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公开(公告)号：CN109337995B
公开(公告)日：2022-05-06
申请号：CN201811279119.1
申请日：2018-10-30
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 中国农业大学
Abstract: 本发明提供土拉杆菌及其亚种的PCR检测方法和试剂盒。所述试剂盒中至少含有检测土拉杆菌的通用引物(SEQ ID NO：1‑2)以及检测土拉杆菌亚种F.m、F.n、F.tu和F.h的特异性PCR引物(SEQ ID NO：3‑10)。本发明的PCR检测方法能够快速确定土拉杆菌，并对土拉杆菌进行亚种的确定，可直接对病料检测，避免了常规的细菌分离、培养和生化鉴定的复杂过程，缩短了检测时间，且操作方便，简单培训即能熟练使用，同时避免了操作人员直接接触病原，提高了检验过程的安全性。本方法敏感性高、特异性强，能将土拉杆菌亚种与其他亚种区分开来，且无任何交叉反应。本发明为基层分析单位检测提供有力的技术支持。
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公开(公告)号：CN109337995A
公开(公告)日：2019-02-15
申请号：CN201811279119.1
申请日：2018-10-30
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 中国农业大学
Abstract: 本发明提供土拉杆菌及其亚种的PCR检测方法和试剂盒。所述试剂盒中至少含有检测土拉杆菌的通用引物(SEQ ID NO：1-2)以及检测土拉杆菌亚种F.m、F.n、F.tu和F.h的特异性PCR引物(SEQ ID NO：3-10)。本发明的PCR检测方法能够快速确定土拉杆菌，并对土拉杆菌进行亚种的确定，可直接对病料检测，避免了常规的细菌分离、培养和生化鉴定的复杂过程，缩短了检测时间，且操作方便，简单培训即能熟练使用，同时避免了操作人员直接接触病原，提高了检验过程的安全性。本方法敏感性高、特异性强，能将土拉杆菌亚种与其他亚种区分开来，且无任何交叉反应。本发明为基层分析单位检测提供有力的技术支持。
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公开(公告)号：CN109355221A
公开(公告)日：2019-02-19
申请号：CN201811313599.9
申请日：2018-11-06
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院
Abstract: 本发明提供了一种用于高密度发酵制备霍乱弧菌菌影的培养基及方法。其培养基组分包括：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、柠檬酸、KCl、MgSO4·7H2O、(NH4)2SO4、甜菜碱、VB1、VH、氨苄霉素和氯化胆碱，其pH值为7.30～7.50。其方法是在培养过程中，加入国产阿拉伯糖进行诱导；诱导阶段，以一定的补加速率补加一定营养物质与抗生素进行诱导，菌影形成率达到99％以上。本发明可以实现大量生产霍乱弧菌菌影，能满足大规模生产霍乱弧菌菌影佐剂的需求。
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公开(公告)号：CN112877246B
公开(公告)日：2022-01-18
申请号：CN202110200360.6
申请日：2021-02-23
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 山东绿都生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供了一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法，包括：在霍乱弧菌工程菌的培养过程中加入阿拉伯糖进行诱导，诱导培养1～3h后，再次加入阿拉伯糖进行二次诱导：在诱导阶段，当检测到溶氧值突然下降时，添加卡那霉素，继续培养0.5～1.5h后活菌数目为0；诱导培养4～6h后，菌影形成率达到99％以上。本发明利用二次诱导策略，缩短诱导时间，收获菌影量提高了16％以上，且内毒素含量降低至初始工艺的1/5以下，显著提高了生产效率，降低生产成本；本发明制备的霍乱弧菌菌影形态均匀、完整，活菌数目为0，无需再进行灭活处理，安全性更高。
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公开(公告)号：CN112877246A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110200360.6
申请日：2021-02-23
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 山东绿都生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供了一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法，包括：在霍乱弧菌工程菌的培养过程中加入阿拉伯糖进行诱导，诱导培养1～3h后，再次加入阿拉伯糖进行二次诱导：在诱导阶段，当检测到溶氧值突然下降时，添加卡那霉素，继续培养0.5～1.5h后活菌数目为0；诱导培养4～6h后，菌影形成率达到99％以上。本发明利用二次诱导策略，缩短诱导时间，收获菌影量提高了16％以上，且内毒素含量降低至初始工艺的1/5以下，显著提高了生产效率，降低生产成本；本发明制备的霍乱弧菌菌影形态均匀、完整，活菌数目为0，无需再进行灭活处理，安全性更高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109355221B
公开(公告)日：2020-09-08
申请号：CN201811313599.9
申请日：2018-11-06
Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 , 山东绿都生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供了一种用于高密度发酵制备霍乱弧菌菌影的培养基及方法。其培养基组分包括：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、柠檬酸、KCl、MgSO4·7H2O、(NH4)2SO4、甜菜碱、VB1、VH、氨苄霉素和氯化胆碱，其pH值为7.30～7.50。其方法是在培养过程中，加入国产阿拉伯糖进行诱导；诱导阶段，以一定的补加速率补加一定营养物质与抗生素进行诱导，菌影形成率达到99％以上。本发明可以实现大量生产霍乱弧菌菌影，能满足大规模生产霍乱弧菌菌影佐剂的需求。
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公开(公告)号：CN118853671A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202410860562.7
申请日：2024-06-28
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N9/22 , C12N5/10 , C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种基于脱硫弧菌I‑C型CRISPR基因编辑系统及其应用，属于基因编辑技术领域。上述基因编辑系统包括CRISPR RNA、I‑C型编辑器piggyBac载体和DNA剪切模块；I‑C型编辑器piggyBac载体包括Cascade组件、Cas3蛋白及Puro抗性基因所述Cascade组件由Cas5c蛋白、Cas7c蛋白、Cas8c蛋白和Cas11c蛋白复合而成，通过不同的2A肽连接，受同一CMV启动子调控。本发明所得基因编辑系统在哺乳动物细胞和动物中能够进行精确高效基因组编辑和碱基编辑。利用优化的编辑器和成对的PAM内向crRNAs，在人类和猪细胞系的多个内源位点实现了定义性的缺失。
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公开(公告)号：CN113087778B
公开(公告)日：2022-08-16
申请号：CN202110394222.6
申请日：2021-04-13
Applicant: 中国农业大学
IPC: C07K14/295 , C12N15/31 , C12N15/81 , A61K39/118 , A61K39/39 , A61P31/04 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/865
Abstract: 本发明提供了一种禽鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)多形外膜蛋白PmpG蛋白的制备方法及其应用。本发明提供：1)鹦鹉热衣原体PmpG蛋白包括17G、19G、20G和21G蛋白表达的引物、载体、表达条件、蛋白复性技术。2)利用制备的Pmp20G蛋白为包被抗原，制备ELISA诊断试剂盒，具有良好的特异性、敏感性和重复性，与国外商品化试剂盒相比符合率达到98.1％，且与其它相关呼吸道病原无交叉反应。3)以鹦鹉热衣原体Pmp17G、19G、20G、21G四种蛋白组合物为抗原，制备的疫苗具有使用剂量小，协同效应高，免疫保护效力高等特点。4)以鹦鹉热衣原体Pmp17G、19G、20G、21G四种蛋白组合物为抗原，以壳聚糖凝胶为佐剂可通过气雾免疫途径，产生良好的呼吸道粘膜免疫，防治鹦鹉热衣原体的感染，阻断鹦鹉热衣原体从畜禽向人群传播。
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公开(公告)号：CN108486066B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201810162660.8
申请日：2018-02-27
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/12 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明属于免疫学领域，具体公开了一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗流产衣原体的单抗。本发明以纯化获得的原核表达流产衣原体主要外膜重组蛋白(MOMP)作为抗原免疫小鼠，通过间接ELISA方法筛选阳性克隆，获得了分泌针对流产衣原体主要外膜重组蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞CA1‑MM 01。该杂交瘤细胞经连续传代培养和冻存后的稳定性，以及单克隆抗体的亚型、及效价等方面，对所获得的单克隆抗体进行了鉴定，结果表明所获得的杂交瘤细胞分泌抗体的能力强而且稳定，单克隆抗体效价高。所获得的流产衣原体单克隆抗体荧光素标记后直接荧光法检测样本，实验结果表明所获得的单克隆抗体均对流产衣原体具有很高的特异性和很强的结合能力。
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公开(公告)号：CN108802368B
公开(公告)日：2021-05-04
申请号：CN201810259741.X
申请日：2018-03-27
Applicant: 中国农业大学
IPC: C07K14/295 , G01N33/535
Abstract: 本发明涉及免疫学领域，具体公开了一种酶联免疫检测牛流产衣原体的试剂盒。本发明通过人工合成如SEQ ID NO.1所示的多肽，并以此为抗原，包被固相载体，以实现牛流产衣原体的酶联免疫吸附检测。本发明以该人工合成的多肽抗原作为包被抗原，使酶联免疫吸附检测具有特异性高、灵敏性好的特点。本发明还在抗原包被固相载体后，提供了优化的抗原保护剂，对包被好的抗原进行保护，延长了抗原的保存时间。
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