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公开(公告)号：CN112708569A
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN201911019170.3
申请日：2019-10-24
Applicant: 华熙生物科技股份有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了发酵生产硫酸软骨素的酵母工程菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用合成生物学技术和基因工程手段，以毕赤酵母GS115和酿酒酵母S.cerevisiae CEN.PK2‑1C为出发菌株，在细胞内异源表达了硫酸软骨素合成途径相关基因：来自大肠杆菌K4的基因kfoC，kfoA，来自小鼠的软骨素硫酸转移酶基因C4ST，C6ST，来自枯草芽孢杆菌的UDP‑葡萄糖脱氢酶基因tuaD，来自酿酒酵母的ATP硫酸化酶基因MET13，得到合成硫酸软骨素A(CSA)、硫酸软骨素C(CSC)和硫酸软骨素E(CSE)的生产菌株。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成不同构型的硫酸软骨素。
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公开(公告)号：CN113637599A
公开(公告)日：2021-11-12
申请号：CN202111039895.6
申请日：2021-09-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产硫酸软骨素裂解酶ABCI的食品级安全酵母菌及其应用，属于生物工程技术领域。本方法经过食品级安全菌株毕赤酵母异源整合表达了硫酸软骨素裂解酶ABCI，可实现胞内和胞外两种生产模式，且培养过程无需添加任何抗生素。通过对于启动子的筛选，得到了能够有效提高硫酸软骨素裂解酶ABCI酶活表达量的启动子，使得重组毕赤酵母在发酵罐条件下，分泌表达酶活可达到2840U/L，为食品级微生物高效生产制备硫酸软骨素裂解酶奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN111304186A
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN202010127050.1
申请日：2020-02-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种肝素C5异构酶高催化活性菌株的构建方法，属于生物工程技术领域。本方法首先选用大肠杆菌作为宿主菌，然后利用N端融合促溶标签的方法对C5异构酶进行表达优化，将优化后的C5蛋白序列进一步通过分子对接进行蛋白质工程改造，得到高活性的生产菌株。本发明首次采用微生物细胞表达106位氨基酸由缬氨酸突变为精氨酸后的C5，得到的酶催化活性为5.81U/mL，相比未突变前提高了141％，比酶活为145.14U/mg，相比未突变前提高了128％。
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公开(公告)号：CN111621533B
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN202010596134.X
申请日：2020-06-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种人工酶法高效生产硫酸软骨素A的方法，属于生物工程技术领域。本方法经过微生物异源表达了一个双功能蛋白软骨素4‑O‑磺基转移酶C4ST和芳基磺基转移酶AST IV，用于催化软骨素合成硫酸软骨素A，结合酶的定点突变和反应体系组分的优化，加速硫酸软骨素的合成效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109097386B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201811044297.6
申请日：2018-09-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于sRNA介导的枯草芽孢杆菌转录后调控系统，属于生物工程技术领域。本发明在基因组上对基因的表达进行精确的调控，例如改变细胞形态达到所希望的生物形态，例如对代谢途径进行精确的动态调控提高生物合成目标产物产量，达到良好效果。与其他调控方法相比，具有较低的诱导浓度和很高的稳定性，具有精确的动态调控的优势，操作简便，应用广泛。
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公开(公告)号：CN112708571A
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN202110069401.2
申请日：2021-01-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了发酵生产可控分子量硫酸软骨素的重组酵母及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用合成生物学技术和基因工程手段，以毕赤酵母GS115为出发菌株，在细胞内异源表达了硫酸软骨素合成途径相关蛋白：来自大肠杆菌K4的KfoC，KfoA，来自小鼠的软骨素硫酸转移酶C4ST或C6ST，来自枯草芽孢杆菌的UDP‑葡萄糖脱氢酶TuaD，来自普通变形杆菌的硫酸软骨素裂解酶ABCI，得到合成硫酸软骨素A(CSA)和硫酸软骨素C(CSC)的生产菌株，通过控制诱导剂甲醇的浓度和诱导的时间可以得到特定分子量的硫酸软骨素A和C。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成分子量可控的特定构型的硫酸软骨素。
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公开(公告)号：CN112708569B
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN201911019170.3
申请日：2019-10-24
Applicant: 华熙生物科技股份有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了发酵生产硫酸软骨素的酵母工程菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用合成生物学技术和基因工程手段，以毕赤酵母GS115和酿酒酵母S.cerevisiae CEN.PK2‑1C为出发菌株，在细胞内异源表达了硫酸软骨素合成途径相关基因：来自大肠杆菌K4的基因kfoC，kfoA，来自小鼠的软骨素硫酸转移酶基因C4ST，C6ST，来自枯草芽孢杆菌的UDP‑葡萄糖脱氢酶基因tuaD，来自酿酒酵母的ATP硫酸化酶基因MET13，得到合成硫酸软骨素A(CSA)、硫酸软骨素C(CSC)和硫酸软骨素E(CSE)的生产菌株。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成不同构型的硫酸软骨素。
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公开(公告)号：CN111304186B
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202010127050.1
申请日：2020-02-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种肝素C5异构酶高催化活性菌株的构建方法，属于生物工程技术领域。本方法首先选用大肠杆菌作为宿主菌，然后利用N端融合促溶标签的方法对C5异构酶进行表达优化，将优化后的C5蛋白序列进一步通过分子对接进行蛋白质工程改造，得到高活性的生产菌株。本发明首次采用微生物细胞表达106位氨基酸由缬氨酸突变为精氨酸后的C5，得到的酶催化活性为5.81U/mL，相比未突变前提高了141％，比酶活为145.14U/mg，相比未突变前提高了128％。
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公开(公告)号：CN111621533A
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN202010596134.X
申请日：2020-06-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种人工酶法高效生产硫酸软骨素A的方法，属于生物工程技术领域。本方法经过微生物异源表达了一个双功能蛋白软骨素4-O-磺基转移酶C4ST和芳基磺基转移酶AST IV，用于催化软骨素合成硫酸软骨素A，结合酶的定点突变和反应体系组分的优化，加速硫酸软骨素的合成效率。
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