一种酶法合成UDP-葡萄糖醛酸和UDP-N-乙酰氨基葡萄糖的方法

    公开(公告)号:CN116790649A

    公开(公告)日:2023-09-22

    申请号:CN202310852392.3

    申请日:2023-07-12

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明涉及UDP‑葡萄糖醛酸和UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖的体外酶法制备,属于生物工程及生物合成技术领域。本发明将不同来源的葡萄糖醛酸激酶GlcAK、UDP‑葡萄糖醛酸焦磷酸化酶USP、N‑乙酰己胺1‑激酶NahK、N‑乙酰葡糖胺激酶AmgK、UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶GlmU、聚磷酸激酶PPK的基因在大肠杆菌BL21(DE3)异源表达,得到的重组酶组合成功催化合成UDP‑葡萄糖醛酸和UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖。偶联ATP循环体系后,将反应体系扩大并提高底物浓度,50mL体系中UDP‑葡萄糖醛酸产量可达12.9g·L‑1,UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖产量可达18.2g·L‑1。本发明实现了UDP‑葡萄糖醛酸和UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖的高效催化合成,具有步骤简短,收率高,反应温和等优点,具有重要的应用前景。

    一种透明质酸合酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN119776311A

    公开(公告)日:2025-04-08

    申请号:CN202411833865.6

    申请日:2024-12-13

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明提供了一种透明质酸合酶突变体及其应用,涉及生物技术领域。本发明通过对氨基酸序列如SEQ ID NO.1的透明质酸合酶进行N端、C端氨基酸的缺失以及对280和540位点进行点突变等改造,得到了透明质酸合酶突变体。将本发明的透明质酸合酶突变体导入宿主菌中并进行发酵培养,相较于未改造之间的透明质酸合酶,其透明质酸产量大幅度提高。除此以外,在强化UDP‑葡萄糖脱氢酶表达的前提下,将本发明的透明质酸合酶和透明质酸降解酶通过GS linker连接并进行异源表达,其在5L发酵罐的产量为15g/L左右,且生成的透明质酸为透明质酸四糖。

    一种耐粘稠的谷氨酸棒杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN118562696A

    公开(公告)日:2024-08-30

    申请号:CN202410730365.3

    申请日:2024-06-06

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明涉及一种耐粘稠的谷氨酸棒杆菌及其应用,属于生物基因工程技术领域。本发明的谷氨酸棒杆菌由由谷氨酸棒杆菌ATCC 13032突变得到,突变位点包括:将862902位点上的胞嘧啶突变为胸腺嘧啶;将862903位点上的鸟嘌呤突变为腺嘌呤;将862953位点上的胞嘧啶突变为胸腺嘧啶;将862961位点上的腺嘌呤突变为鸟嘌呤;在862958位点上插入胞嘧啶和胸腺嘧啶;将862963位点上的鸟嘌呤缺失突变。本发明的谷氨酸棒杆菌在高粘稠环境中的耐受性和在低溶解氧环境下的生长代谢能力显著提高,从而提高了粘多糖的产量,避免因产生的粘多糖使得发酵液粘稠,溶氧不足进而限制谷氨酸棒杆菌代谢,最终影响粘多糖合成的问题。

    一种产软骨素的重组谷氨酸棒杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN108841771B

    公开(公告)日:2020-12-01

    申请号:CN201810756333.5

    申请日:2018-07-11

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种产软骨素的重组谷氨酸棒杆菌及其应用,属于生物工程技术领域。本发明首先在谷氨酸棒杆菌异源表达UDP‑N‑乙酰葡萄糖胺C4异构酶编码基因kfoA和软骨素合成酶编码基因kfoC,以及过表达glmU、galU和ugd以及glmS和glmM,初步构建了软骨素的合成途径;随后通过对软骨素合成酶(KfoC)进行随机突变,发现KfoC(H357G N363S)突变体可以将软骨素产量提高200%。利用蛋白质融合技术将kfoA,kfoC(突变体)和ugd基因(编码UDP‑葡萄糖脱氢酶)融合,使表达的UDP‑N‑乙酰葡萄糖胺C4异构酶,软骨素合成酶和UDP‑葡萄糖脱氢酶形成人工复合体,将软骨素的产量进一步提高。

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