公开(公告)号：CN113846173A

公开(公告)日：2021-12-28

申请号：CN202111021185.0

申请日：2021-09-01

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 满朝新 ,  姜毓君 ,  付世骞 ,  杨鑫焱 ,  秦雪 ,  宋丹靓敏

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 一种用于阪崎克罗诺杆菌检测的新靶标、引物组及其检测方法，属于食品安全技术领域。为解决阪崎克罗诺杆菌传统检测方法步骤繁琐、耗时长、检测效率低，核酸检测的相关基因数量少且特异性不强的问题，本发明提供了用于阪崎克罗诺杆菌检测的新靶标，利用该靶标设计LAMP引物，并以样本DNA作为底物进行LAMP扩增反应，同时在反应前向体系中添加HNB染料，在恒温条件下扩增一段时间后，通过肉眼观察颜色变化可以判断样本中是否有目标菌的存在，实现了扩增阪崎克罗诺杆菌的可视化快速检测，该检测方法具有较高的灵敏性、特异性和实用性，拥有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN113699258A

公开(公告)日：2021-11-26

申请号：CN202111018531.X

申请日：2021-08-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 满朝新 ,  姜毓君 ,  秦雪 ,  付世骞 ,  杨鑫焱

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11 ,  C12R1/42 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种同时检测克罗诺杆菌和沙门氏菌的引物组合、试剂盒及其应用，属于食品安全技术领域。为了解决传统微生物学方法检测沙门氏菌和克罗诺杆菌中存在的问题，本发明提供一种基于LAMP反应的双重试纸条和引物组合如SEQ ID NO:1‑8所示，步骤为提取沙门氏菌和克罗诺杆菌DNA并经过LAMP反应扩增出大量目标产物，通过在稳定胶体金、金标抗体、复溶液和稀释液制备的基础上构建的双重试纸条对结果进行肉眼直接判读。本发明获得的双重试纸条具有制作简单、成本低廉以及检测灵敏等优点，可用于同时检测食品及食品加工过程中的沙门氏菌和克罗诺杆菌污染，尤其是婴幼儿配方乳粉中的致病菌污染。

公开(公告)号：CN109750089A

公开(公告)日：2019-05-14

申请号：CN201711082478.3

申请日：2017-11-07

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 付世骞 ,  冯晓涵 ,  张紫薇 ,  姜毓君 ,  满朝新

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/04

Abstract: 本发明公开了一种快速检测乳中单增李斯特菌活菌的方法，属于食品安全技术领域。该方法是向受检乳中加入PMA，然后置于暗处孵育，接着卤素灯曝光；加入柠檬酸钠和氢氧化钠，经离心，弃上清，洗涤等一系列操作后，提取DNA；以提取物作为模板进行LAMP扩增，得到LAMP扩增产物；利用琼脂糖凝胶电泳法观察条带的有无对LAMP扩增产物进行鉴定，即完成检测。本发明方法耗时较短，检测灵敏度高，可以显著减少原料乳加工前和成品出厂前待检结果的储藏时间。对液体乳中单增李斯特菌活菌的检出限为6.37×101CFU/mL，可广泛应用于快速检测食品中的单增李斯特活菌。

公开(公告)号：CN114561480A

公开(公告)日：2022-05-31

申请号：CN202210213669.3

申请日：2022-03-04

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  满朝新 ,  秦雪 ,  杨鑫焱 ,  付世骞

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 一种用于检测阪崎克罗诺杆菌的RPA引物对、试剂盒及检测方法，属于食品安全技术领域。为了解决现有技术检测克罗诺杆菌存在的问题，本发明提供了一种更简单、快速的aRPA可视化检测方法。所述检测方法的检测原理为以阪崎克罗诺杆菌特异性靶基因设计引物，通过不对称RPA产生大量富含G的ssDNA，形成的G‑四联体与血红素形成具有过氧化物酶活性的DNA酶，催化H2O2和底物TMB的反应产生明显蓝色产物，实现阪崎克罗诺杆菌的可视化检测。本发明获得的可视化检测方法具有简单、快速和灵敏度高等特点，可用于实时和现场检测食品及食品加工过程中的阪崎克罗诺杆菌污染，尤其是婴幼儿配方奶粉生产中的克罗诺杆菌污染。

公开(公告)号：CN111286469A

公开(公告)日：2020-06-16

申请号：CN201811503743.5

申请日：2018-12-10

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 满朝新 ,  姜毓君 ,  张雅硕 ,  侯一超 ,  张紫薇 ,  付世骞 ,  张微 ,  王浩

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/04 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法，属于益生菌发酵剂技术领域。该方法是收集副干酪乳杆菌的菌体，然后与冻干保护剂混合；冻干保护剂由脱脂奶粉，蔗糖，聚乙烯吡咯烷酮，谷胱甘肽和水制备而成；然后将菌体和冻干保护剂的混合溶液平铺在冻干器皿中进行预冻处理，待冻结完全后将预冻好的样品进行真空冷冻干燥处理。本发明制备方法所制得的副干酪乳杆菌的冻干菌粉中菌体的存活因子达0.998±0.001，活菌数为2.35×1011cfu/g，活菌数含量高。为副干酪乳杆菌产品的开发及其在乳制品、食品、医药等方面提供了必要的技术支持。

公开(公告)号：CN109825554A

公开(公告)日：2019-05-31

申请号：CN201711182250.1

申请日：2017-11-23

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 姜毓君 ,  付世骞 ,  李虹甫 ,  满朝新 ,  张雅硕

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/689 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种利用免疫磁捕获快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，属于食品安全快速检测技术领域。该方法是将阪崎克罗诺杆菌的单克隆抗体和羧基磁珠进行共价偶联获得免疫磁珠，然后利用获得的免疫磁珠对置于捕获体系中进行捕获，并利用LAMP方法进行扩增检测。本发明方法可以快速、高效的捕获并富集阪崎克罗诺杆菌，尤其是在纯培养物和乳制品中，改善了传统前增菌过程的弊端，大大缩短了增菌时间，耗时短，同时为各种病原体的检测提供了新的前处理方法。且LAMP方法具有操作简便，特异性强、灵敏度高等优点，为实现快速检测阪崎克罗诺杆菌领域提供了参考。

公开(公告)号：CN111286469B

公开(公告)日：2022-11-01

申请号：CN201811503743.5

申请日：2018-12-10

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 满朝新 ,  姜毓君 ,  张雅硕 ,  侯一超 ,  张紫薇 ,  付世骞 ,  张微 ,  王浩

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/04 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法，属于益生菌发酵剂技术领域。该方法是收集副干酪乳杆菌的菌体，然后与冻干保护剂混合；冻干保护剂由脱脂奶粉，蔗糖，聚乙烯吡咯烷酮，谷胱甘肽和水制备而成；然后将菌体和冻干保护剂的混合溶液平铺在冻干器皿中进行预冻处理，待冻结完全后将预冻好的样品进行真空冷冻干燥处理。本发明制备方法所制得的副干酪乳杆菌的冻干菌粉中菌体的存活因子达0.998±0.001，活菌数为2.35×1011cfu/g，活菌数含量高。为副干酪乳杆菌产品的开发及其在乳制品、食品、医药等方面提供了必要的技术支持。

公开(公告)号：CN109669039A

公开(公告)日：2019-04-23

申请号：CN201710957730.4

申请日：2017-10-16

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 潘瑞丽 ,  党芳芳 ,  王蕊 ,  孙露宏 ,  付世骞 ,  姜毓君 ,  满朝新

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/532

Abstract: 本发明公开了一种快速检测阪崎克罗诺杆菌的增敏试纸条及其应用，属于阪崎克罗诺杆菌检测技术领域。本发明增敏试纸条包括样品垫，金标垫，NC膜，吸水垫和底板，其中：NC膜上设有检测线和控制线，控制线上包被有羊抗鼠二抗，检测线上包被的检测线溶液是通过将胶体金与抗阪崎克罗诺杆菌捕获抗体进行孵育获得的。本发明试纸条具有可提高NC膜上蛋白质结合量的特点，进而增强捕获率，而且在检测线处加入的胶体金可以提高聚集显色，从而提高检测效果，较传统试纸条灵敏度提高了100倍，特异性强，检测时间短，制作简便且成本低，方便携带，适用于现场检测阪崎克罗诺杆菌。