公开(公告)号：CN116515901A

公开(公告)日：2023-08-01

申请号：CN202310594917.8

申请日：2023-05-25

Applicant: 南京农业大学 ,  北京农业职业学院(中国共产党北京市委员会农村工作委员会党校)

Inventor： 李凯 ,  谢丽君 ,  高乐 ,  高少培 ,  肖燕敏 ,  崇政 ,  濮若思 ,  程信歌

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/113 ,  A01H5/10 ,  A01H5/00 ,  A01H6/54

Abstract: 本发明公开了一种CRISPR/CasRx介导的提高大豆对大豆花叶病毒抗性的方法。本发明以大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus，SMV)的HC‑Pro基因作为靶标基因，对国内外SMV流行株系进行多重核苷酸序列比对，在保守区间内确定了靶点序列，构建了CRISPR/CasRx基因组定点编辑载体，进一步应用农杆菌介导大豆子叶节的遗传转化体系，获得一批阳性基因编辑大豆材料，通过SMV抗病鉴定、qRT‑PCR、DAS‑ELISA血清学实验，分别从表型水平、RNA水平和蛋白水平研究阳性基因编辑后代大豆植株对SMV的抗病情况，以期筛选出一批抗SMV大豆材料。本发明在大豆SMV抗性机制的研究和抗病育种中具有重要的理论意义和实用价值。

公开(公告)号：CN103756975A

公开(公告)日：2014-04-30

申请号：CN201310653591.8

申请日：2013-12-05

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 智海剑 ,  高乐 ,  李凯 ,  任锐 ,  仲勇坤 ,  翟锐

IPC: C12N7/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/569 ,  C12R1/94

Abstract: 本发明公开了一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用。使用保藏号为CCTCC？NO：V201349的大豆花叶病毒分离物侵染本氏烟草获得感染烟草的大豆花叶病毒。按照本发明所述的方法获得感染烟草的大豆花叶病毒在验证抗大豆花叶病毒抗性候选基因中的应用。本发明从众多分离物中筛选获得了能够侵染烟草的大豆花叶病毒，通过将该分离物侵染烟草并通过调查发病症状、南农1138-2回接实验、ELISA以及RT-PCR检测手段进行了证实。该发明获得了感染烟草的大豆花叶病毒，使得在烟草上验证大豆抗SMV候选基因功能成为现实，打破了大豆遗传转化难的限制。

公开(公告)号：CN109355308B

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN201811480768.8

申请日：2018-12-05

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 智海剑 ,  高乐 ,  落金艳 ,  丁雪妮 ,  李凯 ,  王涛 ,  翟锐

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/54

Abstract: 本发明公开了一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。该方法是通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆；优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片段，将其导入大豆获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆。按照该方法能够获得具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆，为抗病大豆育种工作具有深远意义。

公开(公告)号：CN109355308A

公开(公告)日：2019-02-19

申请号：CN201811480768.8

申请日：2018-12-05

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 智海剑 ,  高乐 ,  落金艳 ,  丁雪妮 ,  李凯 ,  王涛 ,  翟锐

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/54

Abstract: 本发明公开了一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。该方法是通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆；优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片段，将其导入大豆获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆。按照该方法能够获得具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆，为抗病大豆育种工作具有深远意义。

公开(公告)号：CN103756975B

公开(公告)日：2015-09-23

申请号：CN201310653591.8

申请日：2013-12-05

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 智海剑 ,  高乐 ,  李凯 ,  任锐 ,  仲勇坤 ,  翟锐

IPC: C12N7/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/569 ,  C12R1/94

Abstract: 本发明公开了一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用。使用保藏号为CCTCC NO：V201349的大豆花叶病毒分离物侵染本氏烟草获得感染烟草的大豆花叶病毒。按照本发明所述的方法获得感染烟草的大豆花叶病毒在验证抗大豆花叶病毒抗性候选基因中的应用。本发明从众多分离物中筛选获得了能够侵染烟草的大豆花叶病毒，通过将该分离物侵染烟草并通过调查发病症状、南农1138-2回接实验、ELISA以及RT-PCR检测手段进行了证实。该发明获得了感染烟草的大豆花叶病毒，使得在烟草上验证大豆抗SMV候选基因功能成为现实，打破了大豆遗传转化难的限制。

公开(公告)号：CN108226510A

公开(公告)日：2018-06-29

申请号：CN201810035657.X

申请日：2018-01-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 李凯 ,  智海剑 ,  盖钧镒 ,  任锐 ,  高乐

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明公开了一种快速检测大豆花叶病毒(SMV)的胶体金免疫试纸条的制备方法及其检测方法。该试纸条由样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水滤纸和背衬组成。所述胶体金垫上包被有胶体金标记的SMV单克隆抗体，由小鼠杂交瘤细胞株BALB/c‑SMV‑CP‑9H7分泌产生；NC膜上设置有检测线和控制线，检测线上包被有SMV‑CP的多克隆抗体，控制线上包被有蛋白A。本发明的“SMV胶体金免疫试纸条”能快速、灵敏、准确、成本低、操作简便地检测中国的SMV，非常适合对田间大批量样品进行现场初筛，对农业生产上SMV病害监测和预警具有重要意义。