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公开(公告)号：CN109666692B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201811451198.X
申请日：2018-11-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/82 , A01H5/00 , A01H5/06 , A01H6/54 , C12N7/00 , C12Q1/18 , C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种发根农杆菌诱导的大豆发状根与大豆花叶病毒(ARISHR‑SMV)病害系统的方法及其应用，该方法包括以下步骤(1)利用发根农杆菌侵染大豆子叶诱导愈伤组织；(2)提纯大豆花叶病毒(SMV)；(3)大豆愈伤组织接种纯化的SMV粒子；(4)大豆发状根中SMV含量检测。本发明的方法成功应用到9个SMV株系，可快速、有效的鉴定SMV相关基因的功能，为分子标记辅助育种或转基因育种提供功能标记或基因，具有较大应用潜力，另外，本发明的方法还可以应用在大豆种质对SMV的抗性鉴定。
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公开(公告)号：CN109679967A
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201910081298.6
申请日：2019-01-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一个抗大豆花叶病毒基因GmRDBM的应用。本发明从抗大豆花叶病毒品种大白麻上克隆了一个编码CC-NBS-LRR功能域的基因GmRDBM。对其进行测序，并通过软件预测获得该基因编码的氨基酸序列。本发明利用Crispr/Cas9技术对大白麻的GmRDBM序列进行编辑，然后对敲除GmRDBM的植株进行接种大豆花叶病毒实验，证明了该基因是大白麻品种的抗大豆花叶病毒基因。本发明得到的这个基因及其蛋白序列可以用于大豆对大豆花叶病毒抗性的改良。
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公开(公告)号：CN116515901A
公开(公告)日：2023-08-01
申请号：CN202310594917.8
申请日：2023-05-25
Applicant: 南京农业大学 , 北京农业职业学院(中国共产党北京市委员会农村工作委员会党校)
IPC: C12N15/84 , C12N15/113 , A01H5/10 , A01H5/00 , A01H6/54
Abstract: 本发明公开了一种CRISPR/CasRx介导的提高大豆对大豆花叶病毒抗性的方法。本发明以大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus，SMV)的HC‑Pro基因作为靶标基因，对国内外SMV流行株系进行多重核苷酸序列比对，在保守区间内确定了靶点序列，构建了CRISPR/CasRx基因组定点编辑载体，进一步应用农杆菌介导大豆子叶节的遗传转化体系，获得一批阳性基因编辑大豆材料，通过SMV抗病鉴定、qRT‑PCR、DAS‑ELISA血清学实验，分别从表型水平、RNA水平和蛋白水平研究阳性基因编辑后代大豆植株对SMV的抗病情况，以期筛选出一批抗SMV大豆材料。本发明在大豆SMV抗性机制的研究和抗病育种中具有重要的理论意义和实用价值。
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公开(公告)号：CN112626114A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011528723.0
申请日：2020-12-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种寄主传递小RNA诱发大豆对SMV广谱抗性的速成系统，包括如下步骤：(1)筛选SMV基因组中的保守靶标序列并构建其相应的反向重复载体；(2)利用本氏烟与SMV病害系统结合根癌农杆菌介导的瞬时表达系统快速验证各反向重复载体对SMV的功效；(3)将步骤(2)SMV抗性筛选得到的最佳反向重复载体遗传转化进SMV易感大豆，用离体叶片试验初筛T1代转基因大豆，选出SMV抗性的阳性单株并保留其继续繁种(T1单株“一株两用”)，对所获后代植株SMV的广谱抗性进行评估，以获得广谱抗性的转基因大豆材料。通过本发明的方法，可快速有效、指向性明确的获得对SMV具有广谱抗性的转基因大豆材料。
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公开(公告)号：CN111996282A
公开(公告)日：2020-11-27
申请号：CN202010986972.8
申请日：2020-09-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/686 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种鉴定大豆对大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus,SMV)流行株系SC3抗性鉴定的SSR标记CH0211及其检测方法和应用，通过利用新开发的与抗大豆花叶病毒SC3株系基因紧密连锁的SSR标记CH0211对大豆品种进行抗病性选择，以期获得抗SMV SC3株系的大豆新种质。本发明避免了大豆常规抗花叶病毒育种的周期长、工作量大、选择效率低、抗病表型选择易受环境影响等缺点，可大幅提高抗病育种选择效率，为对基因型的直接选择提供了可能，将极大地推动大豆抗病育种进程。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111440818A
公开(公告)日：2020-07-24
申请号：CN202010095003.3
申请日：2020-02-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体和农杆菌菌株及其应用。可侵染烟草的大豆花叶病毒侵染性克隆载体序列如SEQ ID NO.1所示。所述的大豆花叶病毒侵染性克隆载体pCB301-SMV(SC7)在侵染烟草中应用。本发明中，我们选择能够侵染烟草的大豆花叶病毒株系(SC7)构建侵染性克隆载体，转化农杆菌并注射烟草后，成功的在烟草上形成了系统侵染。这将为烟草在大豆花叶病毒研究方面的应用奠定坚实可靠的基础。
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公开(公告)号：CN108753801B
公开(公告)日：2020-05-29
申请号：CN201810548495.X
申请日：2018-05-31
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了能够抑制农杆菌生长的大豆花叶病毒序列，并证明了该序列能够用于在农杆菌中直接实现重组克隆的筛选。农杆菌是植物转化系统重要宿主菌，但是构建的重组克隆需要在大肠杆菌中筛选之后转入农杆菌。本发明发现了大豆花叶病毒株系SC15具有抑制农杆菌生长的特性，而株系SC3和SC7没有同样的效果；通过病毒序列截短实验，本发明鉴定出SC15中农杆菌生长抑制相关的序列SC15P；通过利用该序列构建与gateway克隆系统兼容载体并进行LR反应及转化实验，最终本发明实现了利用SC15P直接在农杆菌中进行重组克隆的设想。
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公开(公告)号：CN110951755A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911338018.1
申请日：2019-12-23
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种大豆花叶病毒(SMV)保守片段CFO及由其构建的反向重复载体(CFO-TIR)在大豆对SMV广谱抗性中的应用。本发明首次对30条SMV基因组序列进行多序列比对和保守性计算，鉴定到一个保守性为92％的SMV片段CFO(核苷酸序列为SEQ ID NO:1)，构建CFO-TIR载体并遗传转化进SMV易感大豆品种NN1138-2中，该CFO-TIR载体介导了转基因大豆对多种SMV株系的抗性，解决了转基因植株对SMV的广谱抗性问题。本发明所获转基因材料对培育SMV广谱抗性大豆具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN103756975A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201310653591.8
申请日：2013-12-05
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/00 , C12Q1/70 , C12Q1/68 , G01N33/569 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用。使用保藏号为CCTCC？NO：V201349的大豆花叶病毒分离物侵染本氏烟草获得感染烟草的大豆花叶病毒。按照本发明所述的方法获得感染烟草的大豆花叶病毒在验证抗大豆花叶病毒抗性候选基因中的应用。本发明从众多分离物中筛选获得了能够侵染烟草的大豆花叶病毒，通过将该分离物侵染烟草并通过调查发病症状、南农1138-2回接实验、ELISA以及RT-PCR检测手段进行了证实。该发明获得了感染烟草的大豆花叶病毒，使得在烟草上验证大豆抗SMV候选基因功能成为现实，打破了大豆遗传转化难的限制。
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公开(公告)号：CN117551672B
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202311691882.6
申请日：2023-12-11
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一个抗大豆花叶病毒基因GmCSD的应用。本发明从大豆品种齐黄1号中克隆了候选基因GmCSD，其cDNA序列如SEQ ID NO.1所示。利用基于菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus，BPMV)的基因沉默(Virus induced gene silencing，VIGS)和过表达技术，将抗病品种齐黄1号中GmCSD沉默或在感病品种南农1138‑2中过表达GmCSD后，接种SC3株系后，与对照相比，植株内病毒含量分别升高和降低，表明该基因参与对大豆花叶病毒的抗性反应。本发明得到的GmCSD基因对未来提高大豆对大豆花叶病毒的抗性具有重要价值。
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