蜜柑萎缩病毒RT-PCR检测方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN101948935A

    公开(公告)日:2011-01-19

    申请号:CN201010280823.6

    申请日:2010-09-14

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明公开了一种检测温州蜜柑萎缩病毒的RT-PCR检测方法和试剂盒,属于生物技术领域。本方法通过提取核酸、应用温州蜜柑萎缩病毒特异性引物进行RT-PCR扩增及电泳来判断检测样品中是否存在温州蜜柑萎缩病毒:电泳图谱中如出现251bp特征性条带,表明该样品中存在温州蜜柑萎缩病毒,如果没有出现251bp特征性条带,表明该样品中不存在温州蜜柑萎缩病毒。本发明还相应地建立了检测试剂盒,可特异、灵敏、高效地检测温州蜜柑萎缩病毒,适用于田间样品检测、温州蜜柑萎缩病毒流行监控、脱毒苗木鉴定等多种用途。

    同时检测木质部难养菌和柑桔麻风病毒病多重RT-PCR检测方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN101914634A

    公开(公告)日:2010-12-15

    申请号:CN201010282065.1

    申请日:2010-09-15

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明公开了一种同时检测木质部难养菌和柑桔麻风病毒病多重RT-PCR检测方法及试剂盒,其关键在于:以木质部难养菌上游引物、木质部难养菌下游引物、柑桔麻风病毒上游引物、柑桔麻风病毒下游引物对待侧样品进行RT-PCR扩增,最后电泳鉴定。同时也提高了一种产品操作简便,适合大规模、高通量的样品分析的检测试剂盒。速度快,从样品制备到获取检测结果仅需6小时,特别适合口岸检疫;重复性好、稳定性高。同一样品的不同检测批次,不同人员操作,其结果一致性100%;试剂盒产品操作简便,适合大规模、高通量的样品分析。

    柑橘黄龙病病原菌的试管培养方法

    公开(公告)号:CN112725225B

    公开(公告)日:2023-06-16

    申请号:CN202011587109.1

    申请日:2020-12-29

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明属于微生物技术领域,具体涉及一种柑橘黄龙病病原菌的试管培养方法。所述培养方法,包括:柑橘黄龙病病原菌培养方法,其特征在于,包括:(1)柑橘黄龙病毒源准备;(2)毒源材料表面消毒处理;(3)试管砧木准备和嫁接接种;(4)增殖培养;所述增殖培养包括以下步骤:MS液体培养基配制,向培养基中添加多菌灵,分装到带滤纸桥的试管中,灭菌;随后采用试管嫁接法接种黄龙病病原菌,切取经消毒处理的毒源材料的腋芽,嫁接于柑橘试管砧木上;然后将嫁接苗放入滤纸桥中;再于24‑28℃暗室培养14~21d,待试管嫁接带菌芽的萌芽长至0.5‑1.0cm时,转入12‑16h的光周期下培养。本发明的方法重现性好;可使柑橘黄龙病病原菌短时间内增殖到高浓度水平。

    柑橘叶斑驳病毒RT-RPA检测的特异引物、试剂盒和方法

    公开(公告)号:CN111690777B

    公开(公告)日:2023-06-02

    申请号:CN202010680187.X

    申请日:2020-07-15

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测的特异引物,上游引物:5’‑ATGAACACTCACGGCGATGAAATTCCCACA‑3’,下游引物:5’‑GGATCCCCCATTAAATTCCATAAGCCAGTC‑3’。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测试剂盒,含有前述的特异引物。还公开了一种柑橘叶斑驳病毒RT‑RPA检测的方法:1)提取待测样品RNA;2)利用提取的样品RNA进行RT‑RPA反应,所用特异引物为前述的特异引物;3)RT‑RPA反应完成后对反应产物进行检测,检测到目标扩增对象的即为阳性样品。本发明方法特异性强、灵敏度和RT‑PCR相当,操作简单便捷,检测时间很短。

    一种降低柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法

    公开(公告)号:CN110741854B

    公开(公告)日:2021-10-26

    申请号:CN201911102294.8

    申请日:2019-11-12

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明属于植物病害防治技术领域,具体涉及一种降低患柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法。应用碳量子点纳米颗粒制备碳量子点纳米土霉素,并树干注射于黄龙病罹病柑橘植株。所述碳量子点纳米土霉素的制备在于碳量子点纳米颗粒制备和碳量子点纳米土霉素制备。所述碳量子点纳米土霉素具有尺寸小的优点,小于筛管的孔径,而病原菌寄生于植物的筛管中,因此具有较好的杀菌效果;且相应的溶液性质稳定,均一,符合注射要求。所提供的降低患柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法对于柑橘黄龙病的防治具有重要意义,可在农业中具有大规模应用的潜力。

    一种同时检测柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的多重RT-PCR方法及其应用

    公开(公告)号:CN106480231B

    公开(公告)日:2020-01-14

    申请号:CN201611264705.X

    申请日:2016-12-30

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明涉及一种同时检测柑橘黄化脉明病毒和柑橘衰退病毒2种柑橘病毒的多重RT‑PCR方法。该方法选用CYCVC和CTV 2种病原外壳蛋白保守序列及内参基因的特异性引物,对影响多重PCR的Mg2+、dNTP浓度、引物浓度和退火温度进行了调整和优化,建立同时检测CYCVC和CTV的一步法多重RT‑PCR方法,灵敏度与单一RT‑PCR检测灵敏度一致。利用该方法对33个田间样品检测结果表明,CYVCV和CTV感染率分别为54.5%和66.7%,复合侵染的样品高达36.4%。可用于大量田间样品中CYVCV和CTV的同时快速检测,对提高柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的高效准确检测和及时有效防治具有重要意义。

    一种同时提高柑桔嫁接成活率和萌发率的方法

    公开(公告)号:CN110199699A

    公开(公告)日:2019-09-06

    申请号:CN201910593388.3

    申请日:2019-07-03

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明提供一种同时提高柑桔嫁接成活率和萌发率的方法,所述方法为将柑桔接穗嫁接至与之成熟度匹配的砧木苗上,所述接穗具有叶子,采用保湿装置对接穗和砧木进行保湿处理,培养,培养10~20天后解除保湿装置,继续培养。采用本方法既可以提高嫁接的成活率,也可以提高接芽的萌发率。

    一种同步检测三种柑橘病毒的RT-qPCR试剂盒

    公开(公告)号:CN105483284B

    公开(公告)日:2018-07-06

    申请号:CN201510906257.8

    申请日:2015-12-08

    Applicant: 西南大学

    Abstract: 本发明公开了一种同步检测CYVCV、CTV和CTLV的实时荧光定量RT‑qRT试剂盒,包括如下3对病毒特异性RT‑qPCR引物:SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID NO:6。本发明通过一步RT‑qPCR反应可以实现CYVCV、CTV、CTLV的同步检测及病毒定量。本发明方法与常规RT‑PCR检测方法相比,提升了CYVCV、CTLV和CTV检测灵敏度100倍以上,检测时间节省3倍以上,污染几率降低30%以上,在诊断病害发生和监控病害流行及维护柑橘产业安全等方面具有良好的应用前景。

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