公开(公告)号：CN107557451A

公开(公告)日：2018-01-09

申请号：CN201710879446.X

申请日：2017-09-26

Applicant: 苏州大学附属第一医院

Inventor： 何军 ,  胡星 ,  张环环 ,  邱桥成 ,  鲍晓晶

IPC: C12Q1/6811 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明提供了荧光定量PCR检测KIR2DS1-mRNA的试剂盒所用扩增引物的制备方法，包括以下步骤：（1）DNA抽提；（2）将步骤（1）中提取的DNA标本运用PCR-SSO方法进行KIR基因分型筛选出KIR2DS1阳性DNA标本；（3）将筛选出的DNA标本进行PCR扩增，电泳分析，分离纯化；（4）将步骤（3）得到的KIR2DS1基因与T载体进行连接，转化，挑选菌群后，抽取质粒，测序；（5）采用软件对所得产物进行引物及荧光探针设计。本方法可以直接找到KIR2DS1的特征性序列，进而设计引物探针，成功避免了与其同源性极高的KIR2DL1基因序列对引物及探针设计的干扰。

公开(公告)号：CN109055504A

公开(公告)日：2018-12-21

申请号：CN201810938968.7

申请日：2018-08-17

Applicant: 苏州大学附属第一医院

Inventor： 何军 ,  李颖 ,  邱桥成 ,  鲍晓晶

IPC: C12Q1/6851 ,  C12Q1/6881 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  C12Q1/6881 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2565/125

Abstract: 本发明属于生物检测领域，具体涉及一种KIR2DS3 mRNA的荧光定量PCR检测方法及其检测试剂盒，引物及探针的设计方法包括以下步骤：（1）运用PCR‑SSOP方法对DNA样本进行KIR基因分型，筛选出KIR2DS3阳性DNA；（2）将阳性DNA样本进行PCR扩增、电泳；（3）提取KIR2DS3特异性DNA条带，经割胶、纯化后与T载体连接，经转化、挑选菌群后抽取质粒测序；（4）测序结果与KIR/IPD数据库进行比对，证实其为特征性基因序列；（5）根据特征性KIR2DS3基因序列，运用引物设计软件，设计出引物及探针。使用设计出的引物及探针进行基因检测。该方法提高了PCR检测的特异性和准确率。