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公开(公告)号：CN120005743A
公开(公告)日：2025-05-16
申请号：CN202510108053.3
申请日：2025-01-23
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种用于多基因便捷整合表达的马克斯克鲁维酵母菌株及其应用。本发明提供的马克斯克鲁维酵母菌株，是通过将环化并装载了马克斯克鲁维酵母着丝粒及自主复制序列的酿酒酵母I号染色体，移植到马克斯克鲁维酵母FIM‑1中，并删除马克斯克鲁维酵母3个必需基因后构建所得。该马克斯克鲁维酵母菌株中，酿酒酵母环形染色体上的基因全部活跃转录，各个表达框的基因均能正常表达，并且该环形染色体在马克斯克鲁维酵母FIM‑1稳定遗传；可作为外源基因的储存库，应用于多基因、整条通路及途径基因的稳定装载与表达。
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公开(公告)号：CN118931747A
公开(公告)日：2024-11-12
申请号：CN202410896745.4
申请日：2024-07-05
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N1/19 , C12N9/92 , C12N9/04 , C12N9/02 , C12N9/16 , C12N9/90 , C12N15/53 , C12N15/55 , C12N15/61 , C12N15/31 , C12N15/81 , C07K14/39 , C12P7/18 , C12R1/645
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种高效合成肌醇的马克斯克鲁维酵母工程菌及其应用。本发明的高效合成肌醇的马克斯克鲁维酵母工程菌，是在马克斯克鲁维酵母FIM1Δura3菌株中依次敲除葡萄糖‑6‑磷酸异构酶PGI基因、葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶ZWF1基因、肌醇加氧酶MIOX5基因以及肌醇转运蛋白ITR2基因，然后转入共表达布氏锥虫肌醇磷酸合酶TbIPS基因和大肠杆菌肌醇单磷酸酶EcIMP基因的载体pUKDN115‑Pinu‑EcIMP‑Ttef‑Ptef‑TbIPS‑Tinu所获得。本发明还公开高效制备肌醇的方法，即以所述马克斯克鲁维酵母工程菌株为发酵菌株，以葡萄糖、甘油、酵母提取物、蛋白胨等成分为培养基，经培养发酵产生肌醇，上清中肌醇产量可达到80.65g/L。
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公开(公告)号：CN117264791B
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202310264215.3
申请日：2023-03-19
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/81 , C12N9/88 , C07K14/08 , C07K14/01 , C12N9/18 , C07K14/47 , C07K14/805 , C12N9/34 , C12R1/645
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种高效重组表达外源蛋白的马克斯克鲁维酵母工程菌株及其应用。本发明提供的马克斯克鲁维酵母工程菌株，是以马克斯克鲁维酵母FIM1作为出发菌株，在FIM1的染色体上添加16个loxPsym位点，通过Cre重组酶处理，然后在46℃高温压力下进行筛选获得突变菌株，记为FDHY23；该突变菌株至少携带腺苷酸环化酶基因的突变。该突变菌株FDHY23可重组表达不同外源蛋白，表达水平提高了1.6～5.5倍，在高温下依然具有表达外源蛋白的能力。
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公开(公告)号：CN117070381A
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202310832671.3
申请日：2023-07-08
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物质资源利用技术领域，具体为一种利用豆粕固态发酵马克斯克鲁维酵母的方法及应用。本发明方法包括：豆粕原料料的蛋白酶水解处理，高温灭菌熟化以及α‑半乳糖苷酶和植酸酶处理，接入马克斯克鲁维酵母发酵菌种，恒温发酵，得到的马克斯克鲁维酵母活菌数高。经马克斯克鲁维酵母固态发酵后的豆粕抗原蛋白含量低，大豆球蛋白去除率≥99.9％、β‑伴大豆球蛋白去除率≥99.9％，胰蛋白酶抑制因子去除率均>95％，豆粕粗蛋白含量也提高了8.5％，适口性和营养水平显著提高，可作为一种高蛋白饲料添加剂或饲料原料，应用于畜牧和水产养殖业。本发明还提供豆粕固态发酵马克斯克鲁维酵母工程菌生产重组蛋白的方法，重组蛋白产量达16857U/g豆粕。
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公开(公告)号：CN116987604A
公开(公告)日：2023-11-03
申请号：CN202310482013.6
申请日：2023-04-28
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体为一种高效表达糖化酶的马克斯克鲁维酵母重组工程菌株及其应用。本发明提供的马克斯克鲁维酵母工程菌株，是通过将序列优化后的食腺嘌呤芽生葡萄孢酵母糖化酶基因克隆到表达载体上，并转化由酵母人工染色体介导的二硫键异构途径重构的马克斯克鲁维酵母宿主菌株构建所得。本发明还提供马克斯克鲁维酵母的人工染色体，用于介导毕赤酵母或马克斯克鲁维酵母二硫键异构途径在马克斯克鲁维酵母中重构。本发明提供的重组表达糖化酶的马克斯克鲁维酵母工程菌株，高密度发酵72小时糖化酶表达水平达到8345.7U/mL，蛋白产量16.8g/L。本发明提供的马克斯克鲁维酵母重组工程菌株，可应用于食品加工、酿造、生物医药等领域糖化酶的高效制备。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116949086A
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202310486754.1
申请日：2023-04-28
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/81 , C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/53 , C12N15/61 , C12N15/31 , C12N15/52 , C12N1/19 , C12R1/645
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为利用马克斯克鲁维酵母重组表达血红蛋白的方法。本发明采用合成生物学的技术，通过优化马克斯克鲁维酵母合成血红素的合成途径，包括优化血红素前体物5‑氨基乙酰丙酸(5‑ALA)合成途径，优化血红素的下游合成途径基因，敲除马克斯克鲁维酵母血红素降解与蛋白质降解途径的基因，提升大豆血红蛋白在马克斯克鲁维酵母中的表达量；在此基础上，利用基因组编辑技术，敲除马克斯克鲁维酵母血红素与蛋白降解途径的关键基因LSC1和SSN3，进一步提高血红素及血红蛋白的产量。本发明还进行了大豆血红蛋白密码子优化与重组菌株发酵条件优化，实现了大豆血红蛋白高效重组表达，产量达到7.27g/L。
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公开(公告)号：CN108611327B
公开(公告)日：2022-03-18
申请号：CN201810712312.3
申请日：2018-07-03
Applicant: 复旦大学
Abstract: 为解决猪圆环病毒2型病毒样颗粒的分离纯化中的步骤复杂、工艺繁琐、生产成本高、纯化效率低等问题，本发明提供了一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的分离纯化方法，包括如下步骤：步骤S1，收集重组酵母细胞并进行破碎，获得含猪圆环病毒2型病毒样颗粒的细胞裂解液；步骤S2，对细胞裂解液进行澄清获得病毒样颗粒初提液；步骤S3，对病毒样颗粒初提液进行离子交换层析获得病毒样颗粒粗纯液；步骤S4，对病毒样颗粒粗纯液进行超滤浓缩获得病毒样颗粒浓缩液；步骤S5，对病毒样颗粒浓缩液进行凝胶过滤层析纯化，获得纯化后的病毒样颗粒，其中，步骤S3的离子交换层析中，吸附过程及洗脱过程中所采用的缓冲液均含有预定浓度的表面活性剂。
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公开(公告)号：CN108410870B
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN201810153537.X
申请日：2018-02-22
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明公开了一种优化的马克斯克鲁维酵母启动子，其至少包括：a)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或b)如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或c)如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。还公开了一种优化的马克斯克鲁维酵母分泌信号肽，其至少包括如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列，以及一种优化的组合体，其至少包括如SEQ ID No.6所示的核苷酸序列。本发明还公开了含有上述马克斯克鲁维酵母启动子和/或分泌信号肽的重组表达载体、基因工程菌及其制备方法与应用。本技术方案可显著提升马克斯克鲁维酵母高效重组表达外源蛋白的能力，为推动马克斯克鲁维酵母表达系统在工业蛋白制造领域的应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106399350B
公开(公告)日：2020-02-21
申请号：CN201610806538.0
申请日：2016-09-07
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/81 , C12N1/19 , C12N7/04 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种猪圆环病毒II型衣壳蛋白重组表达的马克斯克鲁维酵母工程菌，将猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因克隆到表达载体中，并在马克斯克鲁维酵母中重组表达获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒。本发明还提供了一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗的制备方法，通过重组马克斯克鲁维酵母的高密度发酵，获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒，经分离纯化制备疫苗。本发明提供的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗，注射免疫一次即可获得高水平血清IgG抗体，具有免疫效果好、安全性高、培养操作简单，产量高、生产成本低以及可大规模放大生产等优点，可应用于减少、预防感染猪圆环病毒PCV2所引起相关性临床症状。
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公开(公告)号：CN108486105A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810153542.0
申请日：2018-02-22
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明公开了一种马克斯克鲁维酵母启动子，其包含菊粉酶基因起始密码子上游1136bp的序列，去除了N端的poly-A序列，并且包含潜在的Zn(II)2Cys6转录因子的结合位点。该启动子至少包括以下核苷酸序列：1)如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；或2)如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸，具有菊粉酶基因启动子活性的衍生核苷酸序列。本发明还公开了含有该启动子的重组表达载体、含有该启动子或重组表达载体的基因工程菌及其应用与制备方法。利用本发明构建的重组载体可以获得阿魏酸酯酶外源蛋白的表达，其表达的活性超过了目前已报道的其他长度的菊粉酶基因启动子。
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