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公开(公告)号：CN110343714A
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201810308380.3
申请日：2018-04-08
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种HBV中HBx蛋白核心区段HBxΔNΔC的纯化方法和HBxΔNΔC单克隆抗体。本发明通过改变原有纯化方法中各种缓冲液的配方和纯化工艺，得到有活性的、稳定的、均一的、高纯度的、单体的HBxΔNΔC样品，便于进行标准化、大规模的生产和制备；利用得到的HBxΔNΔC进一步制备得到鼠源HBxΔNΔC单克隆抗体和可稳定表达鼠源HBxΔNΔC单抗的杂交瘤细胞株。本发明方法得到的HBxΔNΔC以及HBxΔNΔC单抗可作为科学研究试剂，鼠源HBxΔNΔC单抗还可作为乙型肝炎病毒HBV感染疾病的检测试剂，将鼠源HBxΔNΔC单抗进行人源化可得到人源化的HBxΔNΔC单抗，可作为科学研究试剂、HBV感染疾病的检测试剂和辅助治疗制剂。
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公开(公告)号：CN109837259A
公开(公告)日：2019-06-04
申请号：CN201910134759.1
申请日：2019-02-24
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为来源于海洋细菌的嗜热酯酶晶体三维结构及其表达纯化方法。所述嗜热酯酶AlinE4含190个氨基酸，分子量约为20.5 kDa，等电点约为6.8；在表达菌株Escherichia coli BL21中具有高度可溶性表达，并且表现出良好的耐热、耐碱、耐盐、耐重金属性质；酯酶AlinE4通过X射线衍射的方法获得其三维结构，分辨率达到1.18Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和2个310-螺旋组成；其中，第13位丝氨酸、第162位天冬氨酸与第165位组氨酸构成酶学活性中心；第13位丝氨酸、50位甘氨酸及81位天冬酰胺组成氧离子通道。该酯酶AlinE4的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN109837259B
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN201910134759.1
申请日：2019-02-24
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为来源于海洋细菌的嗜热酯酶晶体三维结构及其表达纯化方法。所述嗜热酯酶AlinE4含190个氨基酸，分子量约为20.5 kDa，等电点约为6.8；在表达菌株Escherichia coli BL21中具有高度可溶性表达，并且表现出良好的耐热、耐碱、耐盐、耐重金属性质；酯酶AlinE4通过X射线衍射的方法获得其三维结构，分辨率达到1.18Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和2个310‑螺旋组成；其中，第13位丝氨酸、第162位天冬氨酸与第165位组氨酸构成酶学活性中心；第13位丝氨酸、50位甘氨酸及81位天冬酰胺组成氧离子通道。该酯酶AlinE4的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN111434676A
公开(公告)日：2020-07-21
申请号：CN201910026290.X
申请日：2019-01-11
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种乙型肝炎病毒HBV来源HBx蛋白包涵体的可溶化和纯化方法。该制备方法包括以下步骤：使用重组表达系统表达HBx；收集含有重组表达的HBx蛋白的细胞，在冷却条件下使用裂解缓冲液破细胞，收集含有HBx蛋白包涵体的部分；在上述获得的含有HBx蛋白包涵体的部分中，加入溶解缓冲液重悬，变性；对上述产物复性并去除核酸，纯化，获得HBx蛋白；上述步骤在小于等于10℃的环境条件下完成。使用本发明的方法可得到稳定均一的单体HBx样品，浓度可达到15mg/ml。该蛋白样品可以作为科学研究试剂，利用该蛋白样品还可以制备HBx的单克隆抗体。
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