公开(公告)号：CN110423845B

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN201910537825.X

申请日：2019-06-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 乔薪瑗 ,  姜艳平 ,  崔文 ,  王丽 ,  周晗 ,  李一经 ,  唐丽杰 ,  徐义刚 ,  王孟孟

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种用于检测牛轮状病毒(BRV)、牛细小病毒(BPV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的多重纳米PCR引物组及其应用。所述的引物组中含有分别用于检测牛轮状病毒、牛细小病毒和牛病毒性腹泻病毒的DPO引物对。本发明将DPO引物结合纳米PCR技术建立了一种能够同时检测BRV、BPV和BVDV的多重DPO‑nanoPCR检测方法。与常规PCR方法比较，该方法省时省力，能够迅速、准确、特异地检测出病原，在保证特异的基础上，又具有高度的灵敏性。本发明的提出为BRV、BPV和BVDV早期感染和隐性感染的诊断提供了一种新方法，为BRV、BPV和BVDV临床混合感染的检测提供给了一种可靠的技术手段，为疫病排查、筛查净化及综合防制提供了技术支持。

公开(公告)号：CN108148814B

公开(公告)日：2021-01-15

申请号：CN201711353547.X

申请日：2017-12-15

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 乔薪瑗 ,  姜艳平 ,  李一经 ,  王丽 ,  唐丽杰 ,  徐义刚 ,  崔文

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种用于检测牛轮状病毒的双抗体夹心ELISA诊断试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由菌种保藏编号为CGMCC NO.14726的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体4D10。此外，本发明以纯化的兔抗BRV多抗为捕获抗体，以4D10单抗为检测抗体，建立了BRV双抗体夹心ELISA方法。敏感性实验表明，该方法对BRV的最低检出量为9.884×104TCID50/mL；特异性实验结果表明，该方法具有良好的特异性，与PoRV、PEDV、BPV及TGEV均无交叉反应；批间和批内重复性实验结果显示，该方法具有良好的重复性。使用建立的双抗体夹心ELISA方法对95份临床样品进行检测，与RT‑PCR方法相比，符合率为100％。可见本发明建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可用于BRV的快速检测。

公开(公告)号：CN107271667B

公开(公告)日：2019-01-22

申请号：CN201710415171.4

申请日：2017-06-05

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 唐丽杰 ,  王丽 ,  周晗 ,  臧明鑫 ,  李一经 ,  姜艳平 ,  崔文 ,  徐义刚 ,  刘敏 ,  乔薪瑗

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种蓝舌病病毒型特异性竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株8B3G11分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株8B5D4分泌产生。本发明利用制备的两株8型BTV VP2单克隆抗体8B5D4以及8B3G11建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。

公开(公告)号：CN107619816A

公开(公告)日：2018-01-23

申请号：CN201710762830.1

申请日：2017-08-30

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 徐义刚 ,  王丽 ,  乔薪瑗 ,  唐丽杰 ,  李一经 ,  马孙婷

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一种靶向传递疫苗抗原的基因工程乳酸菌口服疫苗株及其在防治鸡大肠杆菌病中的用途。所述的疫苗株是通过将表达鸡致病性大肠杆菌ompC蛋白和fimA蛋白以及靶向M细胞和DC细胞的靶向肽的融合蛋白的表达载体转入乳酸菌中得到的，其中ompC蛋白和fimA蛋白之间通过柔性序列连接，所述的融合蛋白的连接顺序为ompC-fimA-M细胞靶向肽-DC细胞靶向肽。本发明以鸡致病性大肠杆菌fimA和ompC蛋白为免疫原并融合能够靶向M细胞和DC细胞的靶向肽，利用乳酸菌为抗原传递载体，构建了预防鸡大肠杆菌病的靶向传递疫苗抗原的基因工程乳酸菌亚单位口服疫苗，可有效地抑制鸡致病性大肠杆菌的感染，并且使用方便、安全，对环境友好。

公开(公告)号：CN103409558A

公开(公告)日：2013-11-27

申请号：CN201310317342.1

申请日：2013-07-25

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 李一经 ,  唐丽杰 ,  乔薪瑗 ,  尹纪元 ,  吴洋 ,  杜彩虹

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一套用于同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的多重PCR引物组，属于病毒检测领域。本发明的引物组由三对引物组成，其中，用于猪流行性腹泻病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；用于猪传染性胃肠炎病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；用于猪轮状病毒检测的引物序列分别为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。应用本发明引物序列通过多重PCR方法可同时对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的不同毒株进行检测，结果均为阳性，而对其他常见猪源病毒检测结果均为阴性，说明本发明的引物组特异性强、重复性好；对病毒cDNA梯度稀释后进行PCR检测，说明该引物灵敏度高。

公开(公告)号：CN117451988A

公开(公告)日：2024-01-26

申请号：CN202310994974.5

申请日：2023-08-08

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 乔薪瑗 ,  王晓娜 ,  单智夫 ,  王丽 ,  周晗 ,  李佳璇 ,  崔文 ,  姜艳平 ,  程溪

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  G01N33/577 ,  G01N33/558 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明公开了一种牛轮状病毒信号增强型胶体金免疫层析试纸条及其应用。所述的试纸条包括从左到右依次连接的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，还包括位于下方的PVC板，硝酸纤维素膜上具有山羊抗鼠IgG喷涂的质控线，以及兔抗牛轮状病毒多克隆抗体喷涂的检测线，胶体金垫上涂覆有辣根过氧化物酶标记的鼠抗牛轮状病毒的单克隆抗体BoRV‑3D4与胶体金颗粒的缀合物。本发明通过将偶联标记HRP的抗体标记在胶体金的表面，利用TMB显色液增强显色，利用酶信号放大检测效果，并通过对试纸条胶体金垫、样品垫处理液、检测线抗体浓度等条件进行摸索，优化试纸条反应条件，为牛轮状病毒诊断提供了一种简便、快速、灵敏的现地检测方法。

公开(公告)号：CN116555490A

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202310377490.6

申请日：2023-04-10

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 唐丽杰 ,  王晓娜 ,  单智夫 ,  李佳璇 ,  张森豪 ,  崔文 ,  姜艳平 ,  周晗 ,  王丽 ,  乔薪瑗 ,  李一经

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒及猪德尔塔冠状病毒双重重组酶聚合酶扩增快速检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有分别用于扩增猪流行性腹泻病毒及猪德尔塔冠状病毒的引物。本发明建立了一种双重RPA法以实现同时检测PEDV和PDCoV。双重RPA法体系优化结果显示，在36℃，反应时间为21min且PDCoV:PEDV引物体积为1:4的条件下，对两种病毒检测的灵敏度可达到104copies/μL，且特异性强，无交叉反应现象。94份临床样品的检测结果显示，双重RPA法与RT‑qPCR法和RT‑PCR法的符合率可达80％以上。相比较于RT‑PCR，具有更短的检测时间以及更高的敏感性，对仪器、场地和检测环境的要求更低，为今后PEDV以及PDCoV的预防及快速检测提供了更有效的技术手段。

公开(公告)号：CN109633173A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201910008503.6

申请日：2019-01-04

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 唐丽杰 ,  周晗 ,  王丽 ,  徐义刚 ,  乔薪瑗 ,  龚如月 ,  崔文 ,  姜艳平 ,  李一经

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/531 ,  C12N15/66 ,  C12N15/81 ,  C07K14/08

CPC classification number: G01N33/68 ,  C07K14/005 ,  C12N15/66 ,  C12N15/815 ,  C12N2720/10022 ,  G01N33/531

Abstract: 本发明公开了一种用于检测IBDV抗体的免疫磁珠间接ELISA试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有偶联有IBDV VP3蛋白的免疫磁珠，其中，所述的IBDV VP3蛋白是通过毕赤酵母表达系统表达，纯化后获得。本发明利用毕赤酵母表达系统表达的重组VP3蛋白作为抗原，建立了一种新的检测IBDV血清抗体的免疫磁珠间接ELISA方法。与商品化IBDV血清抗体检测试剂盒相比较，操作过程比商品化IBDV血清抗体检测试剂盒节省了约1h，且显著节省了血清的用量。实验结果表明本发明以IBDV VP3重组蛋白作为抗原建立的检测鸡血清中IBDV抗体的免疫磁珠间接ELISA方法，具有良好的特异性和敏感性，重复性好，符合率高，能够缩短检测时间且操作简便。本发明的提出为抗鸡IBDV血清抗体的快速检测提供了新的技术手段。

公开(公告)号：CN107828706A

公开(公告)日：2018-03-23

申请号：CN201710972807.5

申请日：2017-10-18

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 徐义刚 ,  王丽 ,  乔薪瑗 ,  唐丽杰 ,  李一经 ,  于美玲

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12N15/62 ,  C12N15/66 ,  A61K39/225 ,  A61K39/215 ,  A61P1/00 ,  A61P1/04 ,  A61P31/14 ,  A61P1/12 ,  C12R1/46

CPC classification number: C12N15/74 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/542 ,  A61K2039/70 ,  C07K14/005 ,  C07K2319/60 ,  C12N15/66 ,  C12N2770/20022 ,  C12N2770/20034 ,  A61K2300/00

Abstract: 本发明公开了一种eGFP标记的、抗猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻的重组屎肠球菌疫苗株及其应用。所述的疫苗株以从猪肠道结肠段分离获得的屎肠球菌作为疫苗抗原传递活载体，其中含有eGFP标记的组成型表达TGEV S蛋白D抗原位点和PEDV S蛋白中和表位区ps420蛋白的重组表达载体。由上述重组屎肠球菌疫苗株制备得到的抗猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻的二价口服疫苗可达到一次免疫预防两种疾病的目的，且具有绿色环保、高效安全、益生性好等特点。

公开(公告)号：CN101968487A

公开(公告)日：2011-02-09

申请号：CN200910206028.X

申请日：2009-10-09

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 李一经 ,  葛俊伟 ,  乔薪瑗 ,  姜艳平 ,  陆佳

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/02 ,  G01N33/12 ,  C07K16/12 ,  C12N15/06 ,  C12P21/08

Abstract: 本发明涉及一种检测李斯特氏菌溶血素的免疫胶体金试纸及其制备方法，属于生物技术领域。本发明首先纯化了由重组大肠杆菌表达的李斯特氏菌溶血素，然后用纯化的李斯特氏菌溶血素制备多克隆抗体和单克隆抗体。用胶体金标记单克隆抗体作为示踪物，分别在检测线和质控线的相应位置包被抗溶血素多克隆抗体和抗鼠的多克隆抗体，两者可与相应的抗原发生特异性结合而被截留，呈现红色。可以根据检测线和质控线的显色与否判定阴阳性结果。本发明具有取样简便、特异性强、敏感性高等特点，可以方便、快捷、准确地在5min内检测李斯特氏菌溶血素，也可用于检测动物及其组织、青贮饲料、食品、肉制品、粪便等样品中是否污染了产溶血素的李斯特氏菌。