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公开(公告)号：CN101525589A
公开(公告)日：2009-09-09
申请号：CN200910071262.6
申请日：2009-01-14
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种表达传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreas necrosis virus，IPNV)VP3蛋白的重组干酪乳杆菌及制法。根据传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点，设计一对引物，进行PCR，获得含有IPNV VP3基因主要抗原位点的618bp目的片段，将扩增得到的IPNVVP3基因与表面表达的载体质粒pPG1进行连接，通过电转化进入宿主菌干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393细胞内，含阳性重组质粒pPG1－IPNV VP3的干酪乳杆菌命名为pPG1－IPNV VP3/L.casei 393。将重组pPG1－IPNV VP3/L.casei 393在乳糖的诱导下进行表达。本发明中构建了传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白干酪乳杆菌表达载体系统，表达了含有IPNV VP3蛋白主要抗原位点的约31KDa的目的蛋白，免疫印迹实验和间接免疫荧光试验均表明，所表达的外源蛋白能够与IPNV免疫血清发生反应，表明重组VP3蛋白与IPNV天然抗原一样具有相同的抗原性。
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公开(公告)号：CN104911152B
公开(公告)日：2018-03-30
申请号：CN201510309061.0
申请日：2015-06-08
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一株重组传染性造血器官坏死病毒rIHNV HLJ‑09株及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述病毒rIHNV HLJ‑09株的微生物保藏号为CGMCC No.8606，通过感染重组病毒的细胞传代实验证明此病毒能够稳定传代。重组病毒rIHNV HLJ‑09腹腔接种虹鳟幼鱼，结果导致幼鱼发病死亡，致死率可达90％，表明此病毒具有与亲代HLJ‑09株病毒相似的致病特性。进一步，本发明中利用rIHNV HLJ‑09反向遗传系统，将rIHNV HLJ‑09的NV ORF用报告基因EGFP(绿色荧光蛋白)编码基因替换，成功拯救病毒，拯救病毒命名为rIHNV‑EGFP。激光共聚焦显微镜观察rIHNV‑EGFP病毒侵染的细胞可观察到明显的绿色荧光，说明该rIHNV HLJ‑09病毒株可应用于表达外源蛋白。
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公开(公告)号：CN101508969A
公开(公告)日：2009-08-19
申请号：CN200910071260.7
申请日：2009-01-14
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种表达传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreas necrosis virus，IPNV)VP2蛋白的重组干酪乳杆菌及制法。根据传染性胰腺坏死病毒VP2蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点，设计一对引物，进行PCR，获得含有IPNV VP2基因主要抗原位点的1095bp目的片段，将扩增得到的IPNV VP2基因与表面表达的载体质粒pPG1进行连接，通过电转化进入宿主菌干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393细胞内，含阳性重组质粒pPG1－IPNV VP2的干酪乳杆菌命名为pPG1－IPNV VP2/L.casei 393。将重组pPG1－IPNV VP2/L.casei 393在乳糖的诱导下进行表达。本发明中构建了传染性胰腺坏死病毒VP2蛋白干酪乳杆菌表达载体系统，表达了含有IPNV VP2蛋白主要抗原位点的约40KDa的目的蛋白，免疫印迹实验和间接免疫荧光试验均表明，所表达的外源蛋白能够与IPNV免疫血清发生反应，表明重组VP2蛋白与IPNV天然抗原一样具有相同的抗原性。
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公开(公告)号：CN104911152A
公开(公告)日：2015-09-16
申请号：CN201510309061.0
申请日：2015-06-08
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一株重组传染性造血器官坏死病毒rIHNV HLJ-09株及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述病毒rIHNV HLJ-09株的微生物保藏号为CGMCC No.8606，通过感染重组病毒的细胞传代实验证明此病毒能够稳定传代。重组病毒rIHNV HLJ-09腹腔接种虹鳟幼鱼，结果导致幼鱼发病死亡，致死率可达90％，表明此病毒具有与亲代HLJ-09株病毒相似的致病特性。进一步，本发明中利用rIHNV HLJ-09反向遗传系统，将rIHNV HLJ-09的NV ORF用报告基因EGFP(绿色荧光蛋白)编码基因替换，成功拯救病毒，拯救病毒命名为rIHNV-EGFP。激光共聚焦显微镜观察rIHNV-EGFP病毒侵染的细胞可观察到明显的绿色荧光，说明该rIHNV HLJ-09病毒株可应用于表达外源蛋白。
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