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公开(公告)号：CN101781670B
公开(公告)日：2012-09-05
申请号：CN200910045395.6
申请日：2009-01-15
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域，是利用含有外源蛋白编码序列的鹰嘴豆孢克鲁维酵母基因工程菌高效制备外源蛋白的发酵工艺。发酵时，取上述基因工程菌株发酵2-6天，然后去除菌体，即得；发酵液初始菌浓度OD值为0.4-0.6，在发酵过程中维持葡萄糖浓度为0.5-1％；在发酵过程的12h-18h连续补加12％酵母粉，补加酵母粉的总量为发酵体积的3-5％(质量体积比)；发酵过程中调节发酵液pH值为5.0-5.5。用本发明方法可以大规模制备外源蛋白，蛋白活性高，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至大规模工业化生产。
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公开(公告)号：CN101948865B
公开(公告)日：2012-11-14
申请号：CN201010255590.4
申请日：2010-08-17
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/75
CPC classification number: Y02A50/473
Abstract: 本发明属于生物基因工程领域，提供了一种双启动子可诱导可分泌型穿梭质粒，由一个酶切的大肠杆菌pET-28a质粒和一个酶切的枯草杆菌pE194质粒构成，所述的酶切的大肠杆菌pET-28a质粒上插入有溶菌酶-抗菌肽功能片段和抗菌肽基因，本发明还提供了一种双启动子可诱导可分泌型穿梭质粒的构建方法，该穿梭质粒转入原核生物以融合方式表达毒蛋白、杀菌肽等蛋白对宿主不表现毒杀作用，本发明构建的穿梭质粒可以经IPTG或者乳糖诱导，以提高基因表达水平；也适合于外分泌表达，外分泌表达的目的蛋白处理方便又没有内毒素污染，由于具有双功能启动子，不同基因都可在合适的正确方向插入基因进行表达。
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公开(公告)号：CN101948865A
公开(公告)日：2011-01-19
申请号：CN201010255590.4
申请日：2010-08-17
Applicant: 复旦大学
CPC classification number: Y02A50/473
Abstract: 本发明属于生物基因工程领域，提供了一种双启动子可诱导可分泌型穿梭质粒，由一个酶切的大肠杆菌pET-28a质粒和一个酶切的枯草杆菌pE194质粒构成，所述的酶切的大肠杆菌pET-28a质粒上插入有溶菌酶-抗菌肽功能片段和抗菌肽基因，本发明还提供了一种双启动子可诱导可分泌型穿梭质粒的构建方法，该穿梭质粒转入原核生物以融合方式表达毒蛋白、杀菌肽等蛋白对宿主不表现毒杀作用，本发明构建的穿梭质粒可以经IPTG或者乳糖诱导，以提高基因表达水平；也适合于外分泌表达，外分泌表达的目的蛋白处理方便又没有内毒素污染，由于具有双功能启动子，不同基因都可在合适的正确方向插入基因进行表达。
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公开(公告)号：CN101781670A
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN200910045395.6
申请日：2009-01-15
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域，是利用含有外源蛋白编码序列的鹰嘴豆孢克鲁维酵母基因工程菌高效制备外源蛋白的发酵工艺。发酵时，取上述基因工程菌株发酵2-6天，然后去除菌体，即得；发酵液初始菌浓度OD值为0.4-0.6，在发酵过程中维持葡萄糖浓度为0.5-1％；在发酵过程的12h-18h连续补加12％酵母粉，补加酵母粉的总量为发酵体积的3-5％(质量体积比)；发酵过程中调节发酵液pH值为5.0-5.5。用本发明方法可以大规模制备外源蛋白，蛋白活性高，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至大规模工业化生产。
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