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公开(公告)号：CN111647577A
公开(公告)日：2020-09-11
申请号：CN202010442787.2
申请日：2020-05-22
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明涉及来源于人体的DEAD-box RNA解旋酶DDX21的晶体结构和应用。所述RNA解旋酶DDX21包括野生型全长DDX21和DDX21解旋酶核心区域，均可结合三磷酸腺苷(ATP)和有效解旋双链RNA。DDX21解旋酶核心区域的晶体结构共有四套，RNA解旋的初始状态(DDX21-apo，分辨率，空间群为C2)，结合三磷酸腺苷(β，γ-亚氨基)三磷酸(AMPPNP)和ssRNA的解旋后状态(DDX21-AMPPNP-ssRNA， 分辨率；空间群为P21)，以及结合二磷酸腺苷(ADP)的水解后状态(DDX21-ADP， 分辨率；空间群为P21)，和一套解旋循环以外的结合单磷酸腺苷AMP的结构(DDX21-AMP， 分辨率；空间群为P21)。DDX21的晶体结构及其活性口袋，以及相关结合或作用位点，为抗肿瘤药物的筛选、设计和抗RNA病毒类药物的研发提供有效的结构基础，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN106676082B
公开(公告)日：2020-09-01
申请号：CN201611212469.7
申请日：2016-12-25
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种一种来源于海洋细菌E4A9T的嗜低温蛋白酯酶E10及其表达纯化、晶体结构和应用。所述酯酶E10含205个氨基酸，分子量约为22.36kDa；在表达菌株BL21(DE3)中具有高度可溶性表达，嗜低温，并具有良好的耐盐、耐重金属性质。所述酯酶E10通过X射线衍射方法获得了其三维结构，分辨率达到1.9Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和3个310‑螺旋组成，其中，第29位丝氨酸、第178位天冬氨酸与第181位组氨酸所构成的催化三连体组成酶学活性中心；第29位丝氨酸、66位甘氨酸及97位天冬酰胺共同组成氧离子通道。该酯酶E10的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN110184254A
公开(公告)日：2019-08-30
申请号：CN201910215706.2
申请日：2019-03-21
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为具有高耐碱性的酯酶突变体及其应用。本发明涉及通过定点突变的方法提高来源于海洋细菌Croceicoccusmarinus E4A9T的酯酶CrmE10耐碱性；由此获得具有高耐碱性的酯酶突变体。所述酯酶CrmE10与其同家族酯酶AlinE4具有相似的三维结构，但耐碱性差异较大。通过序列比对分析结合结构比对分析，找出了五个与耐碱性相关的氨基酸位点。使用定点突变的方法将这五个位点突变，可以提高酯酶CrmE10的耐碱性。本发明的酯酶突变体及能表达酯酶突变体的宿主菌可用于催化酯类水解中。
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公开(公告)号：CN109913426A
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201910139184.2
申请日：2019-02-25
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种嗜热菌RNA连接酶RTCB在低温催化RNA连接和DNA环化中的应用。本发明包括：在70℃~37℃温度条件下，嗜热RTCB用于完成DNA环化激活反应，用于完成RNA环化的激活反应和RNA连接反应。本发明可应用于商业化生产，鉴于嗜热菌蛋白RTCB在纯化上的简便操作及广泛的温度适应性，将极大的拓阔其应用范围。在生物医药工业领域具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN109837259A
公开(公告)日：2019-06-04
申请号：CN201910134759.1
申请日：2019-02-24
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为来源于海洋细菌的嗜热酯酶晶体三维结构及其表达纯化方法。所述嗜热酯酶AlinE4含190个氨基酸，分子量约为20.5 kDa，等电点约为6.8；在表达菌株Escherichia coli BL21中具有高度可溶性表达，并且表现出良好的耐热、耐碱、耐盐、耐重金属性质；酯酶AlinE4通过X射线衍射的方法获得其三维结构，分辨率达到1.18Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和2个310-螺旋组成；其中，第13位丝氨酸、第162位天冬氨酸与第165位组氨酸构成酶学活性中心；第13位丝氨酸、50位甘氨酸及81位天冬酰胺组成氧离子通道。该酯酶AlinE4的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106676082A
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201611212469.7
申请日：2016-12-25
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种来源于海洋细菌E4A9T的嗜低温蛋白酯酶E10及其表达纯化、晶体结构和应用。所述酯酶E10含205个氨基酸，分子量约为22.36kDa；在表达菌株BL21(DE3)中具有高度可溶性表达，嗜低温，并具有良好的耐盐、耐重金属性质。所述酯酶E10通过X射线衍射方法获得了其三维结构，分辨率达到1.9 Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和3个310‑螺旋组成，其中，第29位丝氨酸、第178位天冬氨酸与第181位组氨酸所构成的催化三连体组成酶学活性中心；第29位丝氨酸、66位甘氨酸及97位天冬酰胺共同组成氧离子通道。该酯酶E10的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN111647577B
公开(公告)日：2023-02-10
申请号：CN202010442787.2
申请日：2020-05-22
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明涉及来源于人体的DEAD‑box RNA解旋酶DDX21的晶体结构和应用。所述RNA解旋酶DDX21包括野生型全长DDX21和DDX21解旋酶核心区域，均可结合三磷酸腺苷(ATP)和有效解旋双链RNA。DDX21解旋酶核心区域的晶体结构共有四套，RNA解旋的初始状态(DDX21‑apo，分辨率，空间群为C2)，结合三磷酸腺苷(β，γ‑亚氨基)三磷酸(AMPPNP)和ssRNA的解旋后状态(DDX21‑AMPPNP‑ssRNA，分辨率；空间群为P21)，以及结合二磷酸腺苷(ADP)的水解后状态(DDX21‑ADP，分辨率；空间群为P21)，和一套解旋循环以外的结合单磷酸腺苷AMP的结构(DDX21‑AMP，分辨率；空间群为P21)。DDX21的晶体结构及其活性口袋，以及相关结合或作用位点，为抗肿瘤药物的筛选、设计和抗RNA病毒类药物的研发提供有效的结构基础，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN109837259B
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN201910134759.1
申请日：2019-02-24
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为来源于海洋细菌的嗜热酯酶晶体三维结构及其表达纯化方法。所述嗜热酯酶AlinE4含190个氨基酸，分子量约为20.5 kDa，等电点约为6.8；在表达菌株Escherichia coli BL21中具有高度可溶性表达，并且表现出良好的耐热、耐碱、耐盐、耐重金属性质；酯酶AlinE4通过X射线衍射的方法获得其三维结构，分辨率达到1.18Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和2个310‑螺旋组成；其中，第13位丝氨酸、第162位天冬氨酸与第165位组氨酸构成酶学活性中心；第13位丝氨酸、50位甘氨酸及81位天冬酰胺组成氧离子通道。该酯酶AlinE4的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN110256540A
公开(公告)日：2019-09-20
申请号：CN201910223870.8
申请日：2019-03-22
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为结核分枝杆菌核糖体蛋白S7的表达纯化、晶体结构及其应用。本发明的蛋白S7含156个氨基酸，分子量约为17.6kDa，等电点约为10.56；在表达菌株Escherichia coli Rosetta(DE3)中具有高度可溶性表达，且纯度及均一性较好。所述核糖体蛋白S7通过X射线衍射的方法获得其三维结构，分辨率达到1.80Å，空间群为P212121。该结构整体上由6个α螺和2个β折叠组成，其中，由α螺旋1-α螺旋5组成的α螺旋束结构与其他核糖体上的其他蛋白具有相互作用，而连接在α3与α4之间的β发卡结构具有RNA识别的功能。该核糖体蛋白S7的三维结构在新型抗结核药物筛选中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN110256540B
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN201910223870.8
申请日：2019-03-22
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为结核分枝杆菌核糖体蛋白S7的表达纯化、晶体结构及其应用。本发明的蛋白S7含156个氨基酸，分子量约为17.6kDa，等电点约为10.56；在表达菌株Escherichia coli Rosetta(DE3)中具有高度可溶性表达，且纯度及均一性较好。所述核糖体蛋白S7通过X射线衍射的方法获得其三维结构，分辨率达到1.80Å，空间群为P212121。该结构整体上由6个α螺和2个β折叠组成，其中，由α螺旋1‑α螺旋5组成的α螺旋束结构与其他核糖体上的其他蛋白具有相互作用，而连接在α3与α4之间的β发卡结构具有RNA识别的功能。该核糖体蛋白S7的三维结构在新型抗结核药物筛选中具有广泛的应用前景。
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