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公开(公告)号：CN103146817A
公开(公告)日：2013-06-12
申请号：CN201310046929.3
申请日：2013-02-05
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: Y02A90/40
Abstract: 本发明涉及一种互花米草种群的SNP标记的分型方法，本方法根据高通量转录组测序筛选得到目标基因，通过PCR反应、PCR产物测序得到多个SNP位点。再由所有有效的SNP位点组成单倍体型用于分子标记以达到遗传分型。本发明在一次实验中，即可得到丰富的多态性信息。SNP标记遗传稳定、操作简便，适合用物种溯源。
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公开(公告)号：CN103146816B
公开(公告)日：2014-08-20
申请号：CN201310046894.3
申请日：2013-02-05
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: Y02A90/40
Abstract: 本发明涉及一种鉴定外来入侵物种互花米草种群的DNA分子标记方法，本方法根据高通量转录组测序筛选得到目标基因，通过PCR反应、PCR产物测序得到多个单核苷酸多态性（SNP）位点。再由所有有效的单核苷酸多态性位点组成单倍体型用于分子标记以达到遗传分型。本发明在一次实验中，即可得到丰富的多态性信息。单核苷酸多态性标记遗传稳定，可用于不同来源的样本，适宜高通量自动化分析。
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公开(公告)号：CN103146816A
公开(公告)日：2013-06-12
申请号：CN201310046894.3
申请日：2013-02-05
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: Y02A90/40
Abstract: 本发明涉及一种鉴定外来入侵物种互花米草种群的DNA分子标记方法，本方法根据高通量转录组测序筛选得到目标基因，通过PCR反应、PCR产物测序得到多个单核苷酸多态性（SNP）位点。再由所有有效的单核苷酸多态性位点组成单倍体型用于分子标记以达到遗传分型。本发明在一次实验中，即可得到丰富的多态性信息。单核苷酸多态性标记遗传稳定，可用于不同来源的样本，适宜高通量自动化分析。
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公开(公告)号：CN100383248C
公开(公告)日：2008-04-23
申请号：CN200510123112.7
申请日：2005-12-15
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了用于T-A克隆的T载体制备方法，选择一个高拷贝数的常用质粒，以此质粒为模板设计四对引物，通过定点突变构建两种在特定序列有差异的突变质粒；在两种突变质粒的多克隆位点处分别构建TTTTAAA及TTTAAAA序列盒，并分别引入两个不同的酶切位点BamHI和HindIII；将突变质粒分别导入细菌扩增，并将扩增的等量质粒用可识别TTTAAA序列的内切酶切割，混合、变性、复性，反应后的混合物酶切，去除亲本分子，即可分离出T载体。本发明采用独特的生物合成技术生产T载体，这种由生物合成的天然T载体，具有合成方便，生产成本低，克隆效率高，质量稳定等特点，用本方法构建的T载体完成了多个基因的克隆，结果表明其重组效率达到了90%以上。
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公开(公告)号：CN103114144A
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201310048133.1
申请日：2013-02-05
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: Y02A90/40
Abstract: 本发明涉及一种基于单核苷酸多态性标记的互花米草遗传分型方法，本方法根据高通量转录组测序筛选得到目标基因，通过PCR反应、PCR产物测序得到多个单核苷酸多态性位点。再由所有有效的单核苷酸多态性位点组成单倍体型用于分子标记以达到遗传分型。本发明操作简便、通量灵活、单核苷酸多态性标记遗传稳定可靠，可在生物学、遗传学研究中推广应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101899489A
公开(公告)日：2010-12-01
申请号：CN200910027339.X
申请日：2009-05-27
Applicant: 南京大学
IPC: C12P21/02 , C07K1/10 , C07K19/00 , C12N15/63 , C07K14/405
Abstract: 本发明公开了一种利用内含肽反式剪接模式化生产融合蛋白质的方法，可用于基因工程、酶的生产、医药生产、食品工业和农牧业等领域。本发明主要是利用内含肽反式剪接将有特定生物学功能的目的蛋白部分与通用功能的辅助蛋白连接在一起，从而得到融合蛋白质。选择目的蛋白T，辅助蛋白P1、P2，两种互不兼容的内含肽A和B(如蓝藻Synechocystis sp.PCC6803的DnaE和DnaB)，将内含肽A和B分别分解为氨基末端(N端)与羧基末端(C端)，即An、Ac、Bn、Bc。构建不同的载体系统分别经宿主表达后得到蛋白片段Ac-T-Bn，P1-An，Bc-P2，An，Bc。将得到的蛋白片段混合，进行内含肽反式剪接，生成融合蛋白P1-T-P2，P1-T或T-P2。
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公开(公告)号：CN103146817B
公开(公告)日：2014-07-23
申请号：CN201310046929.3
申请日：2013-02-05
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: Y02A90/40
Abstract: 本发明涉及一种互花米草种群的SNP标记的分型方法，本方法根据高通量转录组测序筛选得到目标基因，通过PCR反应、PCR产物测序得到多个SNP位点。再由所有有效的SNP位点组成单倍体型用于分子标记以达到遗传分型。本发明在一次实验中，即可得到丰富的多态性信息。SNP标记遗传稳定、操作简便，适合用物种溯源。
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公开(公告)号：CN102286518B
公开(公告)日：2013-07-17
申请号：CN201110128885.X
申请日：2011-05-18
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种构建严谨型T7表达系统宿主菌的方法。利用内含肽反式剪接构建严谨型T7表达系统宿主菌，将T7RNA聚合酶分解为氨基末端即N端聚合酶与羧基末端即C端聚合酶，选择一个内含肽I，将内含肽I也分解为氨基末端即N端与羧基末端即C端的内含肽I；将这两个氨基末端的聚合酶与内含肽I融合，在这个基因上游融合常用启动子及其控制基因；同样的，将这两个羧基末端的聚合酶与内含肽I融合融合，在这个基因上游融合一个常用启动子及其控制基因；将这两个融合部分插入大肠杆菌的染色体或低拷贝数质粒中，就得到了严谨型T7表达系统宿主菌。
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公开(公告)号：CN103114144B
公开(公告)日：2014-07-23
申请号：CN201310048133.1
申请日：2013-02-05
Applicant: 南京大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: Y02A90/40
Abstract: 本发明涉及一种基于单核苷酸多态性标记的互花米草遗传分型方法，本方法根据高通量转录组测序筛选得到目标基因，通过PCR反应、PCR产物测序得到多个单核苷酸多态性位点。再由所有有效的单核苷酸多态性位点组成单倍体型用于分子标记以达到遗传分型。本发明操作简便、通量灵活、单核苷酸多态性标记遗传稳定可靠，可在生物学、遗传学研究中推广应用。
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公开(公告)号：CN102286518A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110128885.X
申请日：2011-05-18
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明公开了一种构建严谨型T7表达系统宿主菌的方法。利用内含肽反式剪接构建严谨型T7表达系统宿主菌，将T7RNA聚合酶分解为氨基末端即N端聚合酶与羧基末端即C端聚合酶，选择一个内含肽I，将内含肽I也分解为氨基末端即N端与羧基末端即C端的内含肽I；将这两个氨基末端的聚合酶与内含肽I融合，在这个基因上游融合常用启动子及其控制基因；同样的，将这两个羧基末端的聚合酶与内含肽I融合融合，在这个基因上游融合一个常用启动子及其控制基因；将这两个融合部分插入大肠杆菌的染色体或低拷贝数质粒中，就得到了严谨型T7表达系统宿主菌。
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