一种水稻稻瘟病抗性基因RMg39及其应用

    公开(公告)号:CN104404052B

    公开(公告)日:2017-01-25

    申请号:CN201410462177.3

    申请日:2014-09-11

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种水稻稻瘟病抗性基因RMg39及其应用。本发明公开了水稻稻瘟病新抗性基因RMg39的核苷酸序列及其编码的氨基酸多肽序列。此基因属于NBS-LRR类型抗病基因家族的成员。本发明中的抗稻瘟病基因克隆自对稻瘟病菌表现出高抗的水稻品系,并将其转化至对稻瘟病菌感病的品种中,利用稻瘟病菌侵染的方法对其抗病能力进行评估,从而最终确定该基因对水稻稻瘟病具有抗性。

    一种水稻稻瘟病抗性基因RMg7或RMg8或RMg9及其应用

    公开(公告)号:CN102732531A

    公开(公告)日:2012-10-17

    申请号:CN201210182285.6

    申请日:2012-06-05

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种水稻稻瘟病抗性基因RMg7或RMg8或RMg9及其应用。本发明公开了水稻稻瘟病新抗性基因RMg7、RMg8和RMg9的核苷酸序列及其编码的氨基酸多肽序列。这三个基因都属于NBS-LRR类型抗病基因家族的成员。本发明中的三个抗稻瘟病基因均克隆至对稻瘟病菌表现出高抗的水稻品系,并将其转化至对稻瘟病菌感病的品种中,利用稻瘟病菌侵染的方法对其抗病能力进行评估,从而最终确定该三个基因对稻瘟病具有抗性。

    用于T-A克隆的T载体制备方法

    公开(公告)号:CN100383248C

    公开(公告)日:2008-04-23

    申请号:CN200510123112.7

    申请日:2005-12-15

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明公开了用于T-A克隆的T载体制备方法,选择一个高拷贝数的常用质粒,以此质粒为模板设计四对引物,通过定点突变构建两种在特定序列有差异的突变质粒;在两种突变质粒的多克隆位点处分别构建TTTTAAA及TTTAAAA序列盒,并分别引入两个不同的酶切位点BamHI和HindIII;将突变质粒分别导入细菌扩增,并将扩增的等量质粒用可识别TTTAAA序列的内切酶切割,混合、变性、复性,反应后的混合物酶切,去除亲本分子,即可分离出T载体。本发明采用独特的生物合成技术生产T载体,这种由生物合成的天然T载体,具有合成方便,生产成本低,克隆效率高,质量稳定等特点,用本方法构建的T载体完成了多个基因的克隆,结果表明其重组效率达到了90%以上。

    一种天然AFLP接头制备的方法

    公开(公告)号:CN101037685A

    公开(公告)日:2007-09-19

    申请号:CN200710020069.0

    申请日:2007-02-09

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 天然AFLP接头的方法制备,选择质粒作为载体,利用两个互补的DNA作为引物,且这两个引物序列中有AFLP需要的酶切位点EcoR I/Mse I、Apa I/Taq I酶切位点或其他的酶切位点,通过PCR方法,扩增出具有酶切位点EcoR I和Mse I、Apa I和Taq I的接头核心区域序列,把核心区域序列连入pGEM-T载体,同时在核心区域序列的两翼加上不同的基因DNA片段各构建成一个接头单元序列,然后把不同的接头单元序列通过pBluescript KS载体串联起来,构建为含有多拷贝接头DNA的载体,再导入大肠杆菌内天然扩增接头,最后利用EcoR I和Mse I、Apa I和TaqI酶切出接头序列,得到AFLP接头DNA。

    制备DNA接头的方法
    18.
    发明公开

    公开(公告)号:CN1618962A

    公开(公告)日:2005-05-25

    申请号:CN200410065679.9

    申请日:2004-11-12

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 制备DNA接头的方法,选择有一个多克隆位点的长度100bp-100K常用质粒,以此质粒为模板设计引物,通过突变PCR方法构建突变质粒,在ScaII和多克隆位点之间的片段引入新的酶切位点分别构建两种突变质粒或在质粒中引入新的多克隆位点和单酶切位点SacII,得到突变质粒pGAT4,导入细菌扩增,最后酶切分离得到目的接头。本发明采用独特的生物合成技术生产两种DNA接头(adaptor),即adaptor-ligation PCR所使用的接头和AFLP中所使用的系列接头的方法。这种由生物合成的天然DNA接头,具有合成方便,生产成本低,连接效率高,适用范围广,可选择的酶切位点多等特点。

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