菠萝转录因子AcWRKY38基因的克隆、表达载体构建及其在菠萝寒害中的应用

    公开(公告)号:CN118109501A

    公开(公告)日:2024-05-31

    申请号:CN202311775305.5

    申请日:2023-12-22

    Abstract: 本发明公开了菠萝转录因子AcWRKY38基因的克隆方法、表达载体构建及其在调控植物冷胁迫中的应用,首先提取菠萝叶片的RNA,反转录获得cDNA;再以菠萝cDNA为模版,根据目的基因的序列设计特异性引物,通过特异性引物AcWRKY38F,AcWRKY38R进行PCR扩增获得目的片段。AcWRKY38基因的目的片段连接到pENTR载体上并进行热激转化,连接成功进行PCR鉴定,测序无误后,提取质粒。然后将已连接上GATEWAY入门载体pENTR的目的载体与中间载体pGWB505进行LR重组反应。构建成功后,利用农杆菌介导的遗传转化技术将目的基因转入菠萝愈伤组织,通过潮霉素筛选,获得菠萝过表达阳性植株。将转基因菠萝植株通过冷胁迫处理,通过表型观察发现,过表达AcWRKY38转基因菠萝植株增强了菠萝耐冷和抗逆性,有利于培育高产、优质、高抗性的优良菠萝品种。

    百香果病毒介导的基因沉默体系的构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN117230111A

    公开(公告)日:2023-12-15

    申请号:CN202311088561.7

    申请日:2023-08-28

    Abstract: 本发明公开了百香果病毒介导的基因沉默体系的构建方法及其应用,构建方法是:(1)提取百香果嫩叶的RNA,反转录获得cDNA;(2)选择百香果PePDS基因为干扰片段;(3)设计PePDS扩增的特异性上、下游引物,并进行cDNA片段PCR扩增,纯化后获得PePDS基因干扰片段;(4)将纯化的PePDS基因干扰片段通过重组反应同步连接到植物病毒pTRV2载体上,构建得到百香果PePDS基因沉默体系(pTRV1,pTRV2‑PePDS),命名为TRV‑PePDS。本发明构建的TRV‑PePDS可应用到农杆菌转化和百香果叶片浸染过程中,并表现出了明显的沉默效率。本发明能够快速高效获得转基因植株,稳定性强,操作简单。实现了快速降低目的基因表达水平的目的,达到敲除目的基因的效果,加快百香果功能基因组学的研究进程。

    菠萝转录因子AcWRKY31基因的克隆、表达载体构建及其在调控植物干旱中的应用

    公开(公告)号:CN117737117A

    公开(公告)日:2024-03-22

    申请号:CN202311785358.5

    申请日:2023-12-22

    Abstract: 本发明公开了菠萝转录因子AcWRKY31基因的克隆方法、表达载体及其在调控植物干旱中的应用,先提取金菠萝(下称MD2)叶片的RNA,反转录获得cDNA;再以cDNA为模板,通过特异性引物AcWRKY31‑F,AcWRKY31‑R进行PCR扩增获得AcWRKY31的全长基因序列。将AcWRKY31基因连接到pENTR载体上并进行转化,连接成功并测序无误后,将已连接到GATEWAY入门载体pENTR上的目的载体与中间载体pGWB605进行LR重组反应。构建成功后,将目的载体转入农杆菌GV3101中,利用农杆菌介导的遗传转化方法将目的基因导入菠萝愈伤组织,通过潮霉素筛选,CTAB法提取DNA进行PCR鉴定,获得菠萝转基因AcWRKY31的阳性菠萝植株。转基因菠萝植株在干旱胁迫下,过表达AcWRKY31增强了转基因菠萝对干旱胁迫的敏感性。说明AcWRKY31基因具有增强菠萝对干旱敏感性的作用。

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