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公开(公告)号：CN110547193A
公开(公告)日：2019-12-10
申请号：CN201910865660.9
申请日：2019-09-12
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种培育不结球白菜小孢子植株的方法。该方法包括如下步骤：(1)花蕾的选取；(2)培育小孢子胚胎：将花蕾消毒，清洗，1/2NLN-13培养基润洗；将润洗后的花蕾加入1/2NLN-13培养基，充分研磨，过滤，离心，黄绿色沉淀用NLN-13培养基稀释，用甲基磺酸乙酯处理后分装到培养皿中，向培养皿中加入活性炭，使其浓度为1mg/mL，热激处理，然后暗培养14天形成胚状体；(3)成熟胚萌发成植株：将胚状体振荡培养，将其中转绿的成熟胚转移到改良固体1/2MS培养基中培育40d，直接进行炼苗移栽。本发明所述方法在能够保证出胚率的情况下，简化操作步骤，大大减少了操作时间，提高了植株生产效率。
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公开(公告)号：CN109757489A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201910167111.4
申请日：2019-03-06
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及种子引发技术领域，具体是一种不结球白菜种子引发剂，包括：抗坏血酸、氯化钙、赤霉素、聚乙二醇、缓冲剂、杀菌剂，所述抗坏血酸的浓度为20-200mg/L，所述不结球白菜种子引发剂中的抗坏血酸的两个最佳浓度分别为50和80mg/L，所述缓冲剂为葡萄糖、延胡索酸中的一种或多种，所述杀菌剂为四甲基秋兰姆二硫化物。本发明还公开了所述不结球白菜种子引发剂的应用方法。本发明不结球白菜种子引发剂通过抗坏血酸渗透引发作用，控制种子细胞吸水，有利于提高种子发芽力，促进不结球白菜种子萌发，具有防御膜脂过氧化及清除自由基、维持细胞膜的完整性的功能，更有利于幼苗生长。
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公开(公告)号：CN108504769A
公开(公告)日：2018-09-07
申请号：CN201810592942.1
申请日：2018-06-08
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6869 , C12N15/11
Abstract: 本发明选用早开花的油用型品种‘YS-143’与晚开花的芜菁品种‘VT-044’为试材，分别观察其在长日照和短日照两个条件下的开花时间。同时以两个材料为模板克隆这个基因的cDNA序列，并利用生物信息学技术对其氨基酸序列进行分析，发现早花型和晚花型白菜类作物CCA1基因上的差异位点，并通过生物信息学、测序比对等分析得到了初步确认，开发出一个InDel标记。所述InDel分子标记的核苷酸序列为ACCCTT，位于早花型白菜类作物CCA1基因的第六个外显子上，但不存在于晚花型白菜类作物CCA1基因编码区。最后通过验证，将其作为功能标记进行分子辅助育种工作。本发明的分子标记可简便、快速、高通量地应用于育种实践。
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公开(公告)号：CN108165647A
公开(公告)日：2018-06-15
申请号：CN201810002014.5
申请日：2018-01-02
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/13 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明提供了一种用于鉴定不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜的分子标记方法，设计了SSR分子标记引物SSR09133，以不结球白菜的DNA作为模板进行扩增，可以将未知品种的不结球白菜与苏州青、矮脚黄、乌塌菜三个品种区分开来。本方法不受植株生长发育阶段和环境的影响，具有准确性高、重复性好、操作简单、耗时短的优点，具有较高的商业应用前景，值得大范围推广。
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公开(公告)号：CN108017687A
公开(公告)日：2018-05-11
申请号：CN201711393806.1
申请日：2017-12-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K1/14
Abstract: 本发明属于植物营养成分提取领域，具体涉及一种基于响应面分析的不结球白菜叶片中可溶性蛋白提取方法；该方法通过单因素试验和配置标准溶液并绘制标准曲线，在595nm波长测得吸光值，计算出回归方程；称取新鲜不结球白菜叶片1g放入研钵中，加2ml磷酸缓冲溶液研磨成匀浆，转移到离心管中，再用6ml磷酸缓冲溶液分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一离心管中，在25℃下放置45min以充分提取，离心处理弃去沉淀，上清液转入10ml容量瓶，并以磷酸缓冲溶液定容至刻度，得待测样品提取液；吸取0.1ml蛋白质提取液，加入5ml考马斯亮蓝G250试剂，放置2min后测得595nm下的吸光值，计算得到待测样品提取液中蛋白质含量。本发明的实验准确性高和提取效果好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107794292A
公开(公告)日：2018-03-13
申请号：CN201711065535.7
申请日：2017-11-02
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: G01N33/5097 , G01N21/6486
Abstract: 本发明提供了一种侵染烟草的亚细胞定位试剂盒，包括缓冲试剂A1、降低植物免疫反应菌液A2、核定位农杆菌菌液A3和农杆菌感受态A4。该试剂盒利用植物抗性反应抑制蛋白抑制植物的自身免疫反应，提高农杆菌的侵染效率，增强外源目的基因的表达，从而使得荧光信号更强，更容易观察。同时因试剂盒含有核定位对照组份，避免了使用DAPI核染色过程中接触有毒等致癌物质，同时降低试验成本，减少环境污染。
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公开(公告)号：CN107557383A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710789234.2
申请日：2017-09-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种TYMV病毒诱导的十字花科内源基因沉默方法及其应用,以目标基因cDNA为模板进行PCR扩增，纯化连接载体，转化大肠杆菌，阳性克隆测序得到目的编码区全长CDS序列；根据测序后的结果选择序列为(T/A/G/C)TGA或(T/A/C)TAG或(T/A/C)TAA向后选择40bp序列；3’端加上其反向互补序列，两端再加入和线性化载体两端对应的同源序列长度为15bp的序列，合成双链DNA片段并与载体pTY-s融合连接，融合连接产物转化大肠杆菌，培养提取质粒，选择幼苗第一片真叶长出时，基因枪轰击，快速转入栽培土中培养。本发明载体构建容易，转染效率高，基因沉默效果明显，性状持久。
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公开(公告)号：CN107557381A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710949078.1
申请日：2017-10-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种白菜CRISPR-Cas9基因编辑体系的建立及其应用。设计两对sgRNA引物sGAvrIIF1/sGR1和sGF2/sGAvrIIR2，分别以pChimera sgRNA vector为模板进行PCR扩增，分别取纯化目的片段以sGAvrIIF1/sGAvrIIR2为引物进行融合PCR；将载体pCAS9-TPC与融合PCR产物酶切后融合连接，融合连接产物转化大肠杆菌，获得阳性菌落进行培养提取质粒得到植物基因编辑载体。通过本发明，可简单有效的实现了对白菜的基因编辑，对白菜转基因体系的建立也奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN104293906A
公开(公告)日：2015-01-21
申请号：CN201410182661.0
申请日：2014-04-30
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明公开了一种不结球白菜自交不亲和鉴定的SSR分子标记及其应用，其标记引物为Na12E02、KBRH138G23或BrSS15中的至少一种。本方法的SSR分子标记，可以应用于不结球白菜自交不亲和性的快速鉴定和检测，提高育种效率，加速育种进程。
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公开(公告)号：CN103734016A
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201410027435.5
申请日：2014-01-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明属农作物育种领域，公开了一种离体诱导同源四倍体青花菜的育种方法。该育种方法是以青花菜子叶期保留下胚轴0.4‐0.6cm的幼苗为外植体，将外植体接种至含秋水仙素的双层分化培养基上诱导培养45‐50h，直接诱导产生四倍体芽，进而可以快速稳定的获得同源四倍体青花菜。本发明首次采用液体培养基（添加秋水仙素）与固体培养基（不添加秋水仙素）双层诱导并结合处理青花菜子叶期保留下胚轴0.4‐0.6cm的幼苗的无性多倍化育种途径，获得四倍体青花菜新种质。其优点是诱导率高，嵌合体少，死亡率低，污染率低，并且获得的四倍体材料能通过分生增殖获得大量的四倍体植株，极大的缩短了诱导时间。
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