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公开(公告)号：CN113549617A
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202110618334.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开编辑不结球白菜CENH3基因的sgRNA及其CRISPR/Cas9载体和应用，本发明设计了不结球白菜CENH3基因的sg RNA，构建CRISPR/Cas9基因编辑载体，将连接了目的DNA片段的CRISPR/Cas9载体转入不结球白菜基因组中，通过基因编辑实现对不结球白菜CENH3基因的定点突变。本发明使用花粉纳米磁转化技术结合CRISPR/Cas9技术对不结球白菜内源基因CENH3进行编辑，通过植株抗性筛选、PCR检测、基因测序筛选得到CENH3单倍体诱导系，为在不结球白菜双单倍体育种中利用CENH3介导的染色体消除机制获得单倍体奠定基础。
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公开(公告)号：CN108513908B
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN201810442975.8
申请日：2018-05-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H1/08
Abstract: 本发明公开了一种四倍体不结球白菜的培育方法，采用细胞微管抑制剂氨磺灵混合水溶液点滴不结球白菜幼苗的生长点，使细胞染色体加倍，苗期进行气孔鉴定，开花期进行花粉鉴定，再通过流式细胞仪鉴定，筛选获得四倍体植株。同时在氨磺灵水溶液中加入吐温80和Silwet L‑77，吐温80能够增强氨磺灵的溶解性，并提高了氨磺灵水溶液的稳定性，而Silwet L‑77能极大降低水的表面张力，利于溶液与叶面的附着，从而提高了四倍体诱变率。该方法利用氨磺灵混合水溶液抑制细胞有丝分裂后期纺锤丝的形成，从而实现染色体加倍，为创造丰富的不结球白菜四倍体新种质和培育四倍体新品种提供了技术支持。
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公开(公告)号：CN110590729A
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201910904189.X
申请日：2019-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D311/62 , A61K47/42 , A61K31/352
Abstract: 本发明属于提高白菜花色苷热稳定性领域，涉及一种采用核桃肽提高白菜花色苷热稳定性的方法。包括以下步骤：选择生长状况良好的白菜，洗净备用；选取酸化的乙醇作为提取剂，将提取液和白菜在超声条件下提取花色苷，获得提取液；提取液离心来，分离上清液得到花色苷的粗提取液；浓缩来，得到花色苷粗提取浓缩液；将花色苷粗提取浓缩液中浸泡2.5-4小时，后再用蒸馏水冲洗大孔树脂，再用解吸液解吸大孔树脂，收集解吸液并浓缩，得到纯化的花色苷溶液；花色苷溶液中加入核桃肽溶液并加热来。本发明通过低浓度的核桃肽的作用来保存花色苷，并且能够较为显著的提高花色苷在一定温度的保存率，这对未来花色苷的保存和开发利用具有积极的作用。
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公开(公告)号：CN110089426A
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201810085112.X
申请日：2018-01-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开一种培育不结球白菜小孢子植株的方法，具体包括如下步骤：(1)花蕾的选取：选取花瓣与花药数量比为1:1的花蕾；(2)培育小孢子胚胎：将步骤(1)采集的花蕾用次氯酸钠溶液消毒10-15分钟，灭菌水清洗，NLN-13培养基润洗；将润洗后的花蕾充分研磨，过滤，离心，含有10-30mg/L硼物质的NLN-13培养基稀释，分装到培养皿中加入活性炭，热激处理，24-26℃暗培养14-16天，形成胚状体；(3)成熟胚萌发成植株：将胚状体进行振荡培养，将其中转绿的成熟胚转移到固体MS培养基中进行培养，培育38-42d后即可直接进行炼苗移栽。本发明所述方法在能够保证出胚率的情况下，简化操作步骤，大大减少了操作时间，提高了植株生产效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113564201B
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202110886126.3
申请日：2021-08-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种十字花科作物花粉电击遗传转化方法，以不结球白菜的成熟花粉细胞作为受体材料，把质粒DNA在电场的作用下，导入花粉中，结合常规的人工授粉，得到转基因种子。通过对电转染花粉的培养观察，以及获得的后代植株进行转基因检测，证明电击转化法可以成功的在不结球白菜上应用。本发明首次在不结球白菜上应用电击转化技术作为基因编辑的方法，与目前农杆菌转化，基因枪法等转基因方法相比，操作相对简洁，成本较低，可以进一步研究建立遗传转化体系，为不结球白菜的遗传育种提供更好的工具。
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公开(公告)号：CN115725777A
公开(公告)日：2023-03-03
申请号：CN202211540771.0
申请日：2022-12-02
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种苗期鉴定不结球白菜花瓣花色的方法。该方法以不结球白菜品种DNA作为模板，采用引物组wF35通过聚合酶链反应（PCR）扩增该片段，根据电泳后目的条带的大小，可在抽薹开花前初步推断不结球白菜品种花瓣颜色，筛选相应花色品种。本发明提供的方法，可以快速检测不结球白菜品种花色，实现对花色的早期精准预测，极大的节约时间和资源，大大提高选择效率，从而加快育种进程，在生产实践中也具有重要作用。
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公开(公告)号：CN110590729B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN201910904189.X
申请日：2019-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D311/62 , A61K47/42 , A61K31/352
Abstract: 本发明属于提高白菜花色苷热稳定性领域，涉及一种采用核桃肽提高白菜花色苷热稳定性的方法。包括以下步骤：选择生长状况良好的白菜，洗净备用；选取酸化的乙醇作为提取剂，将提取液和白菜在超声条件下提取花色苷，获得提取液；提取液离心来，分离上清液得到花色苷的粗提取液；浓缩来，得到花色苷粗提取浓缩液；将花色苷粗提取浓缩液中浸泡2.5‑4小时，后再用蒸馏水冲洗大孔树脂，再用解吸液解吸大孔树脂，收集解吸液并浓缩，得到纯化的花色苷溶液；花色苷溶液中加入核桃肽溶液并加热来。本发明通过低浓度的核桃肽的作用来保存花色苷，并且能够较为显著的提高花色苷在一定温度的保存率，这对未来花色苷的保存和开发利用具有积极的作用。
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公开(公告)号：CN108504769B
公开(公告)日：2021-03-30
申请号：CN201810592942.1
申请日：2018-06-08
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6869 , C12N15/11
Abstract: 本发明选用早开花的油用型品种‘YS‑143’与晚开花的芜菁品种‘VT‑044’为试材，分别观察其在长日照和短日照两个条件下的开花时间。同时以两个材料为模板克隆这个基因的cDNA序列，并利用生物信息学技术对其氨基酸序列进行分析，发现早花型和晚花型白菜类作物CCA1基因上的差异位点，并通过生物信息学、测序比对等分析得到了初步确认，开发出一个InDel标记。所述InDel分子标记的核苷酸序列为ACCCTT，位于早花型白菜类作物CCA1基因的第六个外显子上，但不存在于晚花型白菜类作物CCA1基因编码区。最后通过验证，将其作为功能标记进行分子辅助育种工作。本发明的分子标记可简便、快速、高通量地应用于育种实践。
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