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公开(公告)号：CN110628816B
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN201910863564.0
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/12 , A61K31/7105 , A61K48/00 , A61K31/675 , A61K31/573 , A61P7/04
Abstract: 本发明提供一种用于血友病A的双切供体，将BDDF8定位于肝细胞中高度表达的Alb位点，同源臂两侧还设有可被Cas9‑sgAlb识别的sgAlb‑PAM序列，高压尾静脉注射新型双切HDR供体质粒编码Cas9、sgAlb和pDonor的质粒后，1‑2％的肝细胞在Alb位点精确整合了BDDF8。此外，联合使用免疫抑制剂使BDDF8在80％以上的小鼠中终生稳定表达。可以认为血友病A在大多数小鼠中得到了彻底治愈。
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公开(公告)号：CN113336841B
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN202110613444.2
申请日：2021-06-02
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C07K14/755 , C12N15/12 , C12N15/864 , A61K48/00 , A61K38/37 , A61P7/04 , G01N33/68
Abstract: 本发明提供了F8蛋白变体及利用其制备的基因治疗载体。所述F8蛋白变体为BDDF8‑N6变体删除至少4个氨基酸后得到的氨基酸序列中的任意一种；其中，删除的氨基酸中包含弗林蛋白识别位点RHQR。本发明提供的F8蛋白变体，以BDDF8‑N6变体为基础，对B结构域进行优化，删除了F8蛋白弗林蛋白识别位点及其附近的氨基酸，得到了新的高效变体，所得变体载体滴度增加，体内测试中F8的活性较高，具有较高的临床转化价值。
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公开(公告)号：CN113336841A
公开(公告)日：2021-09-03
申请号：CN202110613444.2
申请日：2021-06-02
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C07K14/755 , C12N15/12 , C12N15/864 , A61K48/00 , A61K38/37 , A61P7/04 , G01N33/68
Abstract: 本发明提供了F8蛋白变体及利用其制备的基因治疗载体。所述F8蛋白变体为BDDF8‑N6变体删除至少4个氨基酸后得到的氨基酸序列中的任意一种；其中，删除的氨基酸中包含弗林蛋白识别位点RHQR。本发明提供的F8蛋白变体，以BDDF8‑N6变体为基础，对B结构域进行优化，删除了F8蛋白弗林蛋白识别位点及其附近的氨基酸，得到了新的高效变体，所得变体载体滴度增加，体内测试中F8的活性较高，具有较高的临床转化价值。
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公开(公告)号：CN112921054A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110379047.3
申请日：2021-04-08
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/867 , C12N15/12 , C12N15/113 , C12N7/01 , A61K38/42 , A61P7/06 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供了一种用于治疗β‑地中海贫血的慢病毒载体及其制备方法和应用，所述慢病毒载体包括HBB表达框；所述HBB表达框包括串联的DNase I高敏位点、启动子、HBB编码基因和增强子；所述DNase I高敏位点包括串联表达的HS4、HS3和HS2；所述HBB编码基因包括T87Q突变。本发明通过精简顺式调控元件的长度、使用突变型HBG启动子、优化启动子长度、对潜在的转录终止信号进行沉默突变等多种手段，开发出了新型慢病毒载体，所述慢病毒载体能够实现β‑珠蛋白过表达，其中HBB表达模块总长度约5kb，与BB305载体相比，载体滴度提高了2～4倍，红系分化后β‑珠蛋白表达水平提高了2倍左右。
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公开(公告)号：CN112359065A
公开(公告)日：2021-02-12
申请号：CN202010994864.5
申请日：2020-09-21
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/87 , C12N15/864 , C12N15/85 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供了一种提高基因敲入效率的小分子组合物；所述小分子组合物包括非同源末端连接修复途径的抑制剂(NHEJ抑制剂)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDAC抑制剂)。最佳的小分子组合物为：M3814+Trichostatin A。本发明还提供了在人原代细胞中实现高效基因敲入的方法，所述方法包括：将基因组编辑组合物引入人原代细胞中，加入所述小分子组合物，使染色质结构松散并且抑制非同源末端连接，提高基因敲入效率。该方法的效率比采用CRISPR/Cas9等RNA引导的核酸内切酶的传统基因组编辑方法的效率显著更高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110628816A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910863564.0
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/12 , A61K31/7105 , A61K48/00 , A61K31/675 , A61K31/573 , A61P7/04
Abstract: 本发明提供一种用于血友病A的双切供体，将BDDF8定位于肝细胞中高度表达的Alb位点，同源臂两侧还设有可被Cas9-sgAlb识别的sgAlb-PAM序列，高压尾静脉注射新型双切HDR供体质粒编码Cas9、sgAlb和pDonor的质粒后，1-2％的肝细胞在Alb位点精确整合了BDDF8。此外，联合使用免疫抑制剂使BDDF8在80％以上的小鼠中终生稳定表达。可以认为血友病A在大多数小鼠中得到了彻底治愈。
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公开(公告)号：CN118166081A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410005038.1
申请日：2024-01-03
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12Q1/6869 , C12N15/90 , C12N15/85 , C12N15/55
Abstract: 本公开涉及一种基因编辑系统脱靶的检测方法(OliTag‑seq)，所述检测方法包括：使双链寡聚脱氧核苷酸dsODN整合到细胞基因组DNA的双链断裂位置，扩增包含整合的dsODN的基因组DNA的部分，对所述扩增的基因组DNA的部分进行测序，从而检测所述细胞的基因组DNA中的双链断裂；其中，所述双链寡聚脱氧核苷酸dsODN的长度为35bp～200bp，在所述dsODN的3’末端和5’末端各包含1～3个GC DNA对。本公开方法能够有效识别基因编辑系统诱导产生的脱靶位点，与现有方法相比，对脱靶位点识别表现出更高的灵敏性，在疾病诊断与风险评估、临床研究与药物开发、转基因生物技术等领域有着广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN113025659B
公开(公告)日：2023-01-10
申请号：CN202110262182.X
申请日：2021-03-10
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12N15/864 , C12N5/10 , A61K48/00 , A61P7/04
Abstract: 本发明提供了一种治疗A型血友病的基因编辑系统及其应用，所述基因编辑系统包括CRISPR‑SaCas9基因编辑载体和F8供体载体；所述CRISPR‑SaCas9基因编辑载体包括串联的SaCas9编码基因和sgRNA，所述sgRNA的靶基因为Alb基因内含子；所述F8供体载体包括截短型F8基因。本发明利用腺相关病毒将SaCas9、sgRNA和BDDF8导入肝细胞，BDDF8通过NHEJ途径定点插入到Alb内含子位点，剪接形成Alb和BDDF8的融合转录本，自断裂多肽促使形成Alb和BDDF8蛋白两种蛋白，F8在小鼠中稳定表达一年，所述基因编辑系统无毒副作用，是潜在的A型血友病治疗药物。
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公开(公告)号：CN113969311A
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202111220895.6
申请日：2021-10-20
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
IPC: C12Q1/6869 , C12Q1/6827 , G16B20/50 , G16B30/10
Abstract: 本发明公开了一种检测基因编辑后的突变的方法。本发明开发了一套长片段分析流程，使用长片段PCR、Nanopore测序、python脚本分析测序数据，可以自动根据barcode信息，对测序数据进行分流，提取出相应的长片段数据，之后自动使用minimap2将分流后的文件比对，同时还可以对指定的文件分析其HDR插入率、大片段删除率，不仅弥补了二代测序对大片段分析的不足，而且在短片段的检测方面，检测结果优于基于二代测序的方法。
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公开(公告)号：CN112899237A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110119486.0
申请日：2021-01-28
Applicant: 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)
Abstract: 本发明提供了CDKN1A基因报告细胞系及其构建方法和应用，所述CDKN1A基因报告细胞系的基因组中整合有荧光蛋白表达元件；所述荧光蛋白表达元件位于CDKN1A基因的终止密码子上游。本发明利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术将荧光蛋白基因敲入到CDKN1A基因的终止密码子前使其融合表达，荧光强度直接指示CDKN1A表达水平，所述CDKN1A基因报告细胞系可用于CDKN1A表达调控研究、发现CDKN1A的表达调控因子、筛选靶向细胞周期的小分子药物、检测病毒载体毒性以及大规模筛选调控载体转导毒性的小分子化合物，还可用于大规模筛选高效率sgRNA、快速检测CRISPR‑Cas9切割效率等。
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