全长启动子质粒PGL3-TREM-1的构建方法、其调控方法及其转录因子的筛选方法

    公开(公告)号:CN110699372B

    公开(公告)日:2023-01-13

    申请号:CN201911085329.1

    申请日:2019-11-08

    Abstract: 本发明提供全长启动子质粒PGL3‑TREM‑1的构建方法,包括以下过程:收集小鼠肝脏组织,抽提小鼠肝脏组织的DNA,并以所抽取的DNA为模板及根据TREM‑1启动子特异性引物进行PCR,获得的PCR产物连接至PGL3‑Basic载体,连接产物转化至DH5α感受态细胞,获得的阳性克隆进行酶切、PCR及测序鉴定,对所构建的PGL3‑TREM‑1进行活性鉴定,PGL3‑TREM‑1构建成功。本发明还提供全长启动子质粒PGL3‑TREM‑1的调控方法,根据调控需求选择以后抑制方法或增强方法;本发明的实施例另外还提供全长启动子质粒PGL3‑TREM‑1的转录因子的筛选方法。

    全长启动子质粒PGL3-TREM-1的构建方法、其调控方法及其转录因子的筛选方法

    公开(公告)号:CN110699372A

    公开(公告)日:2020-01-17

    申请号:CN201911085329.1

    申请日:2019-11-08

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明提供全长启动子质粒PGL3-TREM-1的构建方法,包括以下过程:收集小鼠肝脏组织,抽提小鼠肝脏组织的DNA,并以所抽取的DNA为模板及根据TREM-1启动子特异性引物进行PCR,获得的PCR产物连接至PGL3-Basic载体,连接产物转化至DH5α感受态细胞,获得的阳性克隆进行酶切、PCR及测序鉴定,对所构建的PGL3-TREM-1进行活性鉴定,PGL3-TREM-1构建成功。本发明还提供全长启动子质粒PGL3-TREM-1的调控方法,根据调控需求选择以后抑制方法或增强方法;本发明的实施例另外还提供全长启动子质粒PGL3-TREM-1的转录因子的筛选方法。

    let-7b和rSjp40在制备预防或治疗血吸虫感染肝纤维化药物方面的应用

    公开(公告)号:CN110684841A

    公开(公告)日:2020-01-14

    申请号:CN201911138441.7

    申请日:2019-11-20

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明提供提供let-7b和rSjp40在制备预防或治疗血吸虫感染肝纤维化药物方面的应用。主要呈现以下方面应用:(1)rSjP40在人LX-2细胞株中上调let-7b和其启动子的表达;(2)let-7b参与到rSjP40抑制人肝星状细胞的活化过程;(3)rSjP40可促进肝组织中let-7b表达增加,与胶原的表达水平呈负相关。本发明通过日本血吸虫重组虫卵蛋白P40(recombinant Schistosoma japonicum p40,rSjP40)抑制人肝星状细胞活化过程中let-7b的作用及分子机制,建立基于基因水平的抑制血吸虫感染肝纤维化,得到let-7b和rSjp40在制备预防或治疗血吸虫感染肝纤维化药物方面的应用,从而有望在未来解决血吸虫感染肝纤维化的问题。

    日本血吸虫SjP40蛋白的表达纯化方法及用途

    公开(公告)号:CN104558138A

    公开(公告)日:2015-04-29

    申请号:CN201510024897.6

    申请日:2015-01-19

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开了一种日本血吸虫SjP40蛋白的表达纯化方法及用途,包括重组表达质粒的构建与鉴定、设计引物,在引物两端加入限制性酶切位点及保护碱基、 pMD19-T- SjP40为模板进行PCR构建pET-28a-SjP40 重组质粒、重组蛋白的表达及纯化等步骤。并提供了日本血吸虫P40蛋白在制备抑制LX-2细胞中αα-SMA以及I型胶原在蛋白水平的表达的制剂中的应用、在制备抑制由TGF-β1诱导的LX-2细胞的活化的制剂中的应用。本发明方法简便、易操作,并提供了日本血吸虫P40蛋白的新用途。

    基因IL-32在监测日本血吸虫病肝纤维化发展过程中的应用及药物应用

    公开(公告)号:CN111560419A

    公开(公告)日:2020-08-21

    申请号:CN202010447548.6

    申请日:2020-05-25

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开一种基因IL-32在监测日本血吸虫病肝纤维化发展过程中的应用,其特征在于,具体包括以下过程:(1)、实验动物及其分组;(2)、实验小鼠取样;(3)、天狼星红染色检测肝脏胶原变化;(4)、实时定量荧光PCR检测肝脏α-SMA和Collagen-α1(I)的表达;(5)、Western Blot检测肝脏α-SMA的表达;本发明还公开基因IL-32在制备监测日本血吸虫病肝纤维化发展进程药物方面的应用;本发明另外还公开基因IL-32在制备治疗日本血吸虫病肝纤维化药物方面的应用。本发明通过小鼠模型实验,验证了IL-32能够监测日本血吸虫病肝纤维化发展过程的作用,并为IL-32在监测血吸虫病肝纤维化发展过程的药物应用提供了理论基础。

    TREM-2在监测血吸虫病肝纤维化进程的方法及应用

    公开(公告)号:CN111437380A

    公开(公告)日:2020-07-24

    申请号:CN202010448509.8

    申请日:2020-05-25

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开一种实验性动态监测血吸虫病肝纤维化发展过程的方法,其特征在于,采用动物模型动态监测TREM-2在血吸虫病肝脏中的表达方法。本发明还公开TREM-2在制备监测血吸虫病药物方面的应用。本发明另外还公开TREM-2在制备治疗血吸虫病药物方面的应用。本发明的实验性动态监测血吸虫病肝纤维化发展过程的方法中通过检测感染血吸虫的不同时间时,检测TREM-2在血吸虫病肝脏中的表达,从而监测肝纤维化发展过程,为监测肝纤维化发展过程,提供了新的靶点。

    TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用

    公开(公告)号:CN111549106A

    公开(公告)日:2020-08-18

    申请号:CN202010551297.6

    申请日:2020-06-17

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明提供一种TREM-1在监测血吸虫病肝纤维化发展过程方面的应用,其特征在于,采用动物模型动态监测TREM-1在血吸虫病肝脏中的表达方法。本发明还提供TREM-1在制备监测血吸虫病药物方面的应用。所述药物为药物试剂盒,所述药物试剂盒用于监测TREM-1的表达。本发明通过检测感染血吸虫的不同时间时,检测TREM-1在血吸虫病肝脏中的表达,从而监测肝纤维化发展过程,为监测肝纤维化发展过程,提供了新的监测靶点,从而提供一种新的药物试剂盒。

    日本血吸虫SjP40蛋白的表达纯化方法及用途

    公开(公告)号:CN104558138B

    公开(公告)日:2017-09-19

    申请号:CN201510024897.6

    申请日:2015-01-19

    Applicant: 南通大学

    Abstract: 本发明公开了一种日本血吸虫SjP40蛋白的表达纯化方法及用途,包括重组表达质粒的构建与鉴定、设计引物,在引物两端加入限制性酶切位点及保护碱基、pMD19‑T‑ SjP40为模板进行PCR构建pET‑28a‑SjP40 重组质粒、重组蛋白的表达及纯化等步骤。并提供了日本血吸虫P40蛋白在制备抑制LX‑2细胞中αα‑SMA以及I型胶原在蛋白水平的表达的制剂中的应用、在制备抑制由TGF‑β1诱导的LX‑2细胞的活化的制剂中的应用。本发明方法简便、易操作,并提供了日本血吸虫P40蛋白的新用途。

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