公开(公告)号：CN119464233A

公开(公告)日：2025-02-18

申请号：CN202411705263.2

申请日：2024-11-26

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 杜旭光 ,  李攀 ,  马昭 ,  于舒洋

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/62 ,  C12N9/06 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒复制缺陷型毒株及其制备方法和应用，属于非洲猪瘟病毒技术领域。非洲猪瘟病毒复制缺陷型毒株为在非洲猪瘟病毒的p54蛋白上融合大肠杆菌二氢叶酸还原酶，大肠杆菌二氢叶酸还原酶的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，非洲猪瘟病毒为ASFV CN/GS 2018毒株。将失稳结构域融合到p54蛋白上，获得非洲猪瘟病毒复制缺陷型毒株，利用小分子配体甲氧苄啶调控p54蛋白的降解，从而调控病毒的复制、增殖，该毒株在降低病毒毒力、增强疫苗安全性、促进疫苗研发等方面具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN118956961A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411428497.7

申请日：2024-10-14

Applicant: 中国农业大学三亚研究院

Inventor： 吴森 ,  杜旭光 ,  段小月 ,  郭亮 ,  杜唱 ,  侯乃鹏 ,  陈超磊

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种用于分离多基因纯合编辑细胞的报告质粒和筛选方法。报告质粒包括目标区域靶位点插入序列和携带荧光蛋白的报告基因的质粒骨架；目标区域靶位点插入序列在报告基因的起始密码子后插入；目标区域靶位点插入序列包括：需同时编辑的所有基因或所有目标区域靶位点序列中打靶效率最低的目标区域靶位点序列，以及目标区域靶位点插入序列的序列长度为非3的倍数、且不含起始密码子和终止密码子。筛选方法的步骤包括：将基因编辑质粒以及报告质粒共转染入目的细胞；转染后，分选出阳性细胞群，得到同时编辑的多基因纯合编辑细胞。本发明的目的是解决现有技术无法从目的细胞中有效分离出多基因编辑细胞问题。

公开(公告)号：CN115806978A

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202111076501.4

申请日：2021-09-14

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  张丽君 ,  郭紫航 ,  秦毓敏 ,  杜旭光

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  C12N15/08 ,  C12N13/00

Abstract: 本发明提供一种异源染色体定向转移的方法，通过向抗药性基因中人为添加包含loxP序列的功能性内含子，并将其拆分为带有包含loxP序列的重叠区域的两部分，拆分后的两部分抗药性基因分别插入供体物种及受体物种的目标染色体中(两部分抗药性基因在Cre重组酶的作用下发生Cre/loxP位点特异性重组，并回复抗药功能)，并借助异种细胞融合方法实现异源染色体定向转移。本方法可广泛应用于基因功能研究、人类疾病模型构建、治疗性抗体开发及药理药效测试等方面。

公开(公告)号：CN109112160B

公开(公告)日：2021-08-31

申请号：CN201810981815.0

申请日：2018-08-27

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  赵要风 ,  杜旭光 ,  余大为 ,  王靖 ,  邹惠影 ,  冯涛

IPC: C12N15/87 ,  C12N5/10 ,  C12N5/16 ,  C12N15/00

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体公开了一种提高哺乳动物克隆胚胎受体妊娠率的方法。本发明利用诱导性多能干细胞(iPS细胞)作为供体细胞，通过对RTL1进行剂量补偿表达之后，显著提高了克隆胚胎的妊娠率。

公开(公告)号：CN110402305A

公开(公告)日：2019-11-01

申请号：CN201680091302.1

申请日：2016-11-30

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  胥春龙 ,  齐晓兰 ,  杜旭光 ,  邹慧影

IPC: C40B40/08 ,  C12N15/10 ,  C12N15/85

Abstract: 提供了包含多个PB介导的CRISPR系统多核苷酸的基因组文库，其包含侧翼为最小的piggybac反向重复元件的最小向导RNA。还提供了使用所述多核苷酸文库进行体内基因组规模筛选的方法。

公开(公告)号：CN119372234A

公开(公告)日：2025-01-28

申请号：CN202411503005.6

申请日：2024-10-25

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  李攀 ,  杜旭光 ,  董鼎才 ,  高菲 ,  谢宇洋 ,  黄泓林 ,  孙思维 ,  马昭 ,  何诚 ,  赖锦盛

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N1/21 ,  C12N15/12 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于脱硫弧菌I‑C型CRISPR基因编辑系统及其应用，属于基因编辑技术领域。上述基因编辑系统包括CRISPR RNA(crRNA)piggyBac(PB)载体、I‑C型编辑器piggyBac载体以及piggyBac(PB)转座酶表达载体；I‑C型编辑器piggyBac载体包括两端的PB接头序列、Cascade组件、Cas3蛋白及Puro抗性基因，所述Cascade组件由Cas5c蛋白、Cas7c蛋白、Cas8c蛋白和Cas11c蛋白复合而成，通过不同的2A肽连接，受同一CMV启动子调控。本发明所得基因编辑系统在哺乳动物细胞和动物中能够进行精确高效基因组编辑和碱基编辑，利用优化的该编辑器和成对的PAM内向crRNAs，在人类和猪细胞系的多个内源位点实现了定义性的缺失，此外，结合外源同源臂供体载体，也可以实现大的基因片段的精确替换。

公开(公告)号：CN119351469A

公开(公告)日：2025-01-24

申请号：CN202411919108.0

申请日：2024-12-25

Applicant: 中国农业大学三亚研究院 ,  中国热带农业科学院三亚研究院

Inventor： 张立兰 ,  吴森 ,  杜旭光 ,  高菲 ,  余卓营 ,  侯乃鹏 ,  王晓哲

IPC: C12N15/85 ,  A61K31/7105 ,  A61P3/04 ,  A61P25/28 ,  A61P9/10 ,  A61P11/00 ,  A61P19/02 ,  A61P3/10 ,  A61P25/14 ,  A61P25/16 ,  A23K20/153 ,  A23K20/147 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种抑制KCNK3基因的物质及其在调控脂肪代谢或铁死亡中的应用。本发明利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除和过表达细胞系，发现KCNK3敲除抑制猪前脂肪细胞的脂质合成与积累、促进脂肪水解产热。进一步利用转录组和脂质组联合分析的技术，对KCNK3基因敲除细胞进行了分析，发现KCNK3调控脂肪代谢和铁死亡生物学过程。通过检测KCNK3敲除PK15细胞内铁含量、ROS水平、谷胱甘肽水平，线粒体形态特征等，证明了KCNK3敲除促进铁死亡。本发明首次发现KCNK3基因在促进猪脂肪形成、抑制铁死亡中的作用，该发现对于利用KCNK3基因对猪进行脂肪沉积调控以及人类肥胖和铁死亡相关疾病的治疗具有重要意义。

公开(公告)号：CN114908097B

公开(公告)日：2023-01-13

申请号：CN202210693445.7

申请日：2022-06-17

Applicant: 中国农业大学(CN)

Inventor： 于坤 ,  邓守龙 ,  许雪玲 ,  杜旭光 ,  李攀 ,  卢天宇

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种将40种整合条形码片段与强力霉素(Doxycycline，Dox)调控CRISPR/Cas9编辑产生的indels相结合用于研究哺乳动物细胞在发育、再生和器官形成过程的谱系示踪研究方法。

公开(公告)号：CN111004816A

公开(公告)日：2020-04-14

申请号：CN201911194844.3

申请日：2019-11-28

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  杜旭光 ,  李攀 ,  张丽君 ,  李智方 ,  胥春龙

IPC: C12N15/79 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明提供一种基于Cas12a技术的外源基因定点敲入方法。利用Cas12a设计一种依赖微同源臂的外源基因精确定点整合的方法(简称MITI)，该方法通过简单的PCR或T4连接反应即可将识别序列插入到供体载体中，其中Cas12a在供体载体中的识别序列的方向与基因组中的靶点的方向是相反的，但远离PAM端的Cas12a识别切割的5个碱基与基因组靶位点的最后5个碱基是相同的，因此可以利用内外源DNA产生的互补粘性末端实现无缝连接。在将外源基因整合到基因组中的特定位点以及在对内源基因进行标记时，相较已有的Cas9HITI策略，MITI可以产生更高的精准插入效率，其有望成为精准基因插入的新工具。

公开(公告)号：CN120060241A

公开(公告)日：2025-05-30

申请号：CN202510270599.9

申请日：2025-03-07

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 杜旭光 ,  吴森 ,  何志勇 ,  谢宇洋

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/55 ,  C12N15/56

Abstract: 本发明公开了一种同时实现嘌呤和嘧啶替换的碱基编辑器ACGBEmax，涉及基因编辑技术领域，该碱基编辑器ACGBEmax从N端到C端依次包括HMCES蛋白、双功能脱氨酶TadDual、nCas9(D10A)蛋白和工程化的N‑甲基嘌呤DNA糖基化酶eMPG。该碱基编辑器能够同时实现嘌呤和嘧啶替换，显著增加了靶向编辑后突变体的多样性，并具有编辑效率高和Indels率较低的优点，在体内外蛋白突变筛选和致癌氨基酸突变鉴定等方面有较大的应用价值。