公开(公告)号：CN107557383A

公开(公告)日：2018-01-09

申请号：CN201710789234.2

申请日：2017-09-05

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 侯喜林 ,  张昌伟 ,  高立伟 ,  俞静 ,  刘唱 ,  刘同坤 ,  李英 ,  郭明亮 ,  肖栋 ,  杨洋

IPC: C12N15/83 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明公开了一种TYMV病毒诱导的十字花科内源基因沉默方法及其应用,以目标基因cDNA为模板进行PCR扩增，纯化连接载体，转化大肠杆菌，阳性克隆测序得到目的编码区全长CDS序列；根据测序后的结果选择序列为(T/A/G/C)TGA或(T/A/C)TAG或(T/A/C)TAA向后选择40bp序列；3’端加上其反向互补序列，两端再加入和线性化载体两端对应的同源序列长度为15bp的序列，合成双链DNA片段并与载体pTY-s融合连接，融合连接产物转化大肠杆菌，培养提取质粒，选择幼苗第一片真叶长出时，基因枪轰击，快速转入栽培土中培养。本发明载体构建容易，转染效率高，基因沉默效果明显，性状持久。