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公开(公告)号：CN104560856B
公开(公告)日：2017-09-15
申请号：CN201510017545.8
申请日：2015-01-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种好氧合成维生素B12的大肠杆菌及其构建与应用，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明大肠杆菌为宿主细胞，使用兼容的表达载体，将来源于类球红细菌和恶臭假单胞菌维生素B12合成途径中大肠杆菌基因组缺失的基因进行模块化组装并表达，构建重组大肠杆菌工程菌株，通过发酵验证，实现了大肠杆菌合成维生素B12。
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公开(公告)号：CN104805508A
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201510213073.3
申请日：2015-04-29
Applicant: 江南大学
IPC: C40B50/06
Abstract: 本发明一种基于合成单链DNA文库进化代谢途径的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用合成的DNA单链文库，以PCR技术介导重组突变文库的构建。突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对代谢途径进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。
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公开(公告)号：CN104004701A
公开(公告)日：2014-08-27
申请号：CN201410274445.9
申请日：2014-06-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建高产5-氨基乙酰丙酸大肠杆菌工程菌株的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pACYCDuet-1过量表达5-氨基乙酰丙酸C5合成途径关键酶谷氨酰-tRNA还原酶和谷氨醛氨基转移酶的基础上，将来源于大肠杆菌血红素生物合成途径中的尿卟啉原III合酶(uroporphyrinogen III synthase,UROS,hemD编码)及粪卟啉原III氧化酶(coproporphyrinogen III oxidase,CPO,hemF编码)，使用pCDFDuet-1单独表达或共表达两个酶基因，构建重组菌株。通过发酵验证，单独表达hemD或hemF以及共表达hemD和hemF，ALA产量均明显提高。
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公开(公告)号：CN104830748B
公开(公告)日：2018-04-06
申请号：CN201510295531.2
申请日：2015-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种弱化hemB基因表达提高大肠杆菌合成5‑氨基乙酰丙酸的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pRSFDuet‑1过量表达谷氨酰‑tRNA还原酶，谷氨醛氨基转移酶和粪卟啉原III氧化酶以及使用载体pETDuet‑1过量表达尿卟啉原III合酶的基础上，通过在基因组水平改造hemB基因的启动子进而调控其表达，考察其对ALA积累的影响。通过摇瓶发酵验证，目的产物ALA产量有明显提高，30h时ALA产量为2680mg/L。
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公开(公告)号：CN104560856A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510017545.8
申请日：2015-01-13
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C07K14/21 , C07K14/195 , C12P19/42
Abstract: 本发明公开了一种好氧合成维生素B12的大肠杆菌及其构建与应用，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明大肠杆菌为宿主细胞，使用兼容的表达载体，将来源于类球红细菌和恶臭假单胞菌维生素B12合成途径中大肠杆菌基因组缺失的基因进行模块化组装并表达，构建重组大肠杆菌工程菌株，通过发酵验证，实现了大肠杆菌合成维生素B12。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104017767A
公开(公告)日：2014-09-03
申请号：CN201410274656.2
申请日：2014-06-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用组合调控策略提高5-氨基乙酰丙酸产量的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明以EscherichiacoliBL21(DE3)作为出发菌株，使用表达载体pETDuet-1及pRSFDuet-1对ALA合成途径中起正调控作用的关键酶基因hemL，hemA，hemD，及hemF进行组合优化，构建重组菌株。通过发酵验证，采用高拷贝的质粒pRSFDuet-1表达hemA，hemL和hemF，中拷贝质粒pETDuet-1表达hemD，ALA产量产量最高，约3250mg/L。
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公开(公告)号：CN100501381C
公开(公告)日：2009-06-17
申请号：CN200610161427.5
申请日：2006-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种测定氯代酚的化学发光分析方法。基于氯代酚在荧光剂存在下光解后可与氧化剂反应产生化学发光的现象，建立了高灵敏和选择性测定氯代酚的新方法。曲拉通X-100作为增敏剂可以有效的增强该体系的发光强度。该方法对4-氯苯酚、2-氯苯酚、2，4-二氯苯酚、2，4，6-三氯苯酚及五氯酚等多种氯代酚均有良好的发光响应，检出限可达5.0×10-8mol/L；对3.6×10-5mol/L的2，4-二氯苯酚连续7次测定的相对标准偏差为2.2%，对3.6×10-5mol/L的2，4，6-三氯苯酚连续7次测定的相对标准偏差为1.9%。选择实验了多种可能的干扰物质，结果表明在不同的pH值下，各种氯代酚之间干扰较小，该方法具有优异的选择性。
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公开(公告)号：CN1987433A
公开(公告)日：2007-06-27
申请号：CN200610161427.5
申请日：2006-12-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种测定氯代酚的化学发光分析方法。基于氯代酚在荧光剂存在下光解后可与氧化剂反应产生化学发光的现象，建立了高灵敏和选择性测定氯代酚的新方法。曲拉通X－100作为增敏剂可以有效的增强该体系的发光强度。该方法对4－氯苯酚、2－氯苯酚、2，4－二氯苯酚、2，4，6－三氯苯酚及五氯酚等多种氯代酚均有良好的发光响应，检出限可达5.0×10－8mol/L；对3.6×10－5mol/L的2，4－二氯苯酚连续7次测定的相对标准偏差为2.2％，对3.6×10－5mol/L的2，4，6－三氯苯酚连续7次测定的相对标准偏差为1.9％。选择实验了多种可能的干扰物质，结果表明在不同的pH值下，各种氯代酚之间干扰较小，该方法具有优异的选择性。
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公开(公告)号：CN104805508B
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201510213073.3
申请日：2015-04-29
Applicant: 江南大学
IPC: C40B50/06
Abstract: 本发明一种基于合成单链DNA文库进化代谢途径的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用合成的DNA单链文库，以PCR技术介导重组突变文库的构建。突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对代谢途径进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。
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公开(公告)号：CN104561158B
公开(公告)日：2018-01-16
申请号：CN201510017646.5
申请日：2015-01-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种添加Fe2+提高大肠杆菌工程菌合成5‑氨基乙酰丙酸的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明以已构建的合成5‑氨基乙酰丙酸的大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)LADF‑6为出发菌株，考察培养基中添加Fe2+对ALA合成的影响，通过发酵验证，目的产物ALA产量有明显提高，30h时ALA产量为2.25g/L。在此基础上，经过优化Fe2+的初始添加量并在3L发酵罐中放大培养，当添加10mg/L的Fe2+时，ALA产量为3.85g/L。
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