公开(公告)号：CN101525641A

公开(公告)日：2009-09-09

申请号：CN200810053749.7

申请日：2008-07-04

Applicant: 南开大学

Inventor： 白钢 ,  陈宁 ,  杨文博 ,  余养盛 ,  刘春琴 ,  段静静

IPC: C12P13/22 ,  C12P39/00 ,  C07C227/40 ,  C12R1/40 ,  C12R1/19

Abstract: 一种微生物酶法生产L－色氨酸的方法。本发明利用恶臭假单胞菌TS1138(Pseudomonas putidaTS1138)和高效表达色氨酸酶的大肠杆菌菌体的全细胞、菌体裂解液或固定化酶为酶源，从底物DL－2－氨基－Δ2－噻唑啉－4－羧酸(DL－2－amino－Δ2－thiazoline－4－carboxylic acid，DL－ATC)出发，经两步连续的或一步混合的酶促反应转化合成L－色氨酸，其纯化方法是，采用S8型大孔树脂去除含有L－色氨酸反应液中残留的DL－2－氨基－Δ2－噻唑啉－4－羧酸和吲哚，再在pH为5的条件下用NKA－II型大孔树脂吸附L－色氨酸，排除L－半胱氨酸的干扰，最后经乙醇洗脱、减压浓缩干燥，获得L－色氨酸，从而提供了一种新的L－色氨酸的绿色生产工艺路线。由于底物DL－ATC的生产成本较为低廉，因此本发明在L－色氨酸的工业化生产领域具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN102417900A

公开(公告)日：2012-04-18

申请号：CN201110365097.2

申请日：2011-11-17

Applicant: 天津启仁医药科技有限公司 ,  南开大学

Inventor： 高智慧 ,  张奇 ,  段静静 ,  刘磊 ,  姚瑞娟 ,  王文芳

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P41/00 ,  C12P13/12 ,  C12R1/38 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种ATC消旋酶和编码基因序列及其重组表达蛋白质的制备及应用。本发明所提供的来源于假单胞菌（保藏号CGMCC No.5315）的ATC消旋酶是序列表中SEQIDNo.1的氨基酸残基序列或将SEQ ID No.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的替代、缺失或添加具有与SEQ ID No.1相同活性的由SEQ ID No.1衍生的蛋白质。编码基因序列是序列表中SEQ ID No.2的核苷酸序列。本发明将来源于假单胞菌ATC消旋酶基因克隆并表达制备重组酶，可用于生物法将DL-ATC催化拆分成L-ATC，生成的L-ATC作为底物，可用于酶法生产L-半胱氨酸。

公开(公告)号：CN102140483A

公开(公告)日：2011-08-03

申请号：CN201110007890.5

申请日：2011-01-14

Applicant: 南开大学

Inventor： 张奇 ,  白钢 ,  侯洁 ,  白芳 ,  段静静

IPC: C12P13/22

Abstract: 一种固定化酶合成L-色氨酸的方法。本发明以固定化的色氨酸酶为酶源，以L-半胱氨酸和吲哚为底物，经酶法转化反应产生L-色氨酸，过滤去除固定化酶后进一步分离获得L-色氨酸。本发明使用GE树脂对色氨酸酶固定化后，优化后的最佳催化反应条件为，pH8.5；反应时间3h；底物浓度，10g/L L-半胱氨酸+10g/L吲哚；酶源细胞浓度，20mL/L；辅酶磷酸吡哆醛浓度，0.15g/L。在最适反应条件下，底物半胱氨酸的转化率为81.5%。由于采用固定化酶直接进行酶法合成，方便易行，催化效率高，发酵成本低，产物容易分离，因此本发明在L-色氨酸的工业化生产领域具有良好的产业化前景。

公开(公告)号：CN102417900B

公开(公告)日：2013-04-03

申请号：CN201110365097.2

申请日：2011-11-17

Applicant: 天津启仁医药科技有限公司 ,  南开大学

Inventor： 高智慧 ,  张奇 ,  段静静 ,  刘磊 ,  姚瑞娟 ,  王文芳

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P41/00 ,  C12P13/12 ,  C12R1/38 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种ATC消旋酶和编码基因序列及其重组表达蛋白质的制备及应用。本发明所提供的来源于假单胞菌（保藏号CGMCC No.5315）的ATC消旋酶是序列表中SEQ ID No.1的氨基酸残基序列或将SEQ ID No.1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的替代、缺失或添加具有与SEQIDNo.1相同活性的由SEQ ID No.1衍生的蛋白质。编码基因序列是序列表中SEQ ID No.2的核苷酸序列。本发明将来源于假单胞菌ATC消旋酶基因克隆并表达制备重组酶，可用于生物法将DL-ATC催化拆分成L-ATC，生成的L-ATC作为底物，可用于酶法生产L-半胱氨酸。

公开(公告)号：CN101974605A

公开(公告)日：2011-02-16

申请号：CN201010541214.1

申请日：2010-11-12

Applicant: 南开大学

Inventor： 张奇 ,  白钢 ,  侯洁 ,  白芳 ,  张玺 ,  段静静

IPC: C12P41/00 ,  C12P13/12 ,  C12R1/19

Abstract: 一种微生物酶法拆分DL-半胱氨酸制备D-胱氨酸的方法。本发明利用高效表达L-半胱氨酸脱巯基酶的重组大肠杆菌的菌体为酶源，以DL-半胱氨酸为底物，经酶促反应拆分DL-半胱氨酸生产D-半胱氨酸。酶促反应液过滤去除菌体后通过氧化使D-半胱氨酸氧化为D-胱氨酸，再调节pH至5.0，等电点结晶析出D-胱氨酸，收集沉淀，洗涤、精制后获得D-胱氨酸。本发明采用菌体直接进行酶法拆分，方便易行，催化效率高，发酵成本低，因此本发明在D-胱氨酸的工业化生产领域具有良好的产业化前景。同时本发明提供了一种新的D-胱氨酸的绿色生产工艺路线。