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公开(公告)号：CN107641621A
公开(公告)日：2018-01-30
申请号：CN201710448315.6
申请日：2017-06-14
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及酶工程及生物医药技术领域，尤其涉及一种糖苷酶组合物及酶法制备淫羊藿苷元的方法。本发明筛选获得了一种能有效降解淫羊藿苷母核结构上鼠李糖残基的α-L-鼠李糖苷酶及能高效降解其母核结构中葡萄糖残基耐高温β-葡萄糖苷酶，随后通过双酶转化高效制备具有完全保持原有生物活性的淫羊藿苷元。本发明提供的组合物中，两种糖苷酶的最适反应温度都较高，底物溶解性较好，不需要助溶剂；并且酶解时间短，得率高。实验表明，采用本发明提供的糖苷酶组合物对淫羊藿苷进行酶解，摩尔转化率为98.3％，淫羊藿苷元的得率为90％。
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公开(公告)号：CN104328098A
公开(公告)日：2015-02-04
申请号：CN201410510836.6
申请日：2014-09-28
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
CPC classification number: C12N9/2445 , C12P33/005 , C12P33/20 , C12Y302/01021
Abstract: 本发明属于基因工程技术及生物医药领域，具体涉及一种β-葡萄糖苷酶及其制备方法与应用，尤其是应用于酶法转化制备人参皂苷20(S)-Rg3的应用。本发明所述β-葡萄糖苷酶能耐受高温，在70℃下保温3h酶活力几乎不变；本发明所述β-葡萄糖苷酶对人参皂苷Rb1的转化能力强，本发明所述β-葡萄糖苷酶与人参皂苷Rb1孵育60min，人参皂苷Rb1几乎完全转化为人参皂苷20(S)-Rg3；本发明所述制备人参皂苷20(S)-Rg3的方法酶促转化反应中间产物少，转化后产物人参皂苷20(S)-Rg3纯度高。
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公开(公告)号：CN105238826A
公开(公告)日：2016-01-13
申请号：CN201510812991.8
申请日：2015-11-20
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
IPC: C12P17/06
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，特别涉及β-葡萄糖苷酶的用途及用其制备黄芩素的方法。所述β-葡萄糖苷酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了酶水解黄芩苷的方法，将一种耐热耐糖β-葡萄糖苷酶固定化后在缓冲溶液中将黄芩苷水解，获得黄芩素。该酶具有很强的产物耐受性，无需在双相体系中就能将黄芩苷水解完全，避免了双相体系中的有机溶剂使酶活力下降。固定化酶可以多次利用。本发明得到纯度较高的黄芩素，纯度在95％以上。本发明所述的方法中乙酸乙酯萃取得到黄芩素后，可用有机溶剂重结晶，得到高纯度的黄芩素，纯度在98％以上。
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公开(公告)号：CN107641621B
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN201710448315.6
申请日：2017-06-14
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及酶工程及生物医药技术领域，尤其涉及一种糖苷酶组合物及酶法制备淫羊藿苷元的方法。本发明筛选获得了一种能有效降解淫羊藿苷母核结构上鼠李糖残基的α‑L‑鼠李糖苷酶及能高效降解其母核结构中葡萄糖残基耐高温β‑葡萄糖苷酶，随后通过双酶转化高效制备具有完全保持原有生物活性的淫羊藿苷元。本发明提供的组合物中，两种糖苷酶的最适反应温度都较高，底物溶解性较好，不需要助溶剂；并且酶解时间短，得率高。实验表明，采用本发明提供的糖苷酶组合物对淫羊藿苷进行酶解，摩尔转化率为98.3％，淫羊藿苷元的得率为90％。
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公开(公告)号：CN105238826B
公开(公告)日：2019-02-05
申请号：CN201510812991.8
申请日：2015-11-20
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
IPC: C12P17/06
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，特别涉及β‑葡萄糖苷酶的用途及用其制备黄芩素的方法。所述β‑葡萄糖苷酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还提供了酶水解黄芩苷的方法，将一种耐热耐糖β‑葡萄糖苷酶固定化后在缓冲溶液中将黄芩苷水解，获得黄芩素。该酶具有很强的产物耐受性，无需在双相体系中就能将黄芩苷水解完全，避免了双相体系中的有机溶剂使酶活力下降。固定化酶可以多次利用。本发明得到纯度较高的黄芩素，纯度在95％以上。本发明所述的方法中乙酸乙酯萃取得到黄芩素后，可用有机溶剂重结晶，得到高纯度的黄芩素，纯度在98％以上。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104328098B
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201410510836.6
申请日：2014-09-28
Applicant: 江苏康缘药业股份有限公司 , 南京林业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术及生物医药领域，具体涉及一种β‑葡萄糖苷酶及其制备方法与应用，尤其是应用于酶法转化制备人参皂苷20(S)‑Rg3的应用。本发明所述β‑葡萄糖苷酶能耐受高温，在70℃下保温3h酶活力几乎不变；本发明所述β‑葡萄糖苷酶对人参皂苷Rb1的转化能力强，本发明所述β‑葡萄糖苷酶与人参皂苷Rb1孵育60min，人参皂苷Rb1几乎完全转化为人参皂苷20(S)‑Rg3；本发明所述制备人参皂苷20(S)‑Rg3的方法酶促转化反应中间产物少，转化后产物人参皂苷20(S)‑Rg3纯度高。
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公开(公告)号：CN118240790B
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202410334541.1
申请日：2024-03-22
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶的氨基酸突变体及其应用，所述氨基酸突变体是将来源于黍Panicum hallii GT 1家族的糖基转移酶PhUGT氨基酸序列的第141位脯氨酸替换为甘氨酸获得；所述氨基酸突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过基因工程技术，对具有优良特性或具有一定转木糖基能力的葡萄糖基转移酶实施定向改造，通过单点突变法获得能高效转化芹菜素为芹菜素5‑O‑木糖苷的方法。本发明获得的新型氨基酸突变体专一性强，定向转化效率高，且创制了非天然的黄酮糖苷类化合物芹菜素5‑O‑木糖苷及其制备工艺。
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公开(公告)号：CN118308332A
公开(公告)日：2024-07-09
申请号：CN202410439131.3
申请日：2024-04-12
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组酶VthBga突变体及其应用。本发明对来源于火山鬃菌属嗜热菌(Vulcanisaeta thermophila)GH 1家族的β‑半乳糖苷酶进行了突变，筛选获得了优良的氨基酸突变体。所述氨基酸突变体含有2个突变位点，其中ALA266突变为G，PHE441突变为T。获得的新型β‑半乳糖苷酶能够特异性定向转化酪醇生成半乳糖型红景天苷，且转化率提高了约2.4倍。该生物转化反应酶最适反应温度高，有利于提高底物的溶解度，同时，能够在短时间内安全、高效地催化酪醇转化为半乳糖型红景天苷。本发明为高活性、高附加值的半乳糖型红景天苷的制备提供了独特高效的生物催化剂及其转化工艺。
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公开(公告)号：CN108384769B
公开(公告)日：2021-09-10
申请号：CN201810111588.6
申请日：2018-02-05
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 一种耐高温复合酶及其应用，由β‑葡萄糖苷酶与β‑木糖苷酶组成。本发明提供的复合酶专一性强，且能够完全转化黄芪甲苷，使得环黄芪醇的转化回收率提高。本发明整个工艺完成时间不超过3 h，大大缩短了环黄芪醇的制备工艺，提高了生产效率；且反应过程中不需要添加强还原剂、氧化剂及强酸等试剂，降低了环境污染；该两种酶均可以自制，生产成本大大降低，适宜于工业化生产。
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公开(公告)号：CN106318957B
公开(公告)日：2019-05-07
申请号：CN201610945270.9
申请日：2016-10-26
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 土曲霉CCF 3059 α‑L‑鼠李糖苷酶突变体及其应用，包括如SEQ ID NO:2所示的D594Q基因、SEQ ID NO:3所示的D594R基因、SEQ ID NO:4所示的D594C基因、SEQ ID NO:5所示的G827K基因、SEQ ID NO:6所示的G827M基因和SEQ ID NO:7所示的G828A基因。突变酶MRha‑D594Q最适温度和原酶MRha均为65℃；但与原酶MRha相比，突变酶MRha‑D594Q在70℃和75℃时仍保持较高的酶活性；添加山梨醇能够进一步提高突变酶MRha‑D594Q的热稳定性，在70℃的半衰期提高了7.8倍。
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