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公开(公告)号:CN108017687A
公开(公告)日:2018-05-11
申请号:CN201711393806.1
申请日:2017-12-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K1/14
Abstract: 本发明属于植物营养成分提取领域,具体涉及一种基于响应面分析的不结球白菜叶片中可溶性蛋白提取方法;该方法通过单因素试验和配置标准溶液并绘制标准曲线,在595nm波长测得吸光值,计算出回归方程;称取新鲜不结球白菜叶片1g放入研钵中,加2ml磷酸缓冲溶液研磨成匀浆,转移到离心管中,再用6ml磷酸缓冲溶液分次洗涤研钵,洗涤液收集于同一离心管中,在25℃下放置45min以充分提取,离心处理弃去沉淀,上清液转入10ml容量瓶,并以磷酸缓冲溶液定容至刻度,得待测样品提取液;吸取0.1ml蛋白质提取液,加入5ml考马斯亮蓝G250试剂,放置2min后测得595nm下的吸光值,计算得到待测样品提取液中蛋白质含量。本发明的实验准确性高和提取效果好。
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公开(公告)号:CN107794292A
公开(公告)日:2018-03-13
申请号:CN201711065535.7
申请日:2017-11-02
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: G01N33/5097 , G01N21/6486
Abstract: 本发明提供了一种侵染烟草的亚细胞定位试剂盒,包括缓冲试剂A1、降低植物免疫反应菌液A2、核定位农杆菌菌液A3和农杆菌感受态A4。该试剂盒利用植物抗性反应抑制蛋白抑制植物的自身免疫反应,提高农杆菌的侵染效率,增强外源目的基因的表达,从而使得荧光信号更强,更容易观察。同时因试剂盒含有核定位对照组份,避免了使用DAPI核染色过程中接触有毒等致癌物质,同时降低试验成本,减少环境污染。
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公开(公告)号:CN107557383A
公开(公告)日:2018-01-09
申请号:CN201710789234.2
申请日:2017-09-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种TYMV病毒诱导的十字花科内源基因沉默方法及其应用,以目标基因cDNA为模板进行PCR扩增,纯化连接载体,转化大肠杆菌,阳性克隆测序得到目的编码区全长CDS序列;根据测序后的结果选择序列为(T/A/G/C)TGA或(T/A/C)TAG或(T/A/C)TAA向后选择40bp序列;3’端加上其反向互补序列,两端再加入和线性化载体两端对应的同源序列长度为15bp的序列,合成双链DNA片段并与载体pTY-s融合连接,融合连接产物转化大肠杆菌,培养提取质粒,选择幼苗第一片真叶长出时,基因枪轰击,快速转入栽培土中培养。本发明载体构建容易,转染效率高,基因沉默效果明显,性状持久。
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公开(公告)号:CN107557381A
公开(公告)日:2018-01-09
申请号:CN201710949078.1
申请日:2017-10-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种白菜CRISPR-Cas9基因编辑体系的建立及其应用。设计两对sgRNA引物sGAvrIIF1/sGR1和sGF2/sGAvrIIR2,分别以pChimera sgRNA vector为模板进行PCR扩增,分别取纯化目的片段以sGAvrIIF1/sGAvrIIR2为引物进行融合PCR;将载体pCAS9-TPC与融合PCR产物酶切后融合连接,融合连接产物转化大肠杆菌,获得阳性菌落进行培养提取质粒得到植物基因编辑载体。通过本发明,可简单有效的实现了对白菜的基因编辑,对白菜转基因体系的建立也奠定了良好的基础。
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公开(公告)号:CN104293906A
公开(公告)日:2015-01-21
申请号:CN201410182661.0
申请日:2014-04-30
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明公开了一种不结球白菜自交不亲和鉴定的SSR分子标记及其应用,其标记引物为Na12E02、KBRH138G23或BrSS15中的至少一种。本方法的SSR分子标记,可以应用于不结球白菜自交不亲和性的快速鉴定和检测,提高育种效率,加速育种进程。
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公开(公告)号:CN103734016A
公开(公告)日:2014-04-23
申请号:CN201410027435.5
申请日:2014-01-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明属农作物育种领域,公开了一种离体诱导同源四倍体青花菜的育种方法。该育种方法是以青花菜子叶期保留下胚轴0.4‐0.6cm的幼苗为外植体,将外植体接种至含秋水仙素的双层分化培养基上诱导培养45‐50h,直接诱导产生四倍体芽,进而可以快速稳定的获得同源四倍体青花菜。本发明首次采用液体培养基(添加秋水仙素)与固体培养基(不添加秋水仙素)双层诱导并结合处理青花菜子叶期保留下胚轴0.4‐0.6cm的幼苗的无性多倍化育种途径,获得四倍体青花菜新种质。其优点是诱导率高,嵌合体少,死亡率低,污染率低,并且获得的四倍体材料能通过分生增殖获得大量的四倍体植株,极大的缩短了诱导时间。
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公开(公告)号:CN102349443B
公开(公告)日:2013-05-29
申请号:CN201110201936.7
申请日:2011-07-19
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种提高小菘菜游离小孢子胚胎发生率的方法,选取小菘菜单核靠边期的花蕾,消毒后分离纯化出小孢子,将纯化后的小孢子悬浮于高糖培养基中,调整小孢子的密度达到1×105~1×106个/ml,置于33℃-35℃下黑暗处理12h-24h,离心弃上清后,加入低糖培养基,获得小孢子悬浮液。小孢子悬浮液于黑暗处理10d-14d后即可出现肉眼可见的胚状体,将其置于振荡培养箱中培养,出现子叶型胚后立即放于光照下转绿,然后接到分化培养基上继代进而形成再生植株。通过本发明改良后的小孢子培养方法,使对常规培养没有反应的小菘菜品种产生了胚状体,诱导基因型成功率达到60%。
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公开(公告)号:CN101338341B
公开(公告)日:2013-05-22
申请号:CN200810123996.X
申请日:2008-06-16
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明提供了不结球白菜高Vc含量基因的分子标记方法,属于分子遗传学领域。对不结球白菜高Vc含量品种‘常州乌塌菜’和低Vc含量品种‘二青’进行RAPD分子标记的筛选,获得与不结球白菜高Vc含量基因连锁的一个标记AW5561,对该特异片段进行测序分析,并将其转化为稳定的SCAR标记,即SCAW5532。通过本发明提供的分子标记,可有效开展不结球白菜高Vc含量品种的选育,大大提高选择效率,从而加快育种进程。
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公开(公告)号:CN102608056A
公开(公告)日:2012-07-25
申请号:CN201210081629.4
申请日:2012-03-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/33
Abstract: 本发明公开了一种利用紫外分光光度法测定植物中抗坏血酸含量的方法,该方法测定样品提取液中抗坏血酸的紫外吸收值,再用碱处理法破坏抗坏血酸测定背景紫外吸收值,两者的差值计算抗坏血酸的含量。特点在于测定背景样品时采用高浓度碱处理方法,使还原型抗坏血酸清除完全,同时避免了碱性环境对待测液紫外吸收的影响。该方法操作简单,测定结果准确,不易受到还原性物质的干扰,适用于植物学研究中数量较多的样品抗坏血酸的测定。
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公开(公告)号:CN101946696A
公开(公告)日:2011-01-19
申请号:CN201010529852.1
申请日:2010-11-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属农作物育种领域,公开了一种四倍体不结球白菜的有性多倍化育种方法。该育种方法是在二倍体不结球白菜抽薹期使用秋水仙素溶液处理花蕾诱导产生2n雄配子;以四倍体雄性不育系为母本,以所述的秋水仙素诱导得到的含2n雄配子的二倍体为父本在花期进行人工有性多倍化杂交育种,获得所述的四倍体不结球白菜。本发明首次采用四倍体不结球白菜雄性不育系×诱变产生2n配子的二倍体不结球白菜的有性多倍化育种途径,获得四倍体不结球白菜新种质,与无性多倍化的同源四倍体相比具有更广泛的遗传多样性,更高的结实率。本发明新四倍体具有多倍体的巨大性、抗病性、耐寒性,品质好,还具有二倍体父本的性状。
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