断试剂盒奠定基础；为建立快速检测病毒抗原的诊断方法奠定物质基础。
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公开(公告)号：CN1677106A
公开(公告)日：2005-10-05
申请号：CN200510009701.2
申请日：2005-02-02
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/531 , G01N1/28
Abstract: 本发明提供的是取发病猪的粪便与裂解液以1∶8－12的比例进行混合，室温静置10分钟，2000g离心2分钟后，上清液即为含有高滴度病毒的抗原试剂，其中所用的裂解液是含有500mmol/L Tris－HCl，pH8.3，20％PVP－40，1％PEG 6000，140mmol/L NaCl和0.05％Tween 20的溶液。本发明的方法对猪传染性胃肠炎发病猪粪便使用特异的裂解液进行裂解，使病毒从细胞中释放出来从而为诊断本病提供了一种特异性强的诊断抗原，大大缩短了疾病诊断的时间，为猪传染性胃肠炎的及早发现及预防争得了宝贵的时间和经济效益。
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公开(公告)号：CN118853524A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202411328287.0
申请日：2024-09-24
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/12 , C12N15/50 , C12N15/74 , A61K39/385 , A61K39/215 , A61K38/17 , A61P31/14 , C12R1/225
Abstract: 本发明公开了一种共表达猪β‑防御素2与PEDV S1蛋白的重组猪源干酪乳杆菌及其构建方法和应用，属于生物技术领域。本发明以前期构建的表达PEDV S1基因的猪源营养缺陷型副干酪乳杆菌作为口服黏膜传递载体，并通过串联提高pBD2蛋白的外源表达量，构建重组乳杆菌n×pBD2/S1‑ΔHLJ‑27。针对PEDV的肠道黏膜感染，通过该重组乳杆菌对S1蛋白的组成型表达，刺激黏膜特异性免疫应答，从而建立阻断PEDV感染的第一道防线；与此同时，为了增强口服疫苗诱导的黏膜免疫效果，利用该重组乳杆菌进行分泌表达串联的pBD2蛋白，通过外源增加pBD2表达量来增强肠道免疫应答，提高机体获得性免疫水平，进而将口服黏膜疫苗的优势发挥更佳。
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