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公开(公告)号：CN102816711A
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201210045286.6
申请日：2012-02-27
Applicant: 南昌大学
Abstract: 本发明属于微生物领域，提供了一种双歧杆菌原生质体的制备与转化方法，将长双杆菌接种到MRS琼脂培养基厌氧培养，转种于MRS液体培养基中培养后以2.5-3.5%的接种量转接于新鲜MRS液体培养基中，36-38℃，厌氧培养18-20h；收集菌体，重悬；加变溶菌素至终浓度为4.5-5.5mg/L，36-38℃酶解25-35分钟；重悬于SMM溶液中，得到双歧杆菌原生质体。该方法制备的原生质体生成率达到81％，其再生率达到48％，可以应用于双歧杆菌的转化，引入外源基因，构建双歧杆菌的工程菌株。
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公开(公告)号：CN103146739B
公开(公告)日：2014-11-26
申请号：CN201310070885.8
申请日：2013-03-06
Applicant: 南昌大学
Abstract: 一种双歧杆菌功能基因无痕敲除方法的建立，该建立方法包括构建serpin基因自杀型打靶载体UPD；以pDG7为骨架，装载上双歧杆菌的启动子，构建双歧杆菌-大肠杆菌的穿梭表达载体pDG-Hup；在pDG-Hup基础上构建Cre酶基因的双歧杆菌-大肠杆菌穿梭表达载体pDG-hup-cre；将打靶载体转化入双歧杆菌，通过同源重组得到双歧杆菌serpin基因缺失株；利用位点特异性重组酶体系Cre-loxp系统，将双歧杆菌基因组中引入的壮观霉素spc基因移除，实现了双歧杆菌抗性基因的无痕敲除。本发明利用同源重组的原理获得双歧杆菌功能基因的缺失株，可应用于双歧杆菌功能基因的敲除，改良菌种。
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公开(公告)号：CN102816711B
公开(公告)日：2014-07-16
申请号：CN201210045286.6
申请日：2012-02-27
Applicant: 南昌大学
Abstract: 本发明属于微生物领域，提供了一种双歧杆菌原生质体的制备与转化方法，将长双杆菌接种到MRS琼脂培养基厌氧培养，转种于MRS液体培养基中培养后以2.5-3.5%的接种量转接于新鲜MRS液体培养基中，36-38℃，厌氧培养18-20h；收集菌体，重悬；加变溶菌素至终浓度为4.5-5.5mg/L，36-38℃酶解25-35分钟；重悬于SMM溶液中，得到双歧杆菌原生质体。该方法制备的原生质体生成率达到81％，其再生率达到48％，可以应用于双歧杆菌的转化，引入外源基因，构建双歧杆菌的工程菌株。
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公开(公告)号：CN103146739A
公开(公告)日：2013-06-12
申请号：CN201310070885.8
申请日：2013-03-06
Applicant: 南昌大学
Abstract: 一种双歧杆菌功能基因无痕敲除方法的建立，该建立方法包括构建serpin基因自杀型打靶载体UPD；以pDG7为骨架，装载上双歧杆菌的启动子，构建双歧杆菌-大肠杆菌的穿梭表达载体pDG-Hup；在pDG-Hup基础上构建Cre酶基因的双歧杆菌-大肠杆菌穿梭表达载体pDG-hup-cre；将打靶载体转化入双歧杆菌，通过同源重组得到双歧杆菌serpin基因缺失株；利用位点特异性重组酶体系Cre-loxp系统，将双歧杆菌基因组中引入的壮观霉素spc基因移除，实现了双歧杆菌抗性基因的无痕敲除。本发明利用同源重组的原理获得双歧杆菌功能基因的缺失株，可应用于双歧杆菌功能基因的敲除，改良菌种。
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