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公开(公告)号：CN104372019A
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410569007.5
申请日：2014-10-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，提供包括有CmWRKY48基因的重组载体、转化细胞、转CmWRKY48基因切花菊的培育、鉴定方法及应用。转CmWRKY48基因切花菊的培育方法包括如下步骤：(1)菊花CmWRKY48基因的克隆(2)植物表达载体pMDC43-CmWRKY48的构建(3)农杆菌EHA105介导叶盘法转化菊花。对转化植株进行PCR、定量RT-PCR检测证实CmWRKY48基因已整合到转基因植株基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行抗蚜性检测，转基因植株抗蚜能力有很大提高，为利用基因工程技术选育菊花抗逆品种提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN102154320B
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201110039094.X
申请日：2011-02-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 菊花抗逆转录因子DgZFP1及其植物表达载体和构建方法及应用，本发明属于分子生物学领域。本发明所构建的表达载体pCAMBIA1301-DgZFP1是由DgZFP1基因插入到克隆载体pMD19-Tsimplevector(Takara)，经BamH (Takara)和Kpn (Takara)双酶切后连接到载体pCAMBIA1301(Invitrogen)的BamH和Kpn位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，DgZFP1基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成DgZFP1蛋白，调控下游基因的表达，提高植物耐盐性。
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公开(公告)号：CN118546997A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410802989.1
申请日：2024-06-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/113 , C12N15/29 , A01H5/00 , A01H6/14
Abstract: 本发明公开了一种提高甘野菊CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法，属于基因工程技术领域。本发明公开的提高甘野菊CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法，选择携带有CRISPR/Cas9表达盒，但是目的基因未被完全编辑的甘野菊茎段为材料，进行37℃/30h、22℃/42h，3个循环的热激处理，提高茎段再生芽中靶基因编辑效率。结果表明，NRPD1基因编辑率为0的株系经过热激循环处理后，15株材料均有1％～55％不等比例的基因编辑效率提升。基因编辑率为0的株系经过热激循环处理后，提高了Cs DRM1的编辑效率，最高基因编辑率达到100％。
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公开(公告)号：CN116024255B
公开(公告)日：2024-03-19
申请号：CN202210812008.2
申请日：2022-07-11
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用不定芽体外再生提高菊属植物基因编辑效率的方法，包括以下步骤：将CRISPR/Cas9基因编辑菊属植物的幼叶的叶盘经过不定芽再生培养获得不定芽，再将不定芽切下接种到生根培养基上进行生根培养得到再生植株。本发明通过构建含有编辑CsDRM1基因的载体，利用叶盘转化法获得基因编辑植株，再利用不定芽体外再生的方式将基因编辑效率从≤50％提升至100％，此方法具有操作简单，效果显著等优点，为基因编辑发展提供新方法，具有较高的实用性和科研应用价值。
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公开(公告)号：CN113957166B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202010700190.3
申请日：2020-07-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6841 , G16B20/20 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种基于菊花近缘种属植物参考基因组的核糖体DNA(rDNA)寡核苷酸混合探针套，并公开了一种基于菊花近缘种属植物参考基因组的核糖体DNA(rDNA)寡核苷酸混合探针套的开发方法。具体为：利用已下载的拟南芥rDNA数据，对已有的菊花脑、甘野菊、黄蒿和向日葵进行本地Blast比对,获得5S rDNA和45S rDNA(5.8S、18S和28S)共有序列；再利用该数据在Oligo7软件开发5S rDNA和45S rDNA探针；合成的5S rDNA和45SrDNA寡核苷酸探针套分别包含2条和10条寡核苷酸探针。本发明开发的寡核苷酸探针开发方法和探针套，可有效的用于菊属植物染色体分析核型图谱的构建，通过组配好的寡核苷酸探针套通过FISH分析进行检测，避免克隆重组、标记探针的繁琐程序和异源片段，大大简化了FISH分析的程序，提高了实验效率。
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公开(公告)号：CN105671056B
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201610134871.1
申请日：2016-03-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转CmTCP20基因调控菊花花瓣生长的方法，包括以下步骤：从切花大菊‘神马’中克隆CmTCP20基因；构建CmTCP20基因植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行培养初步获得抗性植株。对转化植株进行PCR、定量RT‑PCR检测证实CmTCP20内源基因已经整合到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行表型观察与统计分析，发现与未转基因植株相比，转基因植株的花瓣生长量明显变大。本发明通过转化内源CmTCP20转录因子并正常转录表达，从而调控了切花菊花瓣的生长，为利用基因工程技术提高切花菊观赏品质提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN107815502A
公开(公告)日：2018-03-20
申请号：CN201711176758.0
申请日：2017-11-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/13 , C12Q2600/156 , C12Q2600/172
Abstract: 本发明涉及一种鉴定菊花耐涝性的dCAPS标记开发方法及应用，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、通过GWAS方法挖掘与菊花耐涝性显著关联的SNP位点；b、SNP突变位点特异性酶切位点分析及dCAPS引物设计；c、结合基因型与表型数据预期酶切扩增多态性；d、dCAPS标记在自然耐涝极端群体的验证；e、在F1后代耐涝极端群体中对WT-dCAPS1标记进行进一步验证。本发明开发了一个与菊花耐涝性状共分离的dCAPS共显性标记，命名为WT-dCAPS1，在两个群体的平均鉴定准确率为78.9％，初步认为可以应用于菊花耐涝性分子标记辅助育种，大大缩短育种周期，对于培育耐涝性菊花新品种具有重要的理论和实践意义。
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公开(公告)号：CN102754592B
公开(公告)日：2013-11-06
申请号：CN201210261962.3
申请日：2012-07-26
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物栽培与育种技术领域，公开了从多个切花菊品种中筛选磷利用效率相对最高的品种的方法，该方法包括以下几个步骤：a、获取生根插穗；b、确定筛选浓度：将多个切花菊品种分别定植于若干个砂培槽中，灌入不同磷浓度的营养液，计算各处理植株干重的变异系数，选取变异系数最大的处理浓度为筛选浓度；c、砂培筛选：设置正常磷和低磷（步骤b确定的筛选浓度）2个处理，通过各指标差异显著性及相关性分析，确定合适的筛选指标，采用系统聚类法，将切花菊耐低磷能力分级，最后确定磷利用效率相对最高的品种和磷利用效率相对最低的品种。本方法最终筛选出的切花菊品种，为切花菊的栽培、磷营养学研究和品种选育工作提供参考和依据。
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公开(公告)号：CN102754592A
公开(公告)日：2012-10-31
申请号：CN201210261962.3
申请日：2012-07-26
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物栽培与育种技术领域，公开了从多个切花菊品种中筛选磷利用效率相对最高的品种的方法，该方法包括以下几个步骤：a、获取生根插穗；b、确定筛选浓度：将多个切花菊品种分别定植于若干个砂培槽中，灌入不同磷浓度的营养液，计算各处理植株干重的变异系数，选取变异系数最大的处理浓度为筛选浓度；c、砂培筛选：设置正常磷和低磷（步骤b确定的筛选浓度）2个处理，通过各指标差异显著性及相关性分析，确定合适的筛选指标，采用系统聚类法，将切花菊耐低磷能力分级，最后确定磷利用效率相对最高的品种和磷利用效率相对最低的品种。本方法最终筛选出的切花菊品种，为切花菊的栽培、磷营养学研究和品种选育工作提供参考和依据。
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