公开(公告)号：CN109355221A

公开(公告)日：2019-02-19

申请号：CN201811313599.9

申请日：2018-11-06

Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院

Inventor： 程立坤 ,  何诚 ,  李小慧 ,  曲光刚 ,  林初文 ,  沈志强

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/63

Abstract: 本发明提供了一种用于高密度发酵制备霍乱弧菌菌影的培养基及方法。其培养基组分包括：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、柠檬酸、KCl、MgSO4·7H2O、(NH4)2SO4、甜菜碱、VB1、VH、氨苄霉素和氯化胆碱，其pH值为7.30～7.50。其方法是在培养过程中，加入国产阿拉伯糖进行诱导；诱导阶段，以一定的补加速率补加一定营养物质与抗生素进行诱导，菌影形成率达到99％以上。本发明可以实现大量生产霍乱弧菌菌影，能满足大规模生产霍乱弧菌菌影佐剂的需求。

公开(公告)号：CN112877246B

公开(公告)日：2022-01-18

申请号：CN202110200360.6

申请日：2021-02-23

Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 ,  山东绿都生物科技有限公司

Inventor： 程立坤 ,  赵修报 ,  沈志强 ,  赵群 ,  张莎莎 ,  林初文 ,  何诚 ,  姜忠兴 ,  付强 ,  李增亮

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/38 ,  C12R1/63

Abstract: 本发明提供了一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法，包括：在霍乱弧菌工程菌的培养过程中加入阿拉伯糖进行诱导，诱导培养1～3h后，再次加入阿拉伯糖进行二次诱导：在诱导阶段，当检测到溶氧值突然下降时，添加卡那霉素，继续培养0.5～1.5h后活菌数目为0；诱导培养4～6h后，菌影形成率达到99％以上。本发明利用二次诱导策略，缩短诱导时间，收获菌影量提高了16％以上，且内毒素含量降低至初始工艺的1/5以下，显著提高了生产效率，降低生产成本；本发明制备的霍乱弧菌菌影形态均匀、完整，活菌数目为0，无需再进行灭活处理，安全性更高。

公开(公告)号：CN112877246A

公开(公告)日：2021-06-01

申请号：CN202110200360.6

申请日：2021-02-23

Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 ,  山东绿都生物科技有限公司

Inventor： 程立坤 ,  赵修报 ,  沈志强 ,  赵群 ,  张莎莎 ,  林初文 ,  何诚 ,  姜忠兴 ,  付强 ,  李增亮

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/38 ,  C12R1/63

Abstract: 本发明提供了一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法，包括：在霍乱弧菌工程菌的培养过程中加入阿拉伯糖进行诱导，诱导培养1～3h后，再次加入阿拉伯糖进行二次诱导：在诱导阶段，当检测到溶氧值突然下降时，添加卡那霉素，继续培养0.5～1.5h后活菌数目为0；诱导培养4～6h后，菌影形成率达到99％以上。本发明利用二次诱导策略，缩短诱导时间，收获菌影量提高了16％以上，且内毒素含量降低至初始工艺的1/5以下，显著提高了生产效率，降低生产成本；本发明制备的霍乱弧菌菌影形态均匀、完整，活菌数目为0，无需再进行灭活处理，安全性更高。

公开(公告)号：CN109355221B

公开(公告)日：2020-09-08

申请号：CN201811313599.9

申请日：2018-11-06

Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 ,  山东绿都生物科技有限公司

Inventor： 程立坤 ,  何诚 ,  李小慧 ,  曲光刚 ,  林初文 ,  沈志强

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/63

Abstract: 本发明提供了一种用于高密度发酵制备霍乱弧菌菌影的培养基及方法。其培养基组分包括：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、柠檬酸、KCl、MgSO4·7H2O、(NH4)2SO4、甜菜碱、VB1、VH、氨苄霉素和氯化胆碱，其pH值为7.30～7.50。其方法是在培养过程中，加入国产阿拉伯糖进行诱导；诱导阶段，以一定的补加速率补加一定营养物质与抗生素进行诱导，菌影形成率达到99％以上。本发明可以实现大量生产霍乱弧菌菌影，能满足大规模生产霍乱弧菌菌影佐剂的需求。

公开(公告)号：CN109337995B

公开(公告)日：2022-05-06

申请号：CN201811279119.1

申请日：2018-10-30

Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 ,  中国农业大学

Inventor： 李书光 ,  何诚 ,  沈志强 ,  曲光刚 ,  杨丽芳 ,  张娜 ,  赵家磊

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明提供土拉杆菌及其亚种的PCR检测方法和试剂盒。所述试剂盒中至少含有检测土拉杆菌的通用引物(SEQ ID NO：1‑2)以及检测土拉杆菌亚种F.m、F.n、F.tu和F.h的特异性PCR引物(SEQ ID NO：3‑10)。本发明的PCR检测方法能够快速确定土拉杆菌，并对土拉杆菌进行亚种的确定，可直接对病料检测，避免了常规的细菌分离、培养和生化鉴定的复杂过程，缩短了检测时间，且操作方便，简单培训即能熟练使用，同时避免了操作人员直接接触病原，提高了检验过程的安全性。本方法敏感性高、特异性强，能将土拉杆菌亚种与其他亚种区分开来，且无任何交叉反应。本发明为基层分析单位检测提供有力的技术支持。

公开(公告)号：CN109337995A

公开(公告)日：2019-02-15

申请号：CN201811279119.1

申请日：2018-10-30

Applicant: 山东省滨州畜牧兽医研究院 ,  中国农业大学

Inventor： 李书光 ,  何诚 ,  沈志强 ,  曲光刚 ,  杨丽芳 ,  张娜 ,  赵家磊

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明提供土拉杆菌及其亚种的PCR检测方法和试剂盒。所述试剂盒中至少含有检测土拉杆菌的通用引物(SEQ ID NO：1-2)以及检测土拉杆菌亚种F.m、F.n、F.tu和F.h的特异性PCR引物(SEQ ID NO：3-10)。本发明的PCR检测方法能够快速确定土拉杆菌，并对土拉杆菌进行亚种的确定，可直接对病料检测，避免了常规的细菌分离、培养和生化鉴定的复杂过程，缩短了检测时间，且操作方便，简单培训即能熟练使用，同时避免了操作人员直接接触病原，提高了检验过程的安全性。本方法敏感性高、特异性强，能将土拉杆菌亚种与其他亚种区分开来，且无任何交叉反应。本发明为基层分析单位检测提供有力的技术支持。