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公开(公告)号：CN106636038B
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201610926647.6
申请日：2016-10-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种耐热性改善的木聚糖酶及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明对具有最高B‑factor值位点处的Gly21进行替换，构建了突变转化子文库。以酶的热稳定性为指标，从文库中筛选出最优突变转化子(E.coli/Aoxyn11AG21I)，E.coli/Aoxyn11AG21I表达一种由Ile21替换了Gly21的突变酶AoXyn11AG21I。该突变酶的表现出更好的温度特性。本发明得到的突变体比野生木聚糖酶具有更大的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN109355272A
公开(公告)日：2019-02-19
申请号：CN201811621705.X
申请日：2018-12-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的木聚糖酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达技术领域。本发明通过定点突变和饱和突变生物技术改造木聚糖酶的分子结构，得到一株催化活性提高的木聚糖酶突变体AEx11AT98D/V124Q。突变酶的比活性及催化效率分别为AEx11A的3.04和2.74倍，而且该酶在耐高温和高热稳定性方面仍然和原酶类似。本发明解决了木聚糖酶催化活性低的限制性问题，有较大应用潜力，也为木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN109355271A
公开(公告)日：2019-02-19
申请号：CN201811621721.9
申请日：2018-12-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种海洋红酵母来源的环氧化物水解酶及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种来源于海洋红酵母R.paludigenum的环氧化物水解酶基因(rpeh1)及对应的氨基酸序列；构建了含有该基因的重组质粒pET28a(+)-rpeh1和基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)-rpeh1，并利用该菌株制备重组环氧化物水解酶；应用本发明构建的基因工程菌进行生物催化，制备得到对映纯的R型苯基乙二醇ee>73％。
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公开(公告)号：CN108165538A
公开(公告)日：2018-06-15
申请号：CN201810033882.X
申请日：2018-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化活性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第106位的缬氨酸突变成了异亮氨酸。本发明摇瓶诱导10h得到的突变酶PvEH1V106I催化活性为234.75U/g，是野生型酶(157.15U/g)的1.49倍。
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公开(公告)号：CN108048423A
公开(公告)日：2018-05-18
申请号：CN201810033862.2
申请日：2018-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化活性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体及其应用，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第196位的亮氨酸突变成了天冬氨酸。本发明摇瓶诱导10h得到的突变酶PvEH1L196D催化活性为69.92U/g，是野生型酶(49.53U/g)的1.41倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108034646A
公开(公告)日：2018-05-15
申请号：CN201810033879.8
申请日：2018-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化活性和对映归一性提高的PvEH3突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明在具有一定对映归一性催化特性的环氧化物水解酶基础上，通过组合定点突变生物技术改造环氧化物水解酶分子结构，得到一株催化活性和对映归一性均提高的环氧化物水解酶突变体PvEH3G170E/F187L。突变体具有高对映归一择性、高催化活性的优点，有较大应用潜力，也为EH的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN104388412B
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201410757519.4
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种N端替换提高米曲霉木聚糖酶热稳定性的方法。基于高性能计算机及其相关生物学软件对Aspergillus oryzae常温木聚糖酶AoXyn11A耐热性改造的理性设计，将AoXyn11A N端41个氨基酸替换成同一家族耐热木聚糖酶TfGH11 N端42个氨基酸，获得了一种耐热杂合木聚糖酶ATX11A，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。该杂合酶基因ATx11A是采用大引物PCR技术由AoXyn11A和TfGH11基因的相应片段拼接而成的，其核苷酸序列为SEQ ID NO:2。将重组毕赤酵母GS115/ATx11A在30℃诱导72 h，期间每隔24 h添加1.0％(v/v)甲醇。表达的耐热杂合酶ATX11A的最适温度由AoXyn11A的50℃提高至65℃；在60℃处理1 h，ATX11A的半衰期由AoXyn11A的1.3 min延长至55 min。
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公开(公告)号：CN107177564A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710474462.0
申请日：2017-06-21
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12N15/70 , C12P7/42 , C12Y101/01027
Abstract: 本发明公开了一种干酪乳杆菌来源的L‑乳酸脱氢酶及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种新的乳酸脱氢酶，并实现了该基因的异源表达。通过构建含有该基因的重组质粒pET‑22b(+)‑Lcldh1,将其转化至大肠杆菌中，获得了含有表达质粒pET‑22b(+)‑Lcldh1的重组大肠杆菌E.coli/Lcldh1。以10mmol/L苯丙酮酸为底物，重组LcLDH1工程菌全细胞催化，反应1h，获得L‑PLA的浓度为8.59mmol/L，产率为85.9％，eep>99％。纯化后LcLDH1的比活力达到294.2U/mg，表现出了较高的催化活性和对映选择性，有明显的应用潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN104450652A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410759253.7
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2494 , C12Y302/01078
Abstract: 本发明提出了一种提高β-甘露聚糖酶催化活性方法，结合基因工程技术构建一种催化效率高的宇佐美曲霉甘露聚糖酶(AuMan5A)突变酶，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，氨基酸序列为SEQ ID NO:2，相应的基因命名为Auman5ALoop。本发明还公开了突变酶工程菌的构建、高效表达和纯化的方法，制备的突变酶具有底物亲和力强、催化效率高的特性，具有较大的工业化应用潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN104388450A
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201410758794.8
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种源自嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)GH11耐热木聚糖酶的密码子优化基因在大肠杆菌中表达、活性测定和酶学性质分析的方法。其基因命名为Syxyl11，它的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，编码的蛋白质为SyXyl11，氨基酸序列为SEQ ID NO:2。该酶活性为47.5U/mL；其最适反应温度为70℃，70℃下保温60min，残余酶活为78.3％，表明该酶的热稳定性比较好；其最适pH为6.0，在pH5.0～8.0范围内较稳定；金属离子对该酶活性影响较小。这为该酶的产业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化应用潜力及经济价值。
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