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公开(公告)号：CN106148265B
公开(公告)日：2019-08-20
申请号：CN201610561891.7
申请日：2016-07-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产硫酸软骨素裂解酶的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将普通变形杆菌来源的硫酸软骨素裂解酶在枯草芽孢杆菌中进行异源表达，选取信号肽amyX，采用3种强组成型启动子和pP43NMK载体本身的强RBS，并加入组氨酸标签以利于后续纯化，实现了硫酸软骨素裂解酶在枯草芽孢杆菌中表达酶活的提高。本发明为食品级微生物高效生产制备硫酸软骨素裂解酶奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN109097386A
公开(公告)日：2018-12-28
申请号：CN201811044297.6
申请日：2018-09-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于sRNA介导的枯草芽孢杆菌转录后调控系统，属于生物工程技术领域。本发明在基因组上对基因的表达进行精确的调控，例如改变细胞形态达到所希望的生物形态，例如对代谢途径进行精确的动态调控提高生物合成目标产物产量，达到良好效果。与其他调控方法相比，具有较低的诱导浓度和很高的稳定性，具有精确的动态调控的优势，操作简便，应用广泛。
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公开(公告)号：CN108949603A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201811172714.5
申请日：2018-10-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种分泌表达海蠕虫透明质酸水解酶的重组酿酒酵母菌株，属于基因工程技术领域。本发明采用重组DNA技术将来源于Capitella teleta的透明质酸水解酶基因克隆连接到酿酒酵母整合表达载体pRS305，通过将启动子置换，添加信号肽，在基因N端添加氨基酸短肽等手段，获得质粒pGAP(m)‑sp23‑6×Gln‑HAase，并转化酿酒酵母宿主S.cerevisiae CEN.PK2‑1C，从而构建高产透明质酸水解酶的重组菌株命名为S.cerevisiae CEN.PK2‑1C‑pGAP(m)‑sp23‑6×Gln‑HAase。在3L罐中，重组S.cerevisiae菌株胞外表达的透明质酸水解酶的活力可达1.26×106U/mL，相比重组菌株S.cerevisiae pRS305‑HAase的胞内酶活2.05×105U/mL，提高了5.1倍。本发明利用酿酒酵母为宿主发酵得到的透明质酸水解酶对透明质酸具有高选择性和高活力，具有重要的应用前景。
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公开(公告)号：CN108866057A
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201810738211.3
申请日：2018-07-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌压力响应型启动子及其制备方法，属于启动子工程领域。本发明以pColaDuet‑GFP质粒为模板，通过设计兼并引物对不同σ因子识别的启动子的保守序列进行串联，对其间隔序列进行随机突变，以绿色荧光蛋白GFP为报告基因，筛选到多个在低温，高渗透压，低PH条件下都有较高表达强度的启动子。
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公开(公告)号：CN108841771A
公开(公告)日：2018-11-20
申请号：CN201810756333.5
申请日：2018-07-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产软骨素的重组谷氨酸棒杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先在谷氨酸棒杆菌异源表达UDP-N-乙酰葡萄糖胺C4异构酶编码基因kfoA和软骨素合成酶编码基因kfoC，以及过表达glmU、galU和ugd以及glmS和glmM，初步构建了软骨素的合成途径；随后通过对软骨素合成酶(KfoC)进行随机突变，发现KfoC(H357G N363S)突变体可以将软骨素产量提高200％。利用蛋白质融合技术将kfoA,kfoC(突变体)和ugd基因(编码UDP-葡萄糖脱氢酶)融合，使表达的UDP-N-乙酰葡萄糖胺C4异构酶，软骨素合成酶和UDP-葡萄糖脱氢酶形成人工复合体，将软骨素的产量进一步提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108841739A
公开(公告)日：2018-11-20
申请号：CN201810710021.0
申请日：2018-07-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建高效分泌表达细菌肝素水解酶重组菌的方法，属于酶工程技术领域。本发明采用毕赤酵母表达系统，构建一种表达肝素水解酶的方法。并在毕赤酵母表达系统中实现了肝素水解酶的分泌表达。是一种发酵产肝素水解酶的方法，对肝素水解酶的工业化生产起到了重要的推动作用。
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公开(公告)号：CN107287201A
公开(公告)日：2017-10-24
申请号：CN201710686341.2
申请日：2017-08-11
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N15/81
Abstract: 本发明公开了一种强广谱启动子及其应用，属于基因工程领域。本发明通过分子手段将原核细菌保守启动子序列插入一个具有高活力的酿酒酵母启动子的非核心区域，得到的一种强广谱启动子有多个宿主，该启动子在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母中均具有很强的启动子活力，满足目前对广谱的分子改造工具和基因表达框的需求。
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公开(公告)号：CN107189992A
公开(公告)日：2017-09-22
申请号：CN201710512605.2
申请日：2017-06-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种肝素前体合酶及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将大肠杆菌K5来源的肝素前体合酶KfiC、KfiA在枯草芽孢杆菌中进行三种方式的改造，即两个合酶直接融合；两个合酶通过柔性linker连接；将KfiC、KfiA中关键区域置换多杀巴斯德杆菌来源的PmHS合酶的关键区域，从而得到了三种新型肝素前体合酶，并获得了肝素前体产量提高、分子量减小的结果。本发明为食品级微生物高效生产制备肝素前体奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN106497858A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201611094235.7
申请日：2016-12-02
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/1029 , C12N9/1205 , C12N9/1235 , C12N9/88 , C12P13/001 , C12Y203/01037 , C12Y207/01033 , C12Y401/01036
Abstract: 本发明公开了一种生产5-氨基乙酰丙酸的大肠杆菌工程菌，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pRSFDuet-1-hemA过量表达5-氨基乙酰丙酸C4合成途径关键酶5-氨基乙酰丙酸合酶hemA的基础上，将来源于大肠杆菌CoA合成途径中编码泛酸激酶的基因coaA、编码磷酸泛酰半胱氨酸合成酶和脱羧酶的基因dfp、编码磷酸CoA焦磷酸化酶的基因coaD，使用pUC19和pETDuet-1载体共表达三个基因，构建重组菌株。通过摇瓶培养验证，共表达CoA途径基因的重组菌ALA产量均明显提高，其中产量最高为700mg/L，相对于对照提高约46％。
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公开(公告)号：CN104004701B
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201410274445.9
申请日：2014-06-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建高产5-氨基乙酰丙酸大肠杆菌工程菌株的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pACYCDuet-1过量表达5-氨基乙酰丙酸C5合成途径关键酶谷氨酰-tRNA还原酶和谷氨醛氨基转移酶的基础上，将来源于大肠杆菌血红素生物合成途径中的尿卟啉原III合酶(uroporphyrinogen III synthase,UROS,hemD编码)及粪卟啉原III氧化酶(coproporphyrinogen III oxidase,CPO,hemF编码)，使用pCDFDuet-1单独表达或共表达两个酶基因，构建重组菌株。通过发酵验证，单独表达hemD或hemF以及共表达hemD和hemF，ALA产量均明显提高。
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