菠萝转录因子AcWRKY31基因的克隆、表达载体构建及其在调控植物干旱中的应用

    公开(公告)号:CN117737117A

    公开(公告)日:2024-03-22

    申请号:CN202311785358.5

    申请日:2023-12-22

    Abstract: 本发明公开了菠萝转录因子AcWRKY31基因的克隆方法、表达载体及其在调控植物干旱中的应用,先提取金菠萝(下称MD2)叶片的RNA,反转录获得cDNA;再以cDNA为模板,通过特异性引物AcWRKY31‑F,AcWRKY31‑R进行PCR扩增获得AcWRKY31的全长基因序列。将AcWRKY31基因连接到pENTR载体上并进行转化,连接成功并测序无误后,将已连接到GATEWAY入门载体pENTR上的目的载体与中间载体pGWB605进行LR重组反应。构建成功后,将目的载体转入农杆菌GV3101中,利用农杆菌介导的遗传转化方法将目的基因导入菠萝愈伤组织,通过潮霉素筛选,CTAB法提取DNA进行PCR鉴定,获得菠萝转基因AcWRKY31的阳性菠萝植株。转基因菠萝植株在干旱胁迫下,过表达AcWRKY31增强了转基因菠萝对干旱胁迫的敏感性。说明AcWRKY31基因具有增强菠萝对干旱敏感性的作用。

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