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公开(公告)号：CN102051350A
公开(公告)日：2011-05-11
申请号：CN200910198068.4
申请日：2009-10-30
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N9/42 , C12N15/56 , C12N15/63 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12N1/15 , C12N5/10 , A23K1/165 , C12P7/10 , C12P19/14 , C12R1/19 , C12R1/865 , C12R1/84 , C12R1/125
CPC classification number: Y02E50/16
Abstract: 本发明属生物工程领域，提供了一种新型具有耐低温，并且有β-D-木苷酶活性和α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性的双功能酶RuXyn1。RuXyn1的氨基酸编码序列如SEQ ID No 2所示，其核苷酸编码序列如SEQ ID No 1所示。RuXyn1可以采用基因工程方法或者人工合成方法制备。RuXyn1不仅有阿拉伯糖苷酶和木糖苷酶的功能，而且能够在低温的环境下保持较高的活性，可用于纤维素生物转化、化工、纺织、食品、生物能源、饲料添加、医药工业方面等应用领域。
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公开(公告)号：CN101475915A
公开(公告)日：2009-07-08
申请号：CN200910045394.1
申请日：2009-01-15
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将碱性甘露聚糖酶基因的突变体MAN330克隆到分泌表达载体pUKDS上，并转化鹰嘴豆胞克鲁维酵母Y179U，形成分泌表达碱性甘露聚糖酶的鹰嘴豆胞克鲁维酵母基因工程菌株。该酵母基因工程菌株在80世代内保持稳定。发酵时，取上述酵母基因工程菌株在常温常压下发酵，然后去除菌体即可。用本发明提供的方法制备获得的碱性甘露聚糖酶，活性可达1000U/ml以上，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至工业化生产。
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公开(公告)号：CN1059236C
公开(公告)日：2000-12-06
申请号：CN97106403.2
申请日：1997-04-24
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明涉及一种新的脆壁克鲁维酵母基因-26SrRNA基因片断序列；利用该序列构建的重组多核苷酸载体；可被该载体转化的脆壁克鲁维酵母受体菌株以及脆壁克鲁维酵母完整细胞的高效转化方法。以上内容构成脆壁克鲁维酵母的高效转化系统，它可以利用缺陷基因功能补偿作为转化子筛选的手段，因而具有操作简便、费用低廉、转化率高的优点。作为本发明的例子是用于在脆壁克鲁维酵母的典型菌株或其ura3-突变菌株中高效获得稳定的抗氨基葡糖苷G418或尿嘧啶合成基因功能补偿的转化菌株。
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公开(公告)号：CN101781670B
公开(公告)日：2012-09-05
申请号：CN200910045395.6
申请日：2009-01-15
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域，是利用含有外源蛋白编码序列的鹰嘴豆孢克鲁维酵母基因工程菌高效制备外源蛋白的发酵工艺。发酵时，取上述基因工程菌株发酵2-6天，然后去除菌体，即得；发酵液初始菌浓度OD值为0.4-0.6，在发酵过程中维持葡萄糖浓度为0.5-1％；在发酵过程的12h-18h连续补加12％酵母粉，补加酵母粉的总量为发酵体积的3-5％(质量体积比)；发酵过程中调节发酵液pH值为5.0-5.5。用本发明方法可以大规模制备外源蛋白，蛋白活性高，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至大规模工业化生产。
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公开(公告)号：CN101475915B
公开(公告)日：2011-06-08
申请号：CN200910045394.1
申请日：2009-01-15
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将碱性甘露聚糖酶基因的突变体MAN330克隆到分泌表达载体pUKDS上，并转化鹰嘴豆胞克鲁维酵母Y179U，形成分泌表达碱性甘露聚糖酶的鹰嘴豆胞克鲁维酵母基因工程菌株。该酵母基因工程菌株在80世代内保持稳定。发酵时，取上述酵母基因工程菌株在常温常压下发酵，然后去除菌体即可。用本发明提供的方法制备获得的碱性甘露聚糖酶，活性可达1000U/ml以上，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至工业化生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102041252A
公开(公告)日：2011-05-04
申请号：CN200910197704.1
申请日：2009-10-26
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N9/46 , C12N15/56 , C12N15/63 , C12P19/16 , C12R1/645 , C12R1/01 , C12R1/685 , C12R1/125 , C12R1/84 , C12R1/865 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物工程领域，涉及一种新型内切葡聚糖酶RuCelB、其编码基因、制备方法与应用。RuCelB含有SEQ ID NO.2的第25-336位的氨基酸残基序列。通过对牦牛瘤胃微生物宏基因组cosmid文库的活性筛选，获得能够水解羧甲基纤维素钠的阳性克隆，进一步通过构建亚克隆、测序、同源比对的方法获得RuCelB的全长cds序列；重组表达获得RuCelB。RuCelB以羧甲基纤维素钠为底物的比活高达158.8U/mg，对滤纸、纤维三糖等底物也具有降解能力。本发明的RuCelB可广泛应用于纤维素的降解，包括纤维素生物转化、化工、纺织、食品、生物能源、饲料添加、医药工业方面应用等领域。
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公开(公告)号：CN102041252B
公开(公告)日：2015-12-02
申请号：CN200910197704.1
申请日：2009-10-26
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N9/46 , C12N15/56 , C12N15/63 , C12P19/16 , C12R1/645 , C12R1/01 , C12R1/685 , C12R1/125 , C12R1/84 , C12R1/865 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物工程领域，涉及一种新型内切葡聚糖酶RuCelB、其编码基因、制备方法与应用。RuCelB含有SEQ ID NO.2的第25-336位的氨基酸残基序列。通过对牦牛瘤胃微生物宏基因组cosmid文库的活性筛选，获得能够水解羧甲基纤维素钠的阳性克隆，进一步通过构建亚克隆、测序、同源比对的方法获得RuCelB的全长cds序列；重组表达获得RuCelB。RuCelB以羧甲基纤维素钠为底物的比活高达158.8U/mg，对滤纸、纤维三糖等底物也具有降解能力。本发明的RuCelB可广泛应用于纤维素的降解，包括纤维素生物转化、化工、纺织、食品、生物能源、饲料添加、医药工业方面应用等领域。
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公开(公告)号：CN105063080A
公开(公告)日：2015-11-18
申请号：CN201510562496.6
申请日：2015-09-07
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明提供了一种不含有信号肽的在马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株中进行外源基因表达的重组载体、及其制备方法和应用，所述重组载体按照顺序包括氨苄抗性基因、PKD1载体、菊粉酶启动子、多克隆位点、菊粉酶终止子、营养基因启动子、营养基因开放阅读框。本发明构建的不含信号肽的重组载体、及其制备方法，可用于构建转化子，来实现外源基因的表达。
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公开(公告)号：CN102041251A
公开(公告)日：2011-05-04
申请号：CN200910197703.7
申请日：2009-10-26
Applicant: 复旦大学 , 武汉新华扬生物股份有限公司
IPC: C12N9/42 , C12N15/56 , C12N15/63 , C12P19/14 , C12R1/645 , C12R1/01 , C12R1/685 , C12R1/125 , C12R1/84 , C12R1/865 , C12R1/19
Abstract: 本发明属生物工程领域，涉及一种新型β葡萄糖苷酶/木糖苷酶双功能纤维素降解酶RuBGX2及其编码基因与应用。RuBGX2的氨基酸编码序列包含SEQ ID NO 2序列第18-755位。RuBGX2来源于中国牦牛瘤胃微生物，通过对瘤胃宏基因组cosmid文库和亚克隆文库的功能筛选、测序分析获得编码一种新型β葡萄糖苷酶/木糖苷酶双功能纤维素降解酶RuBGX2的新基因。本发明的β葡萄糖苷酶/木糖苷酶双功能酶可广泛应用于纤维素的降解，包括纤维素生物转化、化工、纺织、食品、生物能源、饲料添加、医药工业方面应用等领域。利用本发明的RuBGX2双功能酶降解木质纤维，能够减少添加酶的种类，简化酶解工艺。
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公开(公告)号：CN101063089A
公开(公告)日：2007-10-31
申请号：CN200710040392.4
申请日：2007-04-30
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将菊粉外切酶基因克隆到真核表达载体pUKDS上，并转化鹰嘴豆克鲁维酵母Y179U，形成表达菊粉外切酶的克鲁维酵母基因工程菌株。发酵时，取上述基因工程菌株在常温常压下发酵2－8天，然后去除菌体，即得；发酵液初始菌浓度为OD600＝0.2－1.6；发酵液pH值为5.5－8.0；发酵液中含有0.5－2％的酵母粉和浓度不低于2％的碳源。用本发明的方法生产的菊粉外切酶，活性可达2500u/ml以上，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至大规模工业化生产。
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