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公开(公告)号：CN113969311A
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202111220895.6
申请日：2021-10-20
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12Q1/6869 , C12Q1/6827 , G16B20/50 , G16B30/10
Abstract: 本发明公开了一种检测基因编辑后的突变的方法。本发明开发了一套长片段分析流程，使用长片段PCR、Nanopore测序、python脚本分析测序数据，可以自动根据barcode信息，对测序数据进行分流，提取出相应的长片段数据，之后自动使用minimap2将分流后的文件比对，同时还可以对指定的文件分析其HDR插入率、大片段删除率，不仅弥补了二代测序对大片段分析的不足，而且在短片段的检测方面，检测结果优于基于二代测序的方法。
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公开(公告)号：CN113416730A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110767814.8
申请日：2021-07-07
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/864 , C12N15/90
Abstract: 本发明涉及一种降低细胞因基因编辑产生的大片段删除突变的方法。所述降低细胞因基因编辑产生的大片段删除突变的方法包括向细胞中导入基因编辑元件和辅助核苷酸，进行基因编辑，所述辅助核苷酸包括能够促进基因编辑位点进行同源重组修复或非同源性末端连接修复的核苷酸。本发明中，通过在基因编辑位点整合核苷酸序列，能够有效降低大片段删除突变，采用单链寡核苷酸(ssODN)、双链寡核苷酸或腺相关病毒与基因编辑元件共转化入细胞进行基因编辑，能够显著降低编辑位点附近大片段删除概率，并能保证高效的基因编辑效率，对提高基因编辑治疗的安全性具有重要意义。
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公开(公告)号：CN112899237A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110119486.0
申请日：2021-01-28
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
Abstract: 本发明提供了CDKN1A基因报告细胞系及其构建方法和应用，所述CDKN1A基因报告细胞系的基因组中整合有荧光蛋白表达元件；所述荧光蛋白表达元件位于CDKN1A基因的终止密码子上游。本发明利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术将荧光蛋白基因敲入到CDKN1A基因的终止密码子前使其融合表达，荧光强度直接指示CDKN1A表达水平，所述CDKN1A基因报告细胞系可用于CDKN1A表达调控研究、发现CDKN1A的表达调控因子、筛选靶向细胞周期的小分子药物、检测病毒载体毒性以及大规模筛选调控载体转导毒性的小分子化合物，还可用于大规模筛选高效率sgRNA、快速检测CRISPR‑Cas9切割效率等。
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公开(公告)号：CN117275576A
公开(公告)日：2023-12-22
申请号：CN202310557911.3
申请日：2023-05-17
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
Abstract: 本发明公开了一种全长质粒质控的方法。所述方法包括：利用靶向质粒骨架序列的Cas9/sgRNA复合物将环状质粒线性化，然后进行纳米孔测序得到原始数据，将得到的原始数据进行自动化分流，并分析得到测序完整性、数据预警、质粒中存在的插入、缺失或突变情况、污染情况判定，最终将所有相关结果自动输出到一个单独的报告文件中，得到全长质粒的质控信息。本发明的方法能够低成本、高效率地直接在单分子水平上对质粒序列进行全长测序，不依赖PCR，同时能够辨别出质粒的少量污染情况。
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公开(公告)号：CN112921054B
公开(公告)日：2023-01-24
申请号：CN202110379047.3
申请日：2021-04-08
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/867 , C12N15/12 , C12N15/113 , C12N7/01 , A61K38/42 , A61P7/06 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供了一种用于治疗β‑地中海贫血的慢病毒载体及其制备方法和应用，所述慢病毒载体包括HBB表达框；所述HBB表达框包括串联的DNase I高敏位点、启动子、HBB编码基因和增强子；所述DNase I高敏位点包括串联表达的HS4、HS3和HS2；所述HBB编码基因包括T87Q突变。本发明通过精简顺式调控元件的长度、使用突变型HBG启动子、优化启动子长度、对潜在的转录终止信号进行沉默突变等多种手段，开发出了新型慢病毒载体，所述慢病毒载体能够实现β‑珠蛋白过表达，其中HBB表达模块总长度约5kb，与BB305载体相比，载体滴度提高了2～4倍，红系分化后β‑珠蛋白表达水平提高了2倍左右。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110628816B
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN201910863564.0
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/12 , A61K31/7105 , A61K48/00 , A61K31/675 , A61K31/573 , A61P7/04
Abstract: 本发明提供一种用于血友病A的双切供体，将BDDF8定位于肝细胞中高度表达的Alb位点，同源臂两侧还设有可被Cas9‑sgAlb识别的sgAlb‑PAM序列，高压尾静脉注射新型双切HDR供体质粒编码Cas9、sgAlb和pDonor的质粒后，1‑2％的肝细胞在Alb位点精确整合了BDDF8。此外，联合使用免疫抑制剂使BDDF8在80％以上的小鼠中终生稳定表达。可以认为血友病A在大多数小鼠中得到了彻底治愈。
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公开(公告)号：CN113336841B
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN202110613444.2
申请日：2021-06-02
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C07K14/755 , C12N15/12 , C12N15/864 , A61K48/00 , A61K38/37 , A61P7/04 , G01N33/68
Abstract: 本发明提供了F8蛋白变体及利用其制备的基因治疗载体。所述F8蛋白变体为BDDF8‑N6变体删除至少4个氨基酸后得到的氨基酸序列中的任意一种；其中，删除的氨基酸中包含弗林蛋白识别位点RHQR。本发明提供的F8蛋白变体，以BDDF8‑N6变体为基础，对B结构域进行优化，删除了F8蛋白弗林蛋白识别位点及其附近的氨基酸，得到了新的高效变体，所得变体载体滴度增加，体内测试中F8的活性较高，具有较高的临床转化价值。
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公开(公告)号：CN113528437A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110766907.9
申请日：2021-07-07
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N5/0783 , C12N15/09
Abstract: 本发明提供了一种增强基因编辑效率的试剂盒及其应用，所述增强基因编辑效率的试剂盒包括基因编辑系统和增强剂；所述增强剂包括血清替代物。本发明还提供了一种增强基因编辑效率的方法，所述方法包括：将所述的基因编辑系统导入受体细胞中，再向培养基中加入血清替代物，孵育，继续培养。本发明所述增强基因编辑效率的试剂盒可以提高基因编辑的效率，使用简单，操作方便；所述增强基因编辑效率的方法技术成熟，成功率高，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113336841A
公开(公告)日：2021-09-03
申请号：CN202110613444.2
申请日：2021-06-02
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C07K14/755 , C12N15/12 , C12N15/864 , A61K48/00 , A61K38/37 , A61P7/04 , G01N33/68
Abstract: 本发明提供了F8蛋白变体及利用其制备的基因治疗载体。所述F8蛋白变体为BDDF8‑N6变体删除至少4个氨基酸后得到的氨基酸序列中的任意一种；其中，删除的氨基酸中包含弗林蛋白识别位点RHQR。本发明提供的F8蛋白变体，以BDDF8‑N6变体为基础，对B结构域进行优化，删除了F8蛋白弗林蛋白识别位点及其附近的氨基酸，得到了新的高效变体，所得变体载体滴度增加，体内测试中F8的活性较高，具有较高的临床转化价值。
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公开(公告)号：CN112921054A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110379047.3
申请日：2021-04-08
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/867 , C12N15/12 , C12N15/113 , C12N7/01 , A61K38/42 , A61P7/06 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供了一种用于治疗β‑地中海贫血的慢病毒载体及其制备方法和应用，所述慢病毒载体包括HBB表达框；所述HBB表达框包括串联的DNase I高敏位点、启动子、HBB编码基因和增强子；所述DNase I高敏位点包括串联表达的HS4、HS3和HS2；所述HBB编码基因包括T87Q突变。本发明通过精简顺式调控元件的长度、使用突变型HBG启动子、优化启动子长度、对潜在的转录终止信号进行沉默突变等多种手段，开发出了新型慢病毒载体，所述慢病毒载体能够实现β‑珠蛋白过表达，其中HBB表达模块总长度约5kb，与BB305载体相比，载体滴度提高了2～4倍，红系分化后β‑珠蛋白表达水平提高了2倍左右。
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