公开(公告)号：CN119751601A

公开(公告)日：2025-04-04

申请号：CN202411658970.0

申请日：2024-11-20

Applicant: 扬州大学

Inventor： 牟春晓 ,  潘朔楠 ,  陈振海 ,  相英杰

IPC: C07K14/165 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12N15/50 ,  C07K16/10 ,  C12N15/85 ,  C12N7/01 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了PEDV S蛋白N‑糖基化位点突变病毒及其应用。本发明将突变病毒免疫小鼠检测S蛋白的N‑糖基化对病毒免疫原性的影响，结果发现S蛋白的N216、N324、N1261位糖基化位点单点突变的重组PEDV病毒株能够激活小鼠产生更高水平的中和抗体，可提升3.2倍（N216A）、6.7倍（N324A）、3.2倍（N1261A），这三个位点突变的重组PEDV病毒株可以作为有潜力的PEDV灭活疫苗候选株。

公开(公告)号：CN117286162B

公开(公告)日：2024-08-23

申请号：CN202310416162.2

申请日：2023-04-14

Applicant: 扬州大学

Inventor： 牟春晓 ,  潘朔楠 ,  陈振海 ,  陈密 ,  包文斌

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/50 ,  C12N7/01 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了重组猪δ冠状病毒感染性克隆及其构建方法和应用，包括以下步骤：第一轮基因重组扩增打靶片段；电转化打靶片段得到阳性克隆；将得到的阳性克隆通过第二轮重组去掉酶切位点和抗性基因得到表达目的基因的PDCoV感染性克隆。本发明建立了基于细菌人工染色体的PDCoV反向遗传学系统，通过Red同源重组技术，在体外快速高效地编辑PDCoV基因组，为研究病毒的分子生物学特性、致病机理以及开发基因工程疫苗提供有力的技术平台，该方法高效便捷、特异性强，为体外编辑PDCoV基因组及其它病毒基因组提供了新的方法。

公开(公告)号：CN116445528B

公开(公告)日：2024-08-09

申请号：CN202310401917.1

申请日：2023-04-14

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陈振海 ,  潘朔楠 ,  牟春晓 ,  陈密 ,  包文斌

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/50 ,  C12N7/01 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了重组猪流行性腹泻病毒感染性克隆的构建方法及其感染性克隆和应用，包括以下步骤：第一轮基因重组扩增打靶片段；电转化打靶片段得到阳性克隆；将得到的阳性克隆通过第二轮重组去掉酶切位点和抗性基因得到表达目的基因的PEDV感染性克隆。本发明建立了基于细菌人工染色体的PEDV反向遗传学系统，通过Red同源重组技术，在体外快速高效地编辑PEDV基因组，为研究病毒的分子生物学特性、致病机理以及开发基因工程疫苗提供有力的技术平台，该方法高效便捷、特异性强，为体外编辑PEDV基因组及其它病毒基因组提供了新的方法。

公开(公告)号：CN116218789B

公开(公告)日：2023-09-22

申请号：CN202310016649.1

申请日：2023-01-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 吴慧光 ,  李晨 ,  陈振海 ,  谢思汉 ,  牟春晓

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一株杂交瘤细胞株和由所述杂交瘤细胞株分泌产生的抗PDCoVNS6蛋白的单克隆抗体，所述抗PDCoVNS6蛋白的单克隆抗体一种具有高特异性、能够特异识别PDCoV的NS6蛋白，可用来检测猪δ冠状病毒。本发明还公开了所述杂交瘤细胞株在制备含抗PDCoVNS6蛋白的单克隆抗体的试剂、试剂盒或试纸条中的应用。本发明还公开了一种试剂、试剂盒或试纸条，含有所述杂交瘤细胞株和/或所述单克隆抗体。本发明还公开了所述杂交瘤细胞株和/或所述单克隆抗体和/或所述试剂、试剂盒或试纸条在猪δ冠状病毒的免疫检测中的应用。

公开(公告)号：CN117286162A

公开(公告)日：2023-12-26

申请号：CN202310416162.2

申请日：2023-04-14

Applicant: 扬州大学

Inventor： 牟春晓 ,  潘朔楠 ,  陈振海 ,  陈密 ,  包文斌

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/50 ,  C12N7/01 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了重组猪δ冠状病毒感染性克隆及其构建方法和应用，包括以下步骤：第一轮基因重组扩增打靶片段；电转化打靶片段得到阳性克隆；将得到的阳性克隆通过第二轮重组去掉酶切位点和抗性基因得到表达目的基因的PDCoV感染性克隆。本发明建立了基于细菌人工染色体的PDCoV反向遗传学系统，通过Red同源重组技术，在体外快速高效地编辑PDCoV基因组，为研究病毒的分子生物学特性、致病机理以及开发基因工程疫苗提供有力的技术平台，该方法高效便捷、特异性强，为体外编辑PDCoV基因组及其它病毒基因组提供了新的方法。

公开(公告)号：CN113604439B

公开(公告)日：2023-05-26

申请号：CN202110918982.2

申请日：2021-08-11

Applicant: 扬州大学

Inventor： 牟春晓 ,  陈振海 ,  王羽茜 ,  吴慧光

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12N15/13

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种分泌猪萨佩罗病毒VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中所述杂交瘤细胞株保藏编号CCTCC NO:C2021177，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学。本发明所涉及的杂交瘤细胞具有稳定的抗体分泌能力，所分泌的单克隆抗体与猪萨佩罗病毒VP1蛋白具有良好的反应特异性，其识别的抗原表位在猪萨佩罗病毒VP1蛋白第40～46位氨基酸，其多肽序列为40PALTAAE46，该表位尚未见报道。本发明为以后进行猪萨佩罗病毒病原学及其致病机理的研究奠定了良好的物质基础。

公开(公告)号：CN114214338A

公开(公告)日：2022-03-22

申请号：CN202110986944.0

申请日：2021-08-26

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陈振海 ,  成赛鹏 ,  牟春晓 ,  吴慧光 ,  潘朔楠

IPC: C12N15/45 ,  C12N15/11 ,  C12N15/65 ,  C12N15/50 ,  C12N7/01 ,  C12N15/86 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及猪源副流感病毒5型(PIV5)全长感染性克隆及其制备方法和应用，本发明利用一株分离自中国湖北腹泻猪的PIV5毒株，构建出以细菌质粒为骨架的病毒感染性克隆pPIV5‑HuB/YC，并能成功拯救出病毒，这是国内首次构建猪源PIV5全长感染性克隆。同时，将EGFP基因插入PIV5感染性克隆病毒基因组中，成功拯救出能表达该绿色荧光蛋白的重组PIV5病毒。在此基础之上，将猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的S基因替换EGFP基因，并成功拯救出能表达PDCoV S的重组PIV5病毒。本发明为深入开展PIV5的基础和应用研究提供了有效的平台，具有重要的科学应用价值。

公开(公告)号：CN113717943A

公开(公告)日：2021-11-30

申请号：CN202110937887.7

申请日：2021-08-16

Applicant: 扬州大学

Inventor： 牟春晓 ,  王婧 ,  吴慧光 ,  陈振海

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/867 ,  C12Q1/02 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及ST IRF3/IRF7KO细胞系及其构建方法和应用，本发明针对猪源IRF3、IRF7基因序列的外显子设计特异性sgRNA，插入载体lentiCRISPR v2上，得到慢病毒载体lentiCRISPR v2‑IRF3和lentiCRISPR v2‑IRF7。将重组质粒转染HEK293T细胞后，收集慢病毒感染ST细胞。通过抗生素筛选出成功被感染的细胞，并进行测序、Western Blot验证。本发明所述的ST IRF3/IRF7KO细胞系可运用于猪源病毒的基础和应用研究，也为病毒疫苗生产中细胞系的选用提供了有价值的新材料。

公开(公告)号：CN113604439A

公开(公告)日：2021-11-05

申请号：CN202110918982.2

申请日：2021-08-11

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陈振海 ,  王羽茜 ,  牟春晓 ,  吴慧光

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12N15/13

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种分泌猪萨佩罗病毒VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中所述杂交瘤细胞株保藏编号CCTCC NO:C2021177，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学。本发明所涉及的杂交瘤细胞具有稳定的抗体分泌能力，所分泌的单克隆抗体与猪萨佩罗病毒VP1蛋白具有良好的反应特异性，其识别的抗原表位在猪萨佩罗病毒VP1蛋白第40～46位氨基酸，其多肽序列为40PALTAAE46，该表位尚未见报道。本发明为以后进行猪萨佩罗病毒病原学及其致病机理的研究奠定了良好的物质基础。

公开(公告)号：CN109810976B

公开(公告)日：2019-11-05

申请号：CN201910110764.9

申请日：2019-02-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 陈振海 ,  王敏敏 ,  孙怀昌 ,  张鑫宇 ,  周晓慧 ,  牟春晓

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/41 ,  C12N15/86 ,  C12Q1/70 ,  C12N7/01

Abstract: 本发明涉及猪塞内卡病毒全长感染性克隆的制备方法及应用，包括如下步骤：（1）SVV/GD05株基因组全序列的扩增；（2）pSVV‑GD05病毒感染性克隆质粒的构建；（3）pSVV‑GD05‑iLOV重组质粒的构建；（4）亲本病毒（SVV‑GD05）与重组病毒（SVV‑GD05‑iLOV）拯救。本发明利用一株分离自中国猪群的SVV毒株，构建出以细菌质粒为骨架的病毒感染性克隆pSVV‑GD05，并能成功拯救出病毒。同时，将报告基因iLOV插入SVV感染性克隆病毒基因组中，成功拯救出能表达该报告基因的重组SVV病毒。本发明为深入开展SVV的基础和应用研究提供了有效的平台，具有重要的科学应用价值。