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公开(公告)号：CN117186207A
公开(公告)日：2023-12-08
申请号：CN202311150311.1
申请日：2023-09-07
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/705 , C12N15/12 , C07K16/28 , A61K31/7088 , A61P31/14 , A23K20/158 , A23K50/30
Abstract: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒感染的特异性宿主因子及其应用。该特异性宿主因子，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或具有与如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列有至少90％同一性且具有作为PDCoV感染的宿主因子活性的氨基酸序列。本发明首次发现特异性宿主因子—转铁蛋白受体1能够显著增强猪德尔塔冠状病毒感染，干扰转铁蛋白受体1表达能够显著抑制猪德尔塔冠状病毒感染；转铁蛋白受体1的胞外区与猪德尔塔冠状病毒S蛋白的受体结合域互相作用促进猪德尔塔冠状病毒感染宿主细胞，封闭细胞表面的转铁蛋白受体1减少猪德尔塔冠状病毒感染。
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公开(公告)号：CN116042531B
公开(公告)日：2023-10-24
申请号：CN202211086715.4
申请日：2022-09-06
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/20 , C12N15/13 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种抗猪δ冠状病毒NS7和NS7a蛋白杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株PDCoV‑NS7‑08A，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2022年8月18日，保藏编号为CCTCC NO:C2022271。本发明所涉及的杂交瘤细胞具有稳定的抗体分泌能力，所分泌的单克隆抗体与猪δ冠状病毒NS7和NS7a蛋白具有良好的反应特异性，其识别的抗原表位在猪δ冠状病毒NS7蛋白第111~117位氨基酸，其多肽序列为111PSTLEED117，该表位尚未见报道。本发明为以后进行猪δ冠状病毒病原学及其致病机理的研究奠定了良好的物质基础。
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公开(公告)号：CN116445528A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310401917.1
申请日：2023-04-14
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/63 , C12N15/50 , C12N7/01 , A61K39/215 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了重组猪流行性腹泻病毒感染性克隆的构建方法及其感染性克隆和应用，包括以下步骤：第一轮基因重组扩增打靶片段；电转化打靶片段得到阳性克隆；将得到的阳性克隆通过第二轮重组去掉酶切位点和抗性基因得到表达目的基因的PEDV感染性克隆。本发明建立了基于细菌人工染色体的PEDV反向遗传学系统，通过Red同源重组技术，在体外快速高效地编辑PEDV基因组，为研究病毒的分子生物学特性、致病机理以及开发基因工程疫苗提供有力的技术平台，该方法高效便捷、特异性强，为体外编辑PEDV基因组及其它病毒基因组提供了新的方法。
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公开(公告)号：CN116042531A
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202211086715.4
申请日：2022-09-06
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/20 , C12N15/13 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明公开了一种抗猪δ冠状病毒NS7和NS7a蛋白杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株命名为杂交瘤细胞株PDCoV‑NS7‑08A，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2022年8月18日，保藏编号为CCTCC NO:C2022271。本发明所涉及的杂交瘤细胞具有稳定的抗体分泌能力，所分泌的单克隆抗体与猪δ冠状病毒NS7和NS7a蛋白具有良好的反应特异性，其识别的抗原表位在猪δ冠状病毒NS7蛋白第111~117位氨基酸，其多肽序列为111PSTLEED117，该表位尚未见报道。本发明为以后进行猪δ冠状病毒病原学及其致病机理的研究奠定了良好的物质基础。
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公开(公告)号：CN115991765A
公开(公告)日：2023-04-21
申请号：CN202211133538.0
申请日：2022-09-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K16/10 , C12N5/20 , C12N15/50 , C12N15/70 , G01N33/535 , G01N33/569 , G01N33/577 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了抗猪δ冠状病毒M蛋白单克隆抗体及其识别的抗原表位肽和应用。本发明通过截短猪δ冠状病毒M基因使其有利于与pCold‑TF带有担体蛋白的质粒在宿主大肠杆菌中形成易于表达的、利于小鼠产生免疫原性的融合蛋白，经过细胞融合、筛选和亚克隆获得分泌抗猪δ冠状病毒M蛋白的单克隆杂交瘤细胞株以及由该细胞株分泌的抗猪δ冠状病毒M蛋白单克隆抗体。本发明提供的单克隆抗体能够特异识别猪δ冠状病毒的M蛋白，与其他冠状病毒没有交叉反应。本发明进一步提供了该单克隆抗体识别的抗原表位肽，其氨基酸序列为SPESRL所示，其具有良好特异性。本发明提供的单克隆抗体或其识别的抗原表位肽能应用于检测或诊断猪δ冠状病毒。
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公开(公告)号：CN113717943B
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202110937887.7
申请日：2021-08-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/113 , C12N15/867 , C12Q1/02 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及ST IRF3/IRF7KO细胞系及其构建方法和应用，本发明针对猪源IRF3、IRF7基因序列的外显子设计特异性sgRNA，插入载体lentiCRISPR v2上，得到慢病毒载体lentiCRISPR v2‑IRF3和lentiCRISPR v2‑IRF7。将重组质粒转染HEK293T细胞后，收集慢病毒感染ST细胞。通过抗生素筛选出成功被感染的细胞，并进行测序、Western Blot验证。本发明所述的ST IRF3/IRF7KO细胞系可运用于猪源病毒的基础和应用研究，也为病毒疫苗生产中细胞系的选用提供了有价值的新材料。
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公开(公告)号：CN114214338B
公开(公告)日：2023-02-03
申请号：CN202110986944.0
申请日：2021-08-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/45 , C12N15/11 , C12N15/65 , C12N15/50 , C12N7/01 , C12N15/86 , A61K39/215 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及猪源副流感病毒5型(PIV5)全长感染性克隆及其制备方法和应用，本发明利用一株分离自中国湖北腹泻猪的PIV5毒株，构建出以细菌质粒为骨架的病毒感染性克隆pPIV5‑HuB/YC，并能成功拯救出病毒，这是国内首次构建猪源PIV5全长感染性克隆。同时，将EGFP基因插入PIV5感染性克隆病毒基因组中，成功拯救出能表达该绿色荧光蛋白的重组PIV5病毒。在此基础之上，将猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的S基因替换EGFP基因，并成功拯救出能表达PDCoV S的重组PIV5病毒。本发明为深入开展PIV5的基础和应用研究提供了有效的平台，具有重要的科学应用价值。
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公开(公告)号：CN112143754B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN202011055355.2
申请日：2020-09-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/66 , C12N7/00 , G01N33/569 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及盖塔病毒的全长基因组感染性克隆及其构建方法和应用，本发明针对HuN1株盖塔病毒全长基因序列设计特异性引物，并在上下游分别插入相应的酶切位点，通过RT‑PCR方法扩增HuN1株GETV基因片段，逐步克隆到质粒载体pACYC‑177上，得到病毒全长基因组感染性克隆pAC‑GETV。将该感染性克隆转染至真核细胞BHK21，成功拯救出病毒rGETV，其与亲本病毒具有相似的生长特性，并且可以在BHK21上连续传代至少6代。本发明所述感染性克隆有利于甲病毒载体疫苗的研究，对于改善甲病毒载体疫苗具有一定的意义。
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