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公开(公告)号：CN113699150A
公开(公告)日：2021-11-26
申请号：CN202110966613.0
申请日：2021-08-23
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明属于分子生物学和细胞生物学领域，具体涉及一种PKR基因敲减Marc‑145细胞系。本发明提供了一种利用RNAi敲减PKR基因的siRNA的正向和反向序列如SEQ ID NO:1‑2所示；shRNA的序列如SEQ ID NO:3所示。将含如SEQ ID NO:3所示目的基因序列的表达载体转染Marc‑145细胞系，筛选后可获得能够稳定遗传的PKR蛋白表达量降低的细胞系：Marc‑145∧143，该细胞系中PKR蛋白表达量降低不低于90%。该siRNA、shRNA或Marc‑145∧143细胞系可用于生产预防或治疗NDV、PRRSV或PRV的药剂或疫苗。
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公开(公告)号：CN111499745B
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN202010341773.1
申请日：2020-04-27
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
IPC: C07K16/18 , C07K16/06 , G01N33/539
Abstract: 本发明提供了一种CRP单价及双价纳米抗体，所述纳米抗体具有较高的ELISA效价，可以用于CPR的实验室和临床检测，且经试验表明，CRP双价纳米抗体的亲和活性比单价纳米抗体增加了10倍，取得了预料不到的技术效果。所述CRP单价及双价纳米抗体容易利用微生物进行生产，并具有很高的产率，有利于工业化生产。
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公开(公告)号：CN112010949B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202010764917.4
申请日：2020-08-03
Applicant: 山东绿都生物科技有限公司 , 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明提供一种重组PCV2病毒样颗粒疫苗制备方法，所述的制备方法是通过对猪圆环病毒2型Cap蛋白进行优化，并利用重组无内毒素大肠杆菌高密度发酵，获得高表达量的猪圆环病毒2型病毒样颗粒。本发明的猪圆环病毒2型Cap蛋白，其相比原始序列增加了一对二硫键，并对相应的序列片段进行优化，试验结果表明，通过所述序列的优化增加了病毒样颗粒疫苗的免疫原性，试验结果表明，通过高密度发酵与高效表达实现了Cap蛋白的高效表达，10倍浓缩表达菌可获得1:64‑1:128的琼扩效价；相比未优化的序列和其他佐剂的疫苗。
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公开(公告)号：CN112225781B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN202010915134.1
申请日：2020-09-03
Applicant: 清源生物(深圳)有限公司 , 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 滨州医学院附属医院 , 清源之光(武汉)生物科技有限公司 , 清源生物(江苏)有限公司
IPC: C07K14/165 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P21/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于免疫技术领域，具体涉及一种高效表达新型冠状病毒N蛋白的方法。本发明按照2.0％‑3.0％的接种量将种子液接种至发酵培养基中，培养温度为35‑37℃，pH值维持在7.3‑7.5，维持溶氧水平在30％左右；当初始碳源耗尽后，根据溶氧反馈补料策略，溶氧水平升至50％‑60％时补加50％‑80％甘油溶液；溶氧水平降至20％‑30％时停止补加，如此反复；当细菌浓度达到1.0‑3.0时，加入0.3‑1mM IPTG进行诱导，且继续培养2h后，再次加入0.3mM IPTG进行二次诱导，总诱导为6‑8h。可以实现新冠病毒截短N蛋白的可溶性高效表达，能满足大规模生产可溶性新冠病毒N蛋白的需求。
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公开(公告)号：CN112979767A
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202110171271.3
申请日：2021-02-08
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
IPC: C07K14/30 , C12N15/31 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本申请公开了一种检测牛支原体抗体的抗原组合物、试剂盒及其应用。所述抗原组合物包括第一抗原，所述第一抗原的氨基酸序列包括SEQ ID No.1所示序列。所述抗原组合物还包括第二抗原，所述第二抗原的氨基酸序列包括SEQ ID No.2所示序列。以本发明的抗原组合物做为ELISA法的包被抗原，对国内牛支原体流行血清型的检出率明显高于现有的进口试剂盒。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112010949A
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN202010764917.4
申请日：2020-08-03
Applicant: 山东绿都生物科技有限公司 , 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明提供一种重组PCV2病毒样颗粒疫苗制备方法，所述的制备方法是通过对猪圆环病毒2型Cap蛋白进行优化，并利用重组无内毒素大肠杆菌高密度发酵，获得高表达量的猪圆环病毒2型病毒样颗粒。本发明的猪圆环病毒2型Cap蛋白，其相比原始序列增加了一对二硫键，并对相应的序列片段进行优化，试验结果表明，通过所述序列的优化增加了病毒样颗粒疫苗的免疫原性，试验结果表明，通过高密度发酵与高效表达实现了Cap蛋白的高效表达，10倍浓缩表达菌可获得1:64-1:128的琼扩效价；相比未优化的序列和其他佐剂的疫苗。
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公开(公告)号：CN107308445B
公开(公告)日：2020-11-24
申请号：CN201710616191.8
申请日：2017-07-26
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明公开了一种羊三联四防亚单位疫苗及其制备方法，属于动物疫病防控领域。本发明由产气荚膜梭菌β‑ε融合蛋白、腐败梭菌α毒素重组蛋白和佐剂组成。本发明克隆、表达的产气荚膜梭菌C58‑1株的β‑ε(β和ε融合蛋白)和腐败梭菌C55‑2株α毒素蛋白，纯化后与佐剂混合后配制成疫苗免疫小白鼠和家兔，利用《中国兽药典》二〇一五年版三部关于羊“三联四防疫苗”检验标准检验合格，并且攻毒保护试验结果表明，免疫上述蛋白的动物对产气荚膜梭菌B型、C型、D型和腐败梭菌具有100％保护力。因此，本发明可替代传统“三联四防”疫苗。
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公开(公告)号：CN104152403B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201410408788.X
申请日：2014-08-19
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明公开了一种建立鹅胚上皮细胞系的方法及建立的鹅胚上皮细胞系。本发明涉及一种建立鹅胚上皮细胞系的方法，其特征在于将原代鹅胚胎组织贴壁法、差速酶消化法和单克隆筛选方法相结合，优化了原代培养条件。此方法操作方法简便，便于推广应用。本发明还涉及所述方法建立的鹅上皮细胞系，其保藏号为CCTCC C2014137，该细胞系的建立解决了目前尚未有完善的鹅源细胞系的问题。本发明还涉及一种用于培养和/或增殖小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒及I型鸭肝炎病毒及新型鸭肝炎病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的待感染宿主细胞即为或包括所述的鹅胚上皮细胞系。本发明，验证了所述鹅胚上皮细胞系对小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒及I型鸭肝炎病毒及新型鸭肝炎病毒感染的敏感特性。
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公开(公告)号：CN109337995A
公开(公告)日：2019-02-15
申请号：CN201811279119.1
申请日：2018-10-30
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 中国农业大学
Abstract: 本发明提供土拉杆菌及其亚种的PCR检测方法和试剂盒。所述试剂盒中至少含有检测土拉杆菌的通用引物(SEQ ID NO：1-2)以及检测土拉杆菌亚种F.m、F.n、F.tu和F.h的特异性PCR引物(SEQ ID NO：3-10)。本发明的PCR检测方法能够快速确定土拉杆菌，并对土拉杆菌进行亚种的确定，可直接对病料检测，避免了常规的细菌分离、培养和生化鉴定的复杂过程，缩短了检测时间，且操作方便，简单培训即能熟练使用，同时避免了操作人员直接接触病原，提高了检验过程的安全性。本方法敏感性高、特异性强，能将土拉杆菌亚种与其他亚种区分开来，且无任何交叉反应。本发明为基层分析单位检测提供有力的技术支持。
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公开(公告)号：CN109022470A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810736332.4
申请日：2018-07-06
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
CPC classification number: C12N15/70 , C07K14/005 , C07K16/1036 , C12N2740/11022 , G01N33/56983 , G01N2333/15
Abstract: 本发明公开了一种J亚群禽白血病病毒gp85基因重组原核表达蛋白及其纯化方法和应用，包括下列步骤：（1）设计并合成扩增gp85基因的特异性引物（2）PCR扩增获得gp85基因片段并纯化；（3）将gp85基因克隆至pET‑32a原核表达载体，筛选阳性克隆后测序鉴定；（4）重组表达载体pET‑32a‑gp85的表达；（5）尿素法纯化表达的gp85蛋白；（6）重组gp85蛋白的复性。利用本发明的方法获得了高纯度的可溶性gp85蛋白。表达的蛋白可作为包被抗原建立抗体检测方法，还可用于免疫动物制备抗血清，为免疫荧光、免疫组化、胶体金检测卡制备等提供原材料。
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